一个定向突变及遗传改造的重组质粒及其应用制造技术

本发明专利技术提供一个用于耐辐射球菌目的基因定向突变和染色体遗传改造的重组基因，具有ＳＥＱ？ＩＤ？№：１的核苷酸序列，是表达耐辐射球菌热激蛋白ＧｒｏＥＬ基因的启动子ＰｇｒｏＥＬ与卡那霉素抗性基因ＫａｎＲ的融合ＤＮＡ片段。本发明专利技术的基因片段位于质粒ｐＲＡＤＫ，该质粒可以在耐辐射球菌中正常复制并遗传，而且在大肠杆菌中也有较高的拷贝数，因而可以有较高产量，很容易得到大量质粒，进而可以从该质粒到得到ＳＥＱ？ＩＤ？№：１的序列，可在构建耐辐射球菌以及耐辐射球菌属其它菌株的目的基因突变株的筛选标记中应用；也可在构建耐辐射球菌以及耐辐射球菌属其它菌株遗传改造成工程菌的筛选标记中应用。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一个定向突变及遗传改造的重组质粒，其特征在于，具有ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ：１的核苷酸序列，是表达耐辐射球菌热激蛋白ＧｒｏＥＬ基因的启动子ＰｇｒｏＥＬ与卡那霉素抗性基因ＫａｎＲ的融合ＤＮＡ片段，通过以下步骤获得：构建ＰｇｒｏＥＬ启动子与卡那霉素结构基因的紧密融合，并在接合位点作了变动，ＰｇｒｏＥＬ启动子核糖体结合位点（ＲＢＳ）后的ＣＡＣＡＴＧ替换成ＣＡＴＡＴＧ（即ＮｄｅＩ酶切位点），该酶切位点的后三个碱基ＡＴＧ作为卡那霉素抗性基因起始翻译位点。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：华跃进，陆辉明，高冠军，黄丽芬，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：86[中国|杭州]