一种用于检测活性氧化物的透明质酸-金纳米结构的制备方法技术

本发明专利技术涉及活性氧化物检测及金纳米应用技术领域，公开了一种用于检测活性氧化物的透明质酸

【技术实现步骤摘要】
一种用于检测活性氧化物的透明质酸
‑
金纳米结构的制备方法


[0001]本专利技术涉及活性氧化物检测及金纳米应用
，特别涉及一种用于检测活性氧化物的透明质酸
‑
金纳米结构的制备方法。

技术介绍

[0002]活性氧化物(Reactive Oxygen Species，ROS)广泛存在于人体各种组织中，参与了人体许多疾病的发生发展过程，在疾病的诊断、治疗及预防方面有重要的意义。因此，ROS的检测具有重要的理论价值和现实意义。
[0003]荧光分析法是一种检测ROS的常用方法，具有简单易行、便于操作、灵敏性高等优点，但现有技术的荧光探针的制备步骤复杂，涉及反应设备较多，对参数要求条件苛刻，且可能会用到有毒试剂，因此，如何通过更简单、更安全、更快捷的制备ROS荧光探针是本领域的焦点。

技术实现思路

[0004]本专利技术提供了一种用于检测活性氧化物的透明质酸
‑
金纳米结构的制备方法，通过巯基化透明质酸，实现HA
‑
GNP的自组装团聚，形成HA
‑
HS
‑
GNP
‑
RHODAMINEB；制备方法简单，制备过程中不需要添加有毒溶剂，不需要严格的合成条件，对ROS的检测主要基于荧光染料会因金纳米表面的FRET作用发生一定程度的荧光淬灭效应，而ROS与HA发生作用使得荧光得到恢复，从而用于活性氧化物的荧光检测。
[0005]本专利技术提供了一种用于检测活性氧化物的透明质酸<br/>‑
金纳米结构的制备方法，包括：
[0006]S1、称量850mg低聚化透明质酸完全溶解于50mL纯水中，搅拌均匀备用；
[0007]S2、将配制好的透明质酸溶液置于磁力加热搅拌器上加热搅拌，参数为500rpm、70℃；观察升温情况至70℃时，逐滴加入氯金酸溶液，改变参数为400rpm、90℃，持续加热40min，当溶液出现颜色变化后关闭加热，持续搅拌20min直至溶液冷却至室温，将最终HA
‑
GNP溶液转移至离心管/样品瓶中封装后于4℃下避光存储，最终得到HA
‑
GNP溶液备用；
[0008]S3、通过巯基化合成方法活化HA的羧基，并通过枝接胱氨盐酸盐的氨基，形Cys
‑
HA，在DTT的帮助下，打开Cys
‑
HA中的二硫键，最终获取HA
‑
HS；
[0009]S4、取出配制好的HA
‑
HS和HA
‑
GNP溶液，按比例混匀配制成溶液后置于超声机中超声过夜，获得带有荧光标记的HA
‑
HS
‑
GNP
‑
RHODAMINEB光学探针。
[0010]进一步地，步骤S3具体包括：
[0011]S31、配置pH8.5硼酸缓冲液，加入400mg低聚化透明质酸，240mg半胱胺盐酸盐，用封口膜密封避光放置2h，等待化学键形成，之后在溶液中加入150mg硼氢化钠，可观察到溶液剧烈产气反应，继续密封过夜；
[0012]S32、滴加HCl溶液至步骤S31中溶液调节pH至5
‑
6，加入EDC后混匀24h；
[0013]S33、再次调整pH至7
‑
9，逐滴加入DTT密封在40℃水浴锅内加热5天，等待巯基生成；
[0014]S34、最后调节pH至中性取出多余DTT后将溶液转移至截留分子量为2000的透析袋中透析24
‑
48h来获得巯基化修饰的透明质酸，即HA
‑
HS，然后将溶液吸出至离心管/样品瓶中密封，放至4℃冰箱中保存。
[0015]进一步地，所述步骤S2中的颜色变化依次为黄色
‑
透明
‑
红色。
[0016]进一步地，步骤S4中，HA
‑
HS和HA
‑
GNP溶液的混匀比例为2mLHA
‑
GNP:1mLHAHS:0.01mg RHODAMINEB。
[0017]进一步地，截留分子量为2000的透析袋中为纯水，pH值为5
