一种假单胞菌及其应用制造技术

本发明专利技术公开了生物农药技术领域的一种假单胞菌及其应用。所述菌株CSC

【技术实现步骤摘要】
一种假单胞菌及其应用


[0001]本专利技术属于生物农药
，尤其涉及一种假单胞菌及其应用。

技术介绍

[0002]稻纵卷叶螟Cnaphalocrocis medinalis(Guen
é
e)属鳞翅目(Lepidoptera)螟蛾科(Pyralidae)，是水稻生产上的重要害虫。除危害水稻外，还可以大麦、小麦、玉米等农作物为寄主。稻纵卷叶螟在东南亚和东北亚广有分布，在我国各个稻区均有分布，是我国长江流域以及南方稻区常发性的水稻害虫。稻纵卷叶螟主要在幼虫阶段取食寄主植物叶片，幼虫粪便的堆积会造成取食部位组织霉变，影响寄主植物的生长发育，造成作物减产，严重时可造成寄主植物枯死。
[0003]现阶段，对稻纵卷叶螟的防治主要依赖化学农药，化学农药以其见效快的特点广泛应用于稻纵卷叶螟的防治，然而长期使用化学农药会造成天敌误伤、农药残留和环境污染等问题，对人畜健康产生严重的威胁。生物防治方法虽不污染环境，但见效相对较慢，因此亟需筛选出具有高效抑制稻纵卷叶螟种群增长的生防菌株。

