本发明专利技术涉及一种滴水珠组培快速繁殖的方法，１）外植体的选取与灭菌：取滴水珠叶柄、叶片、珠芽及新鲜块茎，作为组培用的外植体；２）诱导培养：在无菌条件下将外植体切段接种在诱导培养基上，通过诱导形成愈伤组织，然后诱导丛芽、生根，形成组培苗、珠芽；３）增殖培养：将外植体切段在增殖培养基上，经愈伤组织大量增殖，然后诱导丛芽、形成组培苗、珠芽；４）生根培养：将组培苗及珠芽接种到生根培养基中进行生根培养；５）组培苗的驯化与移栽。本发明专利技术优点是：可使野生滴水珠变家种，便于工厂化生产，繁殖系数高；通过组培阶段的定向诱变，能够筛选变异体，获得抗病、抗逆等品种；能够提高有效成分的含量和得率，改善药材品质。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及植物组织培养技术，主要是一种滴水珠组培快速繁殖的方法。
技术介绍
滴水珠(Plnellia cordata N.B.Br.)又名独叶一枝花，为天南星科植物，生于山地阴湿的草丛中、岩石边或陡峭的石壁上。主要以块茎入药，性温，味辛，有小毒。消肿解毒，散瘀止痛。在临床上治疗毒蛇咬伤、头痛、胃痛、腰痛、跌打损伤、疗疮初起、深部脓肿、颈淋巴结核、乳腺炎、肿瘤等验方中都被使用。特别用于治疗毒蛇咬伤有较好效果，故近年来常见有载于地区性中草药手册中。预试有氨基酸，薄层层析有β-谷甾醇和β-谷甾醇-D-葡萄糖甙相应的斑点。由于本种植物用途广泛、药效显著，药农大肆不加保护采掘，使之处于濒危境地。开展人工栽培已成为当务之急。滴水珠自然繁殖方式主要通过小块茎和珠芽繁殖，但繁殖系数低。并且在国内尚未见有组织培养和人工栽培的报道，为此利用现代植物组织培养技术，快速繁殖滴水珠种苗或珠芽，并运用无土栽培等农业新技术，使野生滴水珠变家种，进行滴水珠的现代化(规范化、标准化)生产，生产绿色无公害中草药，以有效保护野生资源，解决中药材来源匮乏的问题，满足人民用药需要，这对发展我国中医药事业具有重要意义。
技术实现思路
本专利技术要解决上述现有技术的缺陷，提供一种滴水珠组培快速繁殖的方法。本专利技术解决其技术问题采用的技术方案。这种滴水珠组培快速繁殖的方法，1)、外植体的选取与灭菌取滴水珠叶柄、叶片、珠芽及新鲜块茎，经灭菌处理，作为组培用的外植体；2)、诱导培养在无菌条件下将外植体切段或切块接种在诱导培养基上，通过诱导形成愈伤组织，然后诱导丛芽、生根，形成组培苗、珠芽；3)、增殖培养再在无菌条件下将叶柄、叶片、珠芽和愈伤组织等外植体切段或切块接种在增殖培养基上，经愈伤组织大量增殖，然后诱导丛芽、形成组培苗、珠芽；4)、生根培养将组培苗生长达2～3厘米及珠芽接种到生根培养基中进行生根培养；5)、组培苗的驯化与移栽当组培生长达3～5厘米以上或珠芽达0.2厘米以上，栽入沙质土或其它基质中。基本培养基选用MS培养基，蔗糖用体积的2～3％，琼脂用体积的0.7％～0.9％，pH5.6～5.8；诱导培养基为MS+6-BA0.2～1.0mg/L+NAA0.1～0.5mg/L或MS+6-BA0.2～1.0mg/L+IBA 0.1～0.5mg/L；增殖培养基为MS+6-BA0.2～1.0mg/L+NAA 0.1～0.5mg/L或MS+6-BA0.2～1.0mg/L+IBA 0.1～0.5mg/L；生根培养基为MS或1/2MS+NAA 0.1～0.5mg/L或IBA 0.1～0.5mg/L；诱导培养、增殖培养和生根培养的条件是，培养温度25±2℃，光强1500～2500LX，光照时间10～12h/d。