‑
7。
[0018]本专利技术的有益效果为：
[0019]本专利技术将低聚化透明质酸溶于水并搅拌均匀，并置于磁力加热搅拌器上加热搅拌，至70℃，逐滴加入氯金酸溶液，继续加热40分钟，当溶液出现颜色变化时(黄色
‑
透明
‑
红色)后关闭加热，持续搅拌直至冷却至室温，得到透明质酸(HA)
‑
金纳米(GNP)溶液；通过巯基化合成方法活化HA的羧基，并通过枝接胱氨盐酸盐的氨基，形Cys
‑
HA。然后在DTT的帮助下，打开Cys
‑
HA中的二硫键，最终获取HA
‑
HS；将HA
‑
HS与HA
‑
GNP、RHODAMINEB比例混匀后获得带有荧光标记的HA
‑
HS
‑
GNP
‑
RHODAMINEB光学探针。本专利技术对ROS的检测是由于荧光染料会因金纳米表面的FRET作用发生一定程度的荧光淬灭效应，而ROS与HA发生作用可以使得荧光得到恢复，从而发出不同的荧光。
附图说明
[0020]图1为本专利技术实施例1制得的HA
‑
GNP的粒径及Zeta电位图。
[0021]图2为本专利技术实施例1制得的HA
‑
GNP的扫描、透射电镜图。
[0022]图3为本专利技术实施例2制得的HA
‑
HS
‑
GNP
‑
RHODAMINEB的粒径和zeta电位图。
[0023]图4为本专利技术实施例2制得的HA
‑
HS
‑
GNP
‑
RHODAMINEB扫描、透射电镜图。
[0024]图5为本专利技术实施例1制得的HA
‑
GN与不同H2O2溶液浓度的紫外图谱。
[0025]图6为本专利技术实施例2制得的HA
‑
HS
‑
GNP
‑
RHODAMINEB荧光强度(550nm波长处)与H2O2溶液浓度的关系图。
[0026]本专利技术目的的实现、功能特点及优点将结合实施例，参照附图做进一步说明。
具体实施方式
[0027]应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。
[0028]下属实施例中所涉及的仪器、试剂、材料等，若无特殊说明，均为现有技术中已有的常规仪器、试剂、材料等，可通过正规商业途径获得。下述实施例中所涉及的实验方法、检测方法等，若无特别说明，均为现有技术中已有的常规实验方法、检测方法等。
[0029]实施例1
[0030本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于检测活性氧化物的透明质酸
‑
金纳米结构的制备方法，其特征在于，包括：S1、称量850mg低聚化透明质酸完全溶解于50mL纯水中，搅拌均匀备用；S2、将配制好的透明质酸溶液置于磁力加热搅拌器上加热搅拌，参数为500rpm、70℃；观察升温情况至70℃时，逐滴加入氯金酸溶液，改变参数为400rpm、90℃，持续加热40min，当溶液出现颜色变化后关闭加热，持续搅拌20min直至溶液冷却至室温，将最终HA
‑
GNP溶液转移至离心管/样品瓶中封装后于4℃下避光存储，最终得到HA
‑
GNP溶液备用；S3、通过巯基化合成方法活化HA的羧基，并通过枝接胱氨盐酸盐的氨基，形Cys
‑
HA，在DTT的帮助下，打开Cys
‑
HA中的二硫键，最终获取HA
‑
HS；S4、取出配制好的HA
‑
HS和HA
‑
GNP溶液，按比例混匀配制成溶液后置于超声机中超声过夜，获得带有荧光标记的HA
‑
HS
‑
GNP
‑
RHODAMINEB光学探针。2.根据权利要求1所述的用于检测活性氧化物的透明质酸
‑
金纳米结构的制备方法，其特征在于，步骤S3具体包括：S31、配置pH8.5硼酸缓冲液，加入400mg低聚化透明质酸，240mg半胱胺盐酸盐，用封口膜...

【专利技术属性】
技术研发人员：付晓玲，邱睿韫，陈其锐，周斌，张虹俊，邓汝林，蔡升豪，夏勇，
申请(专利权)人：南昌大学第二附属医院，
类型：发明
国别省市：