技术实现思路

[0004]针对现有技术的缺陷和不足，本专利技术提供了一种假单胞菌及其应用。
[0005]本专利技术的目的一是提供一种假单胞菌(Pseudomonas mosselii)，菌株为CSC
‑
1，其保藏编号GDMCC NO.62145。
[0006]本专利技术所述的CSC
‑
1菌株具有如下性质：
[0007]A、来源
[0008]菌株CSC
‑
1从患病稻纵卷叶螟幼虫提取。
[0009]B、形态特征
[0010]用2
×
YT培养平板培养基上30℃培养12h后，CSC
‑
1菌落为圆形，表面光滑，浅棕色，偏湿润，不透明，中央微凸。
[0011]C、菌种鉴定结果
[0012]利用细菌16S rDNA的通用引物27F(5
’‑
AGAGTTTGATCCTGGCTCAG
‑3’
)和1492R(5
’‑
ACGGTTACCTTGTTACGACTT
‑3’
)对所述CSC
‑
1菌株进行扩增并测序，测序结果分别在NCBI和Ribosomal Database ProjectBayesian rRNA(RDP)Classifier数据库中进行分析，最终确定所述菌株为摩氏假单胞菌(Pseudomonas mosselii)。
[0013]本专利技术的目的二是提供假单胞菌CSC
‑
1在防治稻纵卷叶螟中的应用。
[0014]本专利技术的目的三是提供一种生防菌剂，其包含所述的假单胞菌CSC
‑
1。
[0015]本专利技术的目的四是提供一种生物杀虫剂，其包含所述的假单胞菌CSC
‑
1。
[0016]本专利技术的目的五是提供一种生防菌剂的制备方法，包括：活化假单胞菌CSC
‑
1；将活化后的假单胞菌CSC
‑
1接种至种子培养基中进行种子培养，获得种子培养液；将所述种子培养液接种至发酵培养基中进行发酵培养，获得发酵液即为生防菌剂。
[0017]进一步地，所述种子培养基和发酵培养基为2
×
YT液体培养基；
[0018]优选地，按照质量百分比计算，2
×
YT液体培养基的配方为：胰蛋白胨1.55％、酵母提取物1.03％、氯化钠0.48％，余下为蒸馏水，pH为6.8～7.0；
[0019]优选地，将所述种子培养液以1％(v/v)接种量接种至发酵培养基。
[0020]进一步地，所述种子培养的条件为：37℃，200rpm/min，连续培养10h；
[0021]所述发酵培养的条件为：37℃，200rpm/min，连续培养24h。
[0022]进一步地，所述假单胞菌CSC
‑
1菌液的浓度为4.0
×
108～6.2
×
108CFU/mL。
[0023]本专利技术的目的六是提供所述生防菌剂、所述生物杀虫剂或所述制备方法制备得到的生防菌剂在防治稻纵卷叶螟中的应用。
[0024]进一步地，所述生防菌剂施用时，生防菌剂中假单胞菌的浓度为1.6
×
108～2.4
×
108CFU/mL。
[0025]本专利技术的有益效果为：
[0026]本专利技术提供的假单胞菌(Pseudomonas mosselii)CSC
‑
1能很好的抑制稻纵卷叶螟的种群增长，可用于制备生防菌剂和生物杀虫剂，防治鳞翅目害虫。
[0027]鳞翅目害虫稻纵卷叶螟低龄幼虫取食带有菌株CSC
‑
1菌液的小麦叶片后，所述菌株通过稻纵卷叶螟幼虫的取食行为进入纵卷叶螟幼虫体内，进而引起幼虫死亡，死亡率达60.95％～69％。
附图说明
[0028]图1为从稻纵卷叶螟幼虫体内分离培养的菌株CSC
‑
1的形态图，其中，A为菌株经过纯化后的划线平板；B为菌株CSC
‑
1的单菌落形态图。
[0029]图2为稻纵卷叶螟幼虫形态图，其中A为正常幼虫；B和C为感染CSC
‑
1菌株的幼虫。
[0030]图3为实施例3CSC
‑
1菌株杀虫活性测定结果。
[0031]图4为实施例4CSC
‑
1菌株杀虫活性测定结果。
[0032]保藏说明
[0033]本专利技术假单胞菌菌株CSC
‑
1的分类命名为摩氏假单胞菌Pseudomonas mosselii，其保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏地址为广州市先烈中路100号，广东省微生物研究所，59号楼5楼，保藏编号GDMCC NO.62145，保藏时间2021年12月20日。
具体实施方式
[0034]下面结合具体实施例对本专利技术进行详细说明。以下实施例有助于本领域技术人员进一步理解本专利技术，但不以任何形式限制本专利技术。下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
[0035]实施例1
[0036]CSC
‑
1菌株的分离纯化方法，所有的操作步骤均需在无菌环境中完成。具体步骤如下：1)用75％乙醇对患病稻纵卷叶螟幼虫进行表面消毒；2)用无菌水进行漂洗3次，确保洗净病虫体表残留的酒精；3)将完成表面消毒的虫体放入1.5mL无菌离心管中，加入1mL无菌水，用研磨棒研磨至虫体组织完全破碎；4)用无菌水将研磨液稀释106，取100μL加入到2
×
YT培养平板培养基上，涂抹均匀，并于30℃培养12h；5)挑取单菌落进行纯化培养，最终得到
的单菌落。2
×
YT培养基的成分为胰蛋白胨16g、酵母提取物10g、氯化钠5g，琼本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种假单胞菌(Pseudomonas mosselii)，菌株为CSC
‑
1，其保藏编号为GDMCC NO.62145。2.权利要求1所述的假单胞菌在防治稻纵卷叶螟中的应用。3.一种生防菌剂，其特征在于，所述生防菌剂包含权利要求1所述的假单胞菌。4.一种生物杀虫剂，其特征在于，所述生物杀虫剂包含权利要求1所述的假单胞菌。5.一种生防菌剂的制备方法，其特征在于，包括：活化假单胞菌CSC
‑
1；将活化后的假单胞菌CSC
‑
1接种至种子培养基中进行种子培养，获得种子培养液；将种子培养液接种至发酵培养基中进行发酵培养，获得发酵液即为生防菌剂。6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述种子培养基和发酵培养基为2
×
YT液体培养基；优选地，按照质量百分比计算，2
×
YT液体培养基的配方为：胰蛋白胨1.55％、酵...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘芳，潘秦剑，程世昌，金融，
申请(专利权)人：扬州大学，
类型：发明
国别省市：