本专利技术有益的效果是1、应用植物组织培养方法生产滴水珠种苗或珠芽，具有不受地区、季节与气候限制，便于工厂化生产，繁殖系数高，年组培苗生产能力可达100万苗以上，为该品种的深度系列开发提供了种苗基础，是进行GAP药材生产的关键技术和保障。2、利用植物组织培养方法，快速繁殖滴水珠种苗或珠芽，并运用无土栽培等农业新技术，可使野生滴水珠变家种，进行滴水珠的现代化(规范化、标准化)生产，生产绿色无公害中草药，以便有效保护野生资源，解决中药材来源匮乏的问题，满足人民用药需要。3、有效解决生产上无栽培品种的现状，在近期内形成第一个滴水珠栽培种。通过指纹图谱和其它知识产权的登记申报保护开发商的利益。4、遗传背景一致、药效成份稳定和栽培特征一致的新品种，便于国家进行行业管理、便于产后加工、销售提供保障条件。5、通过组培阶段的定向诱变，能够筛选变异体，获得抗病、抗逆等品种；能够提高有效成份的含量和得率，进一步改善药材品质。具体实施例方式下面结合实施例对本专利技术作进一步介绍但本专利技术的内容并不局限于此。实施例1滴水珠组培快速繁殖方法1、培养基及培养条件诱导、增殖、生根基本培养均为MS基本培养基，蔗糖用体积的2～3％，琼脂用体积的0.7％～0.9％，pH5.6～5.8；诱导培养基为MS+6-BA0.2～1.0mg/L+NAA 0.1～0.5mg/L或MS+6-BA0.2～1.0mg/L+IBA 0.1～0.5mg/L；增殖培养基为MS+6-BA0.2～1.0mg/L+NAA0.1～0.5mg/L或MS+6-BA0.2～1.0mg/L+IBA 0.1～0.5mg/L；生根培养基为MS或1/2MS+NAA0.1～0.5mg/L或IBA0.1～0.5mg/L；诱导培养、增殖培养和生根培养的条件是，培养温度25±2℃，光强1500～2500LX，光照时间10～12h/d。2、外植体的处理与灭菌采用滴水珠幼嫩的叶柄、叶片、珠芽及新鲜块茎，用洗涤剂和自来水冲洗干净后，经75％酒精浸泡0.5～1.0min，再用0.1％升汞溶液灭菌10～15min，或用2％的次氯酸钠水溶液灭菌10～15min，然后用无菌水冲洗3～5次，再在无菌条件下将外植体切成切段或切块接种在适宜的诱导培养基上。3、诱导培养在无菌条件下将外植体切段或切块接种在诱导培养基上，通过诱导形成愈伤组织，然后诱导丛芽、生根、，形成组培苗、珠芽；诱导培养基为MS+6-BA0.2～1.0mg/L+NAA 0.1～0.5mg/L或MS+6-BA0.2～1.0mg/L+IBA 0.1～0.5mg/L。4、增殖培养再在无菌条件下将叶柄、叶片、珠芽和愈伤组织等外植体切段或切块接种在增殖培养基上，经愈伤组织大量增殖，然后诱导丛芽、形成组培苗、珠芽；增殖培养基为MS+6-BA0.2～1.0mg/L+NAA 0.1～0.5mg/L或MS+6-BA0.2～1.0mg/L+IBA 0.1～0.5mg/L；。5、生根培养将组培苗生长达2～3厘米及珠芽接种到生根培养基中进行生根培养；适宜的生根培养基为MS或1/2MS+NAA0.1～0.5mg/L或IBA0.1～0.5mg/L。6、组培苗的驯化与移栽当组培苗生长达3～5厘米以上或珠芽达0.2厘米以上，长出发达根系时，先进行组培苗驯化，将培养瓶移到常温下放置3天左右，再打开瓶盖，3天后取出组培苗，洗去根部培养基后栽入沙质土或其它基质中，最初两周适当遮阴，注意保持基质湿度，成活率90％以上。实施例2滴水珠组培快速繁殖方法采用滴水珠幼嫩的叶柄、叶片、珠芽及新鲜块茎，经75％酒精浸泡0.5～1.0min，再用0.1％升汞溶液灭菌10～15min，或用2％的次氯酸钠水溶液灭菌10～15min，然后用无菌水冲洗3～5次，再在无菌条件下将外植体切段或切块接种在诱导培养基上，基本培养基为MS，蔗糖用体积的3％，琼脂用体积的0.7％，pH5.8，附加植物激素组合为MS+6-BA 1.0mg/L+NAA0.2mg/L。诱导形成愈伤组织，然后诱导丛芽、生根，形成组培苗、珠芽。再在无菌条件下将叶柄、叶片、珠芽和愈伤组织等外植体切段或切块接种在增殖培养基MS+6-BA 0.5mg/L+NAA0.2mg/L上，经愈伤组织大量增殖，然后诱导丛芽、形成组培苗、珠芽；将组培苗生长达2～3厘米及珠芽接种到生根培养基MS或1/2MS+NAA 0.25mg/L或IBA 0.25mg/L中进行生根培养；培养温度25±2℃，光强1500～2500 LX，光照时间1本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种滴水珠组培快速繁殖的方法，其特征在于： １）、外植体的选取与灭菌：取滴水珠叶柄、叶片、珠芽及新鲜块茎，经灭菌处理，作为组培用的外植体； ２）、诱导培养：在无菌条件下将外植体切段或切块接种在诱导培养基上，通过诱导形成愈伤组织，然后诱导丛芽、生根，形成组培苗、珠芽； ３）、增殖培养：再在无菌条件下将叶柄、叶片、珠芽和愈伤组织等外植体切段或切块接种在增殖培养基上，经愈伤组织大量增殖，然后诱导丛芽、形成组培苗、珠芽； ４）、生根培养：将组培苗生长达２～３厘米及珠芽接种到生根培养基中进行生根培养； ５）、组培苗的驯化与移栽：当组培生长达３～５厘米以上或珠芽达０．２厘米以上，栽入沙质土或其它基质中； 基本培养基选用ＭＳ培养基，蔗糖用体积的２～３％，琼脂用体积的０．７％～０．９％，ｐＨ５．６～５．８；诱导培养基为ＭＳ＋６－ＢＡ０．２～１．０ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．１～０．５ｍｇ／Ｌ或ＭＳ＋６－ＢＡ０．２～１．０ｍｇ／Ｌ＋ＩＢＡ０．１～０．５ｍｇ／Ｌ；增殖培养基为ＭＳ＋６－ＢＡ０．２～１．０ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．１～０．５ｍｇ／Ｌ或ＭＳ＋６－ＢＡ０．２～１．０ｍｇ／Ｌ＋ＩＢＡ０．１～０．５ｍｇ／Ｌ；生根培养基为ＭＳ或１／２ＭＳ＋ＮＡＡ０．１～０．５ｍｇ／Ｌ或ＩＢＡ０．１～０．５ｍｇ／Ｌ；诱导培养、增殖培养和生根培养的条件是，培养温度２５±２℃，光强１５００～２５００ＬＸ，光照时间１０～１２ｈ／ｄ。...
【技术特征摘要】
1.一种滴水珠组培快速繁殖的方法，其特征在于1)、外植体的选取与灭菌取滴水珠叶柄、叶片、珠芽及新鲜块茎，经灭菌处理，作为组培用的外植体；2)、诱导培养在无菌条件下将外植体切段或切块接种在诱导培养基上，通过诱导形成愈伤组织，然后诱导丛芽、生根，形成组培苗、珠芽；3)、增殖培养再在无菌条件下将叶柄、叶片、珠芽和愈伤组织等外植体切段或切块接种在增殖培养基上，经愈伤组织大量增殖，然后诱导丛芽、形成组培苗、珠芽；4)、生根培养将组培苗生长达2～3厘米及珠芽接种到生根培养基中进行生根培养；5)、组培苗的驯化与移栽当组培生长达3～5厘米以上或珠芽达0.2厘米以上，栽入沙质土或其它基质中；基本培养基选用MS培养基，蔗糖用体积的2～3％，琼脂用体积的0.7％～0.9％，pH5.6～5.8；诱导培养基为MS...
【专利技术属性】
技术研发人员：徐刚，汪一婷，牟豪杰，吕永平，陈剑平，陈炯，
申请(专利权)人：浙江省农业科学院，
类型：发明
国别省市：86[中国|杭州]
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