羊绒细度功能基因KRT和TCHH的分型应用制造技术

本发明专利技术涉及羊绒细度功能基因技术领域，具体为羊绒细度功能基因KRT26和TCHH的分型应用，具体为羊绒细度功能基因KRT26和TCHH的分型应用，包括：绒山羊血样采集：所述提取DNA的血液样本为1毫升，所述采血后放入含有EDTA的采血管中，

【技术实现步骤摘要】
羊绒细度功能基因KRT和TCHH的分型应用


[0001]本专利技术涉及羊绒细度功能基因
，具体为羊绒细度功能基因KRT26和TCHH的分型应用。

技术介绍

[0002]当下羊绒细度相关研究众多，功能基因研究占有一定份额。但是对KRT26和TCHH基因对于绒细度的影响鲜有报道。
[0003]羊绒细度变厚是羊绒育种的关键问题之一，但对羊绒细度的分子调控还没有系统的研究，通过序列比对和PCR
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seq多态性检测LCG中KRT26和TCHH基因的潜在单核苷酸多态性(SNPs)，并通过SPSS软件分析其对生产性能的影响，检测到两个基因的两个SNP位点(A559T和A6839G)，KRT26基因中的A559T位点AA基因型为优势基因型，TCHH基因中的A6839G位点AG和GG为优势基因型，AAAA为显性单倍型组合，结果表明，KRT26和TCHH基因与羊绒细度相关，A559T(AA)和A6839G(GG)基因型是羊绒细度的首选标记基因型，这为羊绒细度的进一步研究提供了更多的理论依据，因此亟需设计羊绒细度功能基因KRT26和TCHH的分型应用来解决上述问题。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于提供羊绒细度功能基因KRT26和TCHH的分型应用，以解决上述
技术介绍
中提出的通过序列比对和PCR
‑
seq多态性检测LCG中KRT26和TCHH基因的潜在单核苷酸多态性，并通过SPSS软件分析其对生产性能的影响，检测到两个基因的两个SNP位点的问题。
[0005]为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案，羊绒细度功能基因KRT26和TCHH的分型应用，包括：
[0006]绒山羊血样采集：
[0007]所述提取DNA的血液样本为1毫升，所述采血后放入含有EDTA的采血管中，
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20℃保存。
[0008]DNA的提取：
[0009]所述DNA提取使用EZ
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10旋转柱血液基因组DNA纯化试剂盒，
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20℃保存。
[0010]产绒性能数据：
[0011]所述羊绒数据由畜牧科学研究院进行采集与统计分析。
[0012]引物设计：
[0013]所述根据KRT26和TCHH序列设计引物，得到目的基因片段。
[0014]产物扩增：
[0015]所述按照对应程序进行产物扩增，所述扩增结束以后取混匀的5uL产物和1uL样品缓冲液于电泳中(1.0％琼脂糖凝胶)。
[0016]优选的，所述使用Ezup柱式血液基因组DNA抽提试剂盒提取绒山羊血液中的DNA。
[0017]优选的，所述PCR反应结束后，选择一个清晰的、单一的目的片段，测序结果与KRT26和TCHH基因序列进行比较，发现两个突变位点，在KRT26基因中检测到1个SNP，在TCHH基因中检测到1个SNP。
[0018]优选的，所述SNP序列分析检测到2个等位基因(U，u)和3个基因型(UU,Uu,uu)，这两种多肽在LCG群体中的基因频率和基因型频率存在显著差异，所述T和A基因频率大于0.5为优势等位基因，TT和AA基因型为优势等位基因，所述A559T和A6839G的多肽信息含量(PIC)均小于0.25，属于低等级多肽。
[0019]优选的，两个位点的杂合度(He)较低，说明群体的遗传变异可能较低，有效等位基因数(Ne)也较低，说明群体在发生选择、突变或遗传漂变时维持等位基因的能力较差。总体不处于H
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W平衡。世代遗传中基因频率和基因型频率不稳定，人工选择强度高。
[0020]优选的，所述加入5uLMarker作为对照，所述电泳条件设置为120V，300mA，20min，所述电泳结束之后将胶板取出放在照胶仪器中观察目的条带，所述把清晰的条带进行拍照记录，随后将合格的产物送往上海生工单向测序，进行序列比对，SNP图谱分析，突变位点碱基识别和基因型确定。
[0021]与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：
[0022]1、利用SNP对辽宁绒山羊羊绒细度基因KRT26和TCHH进行基因分型，找到SNP位点并对SNP位点进行遗传多样性分析，而且与生产性能进行相关性分析，确定影响羊绒细度的基因型及单倍型组合，并进行BE4单碱基基因编辑设计，有利于促进辽宁绒山羊的选育及改良，推动了绒用羊基因育种工作的进展，为培育更细型绒用羊提供理论支撑。
[0023]2、KRT26基因A559T位点的AA基因型和TCHH基因A6839G位点的GG基因型是生产性能的优势基因型，并通过BE4单碱基基因编辑技术获得羊绒细度功能基因的单碱基突变阳性细胞和质粒，为辽宁绒山羊的育种工作提供了新的数据体系，可作为未来辽宁绒山羊育种辅助选择的分子标记。
附图说明
图1为本专利技术琼脂糖凝胶检测DNA示意图；图2为本专利技术KRT26和TCHH基因的PCR扩增产物示意图；图3为本专利技术SNP在KRT26和TCHH基因CDS区的分布示意图。
具体实施方式
[0024]下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0025]本专利技术提供的一种实施例：
[0026]羊绒细度功能基因KRT26和TCHH的分型应用，包括：
[0027]实验动物
[0028]在辽宁省畜牧科学研究院选取1540只平均体重55kg、3岁的母羊。采集后的样品无污染的保存在本实验室。
[0029]绒山羊血样采集
[0030]提取DNA的血液样本为1毫升。采血后放入含有EDTA的采血管中，
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20℃保存。
[0031]DNA的提取
[0032]DNA提取使用上海生物工程有限公司(中华人民共和国上海)EZ
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10旋转柱血液基因组DNA纯化试剂盒，
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20℃保存。
[0033]产绒性能数据
[0034]辽宁绒山羊的羊绒数据由辽宁省畜牧科学研究院进行采集与统计分析。
[0035]引物设计
[0036]根据KRT26和TCHH序列(NCBI参考序列:NC_030826.1，NC_030810.1)设计引物，得到目的基因片段(表1)。引物由上海生物工程有限公司(中华人民共和国上海)合成。
[0037]表1 KRT26和TCHH基因目的片段扩增及分型引物
[0038][0039]产物扩增
[0040]PCR反应体系为50uL(表2)，PCR反应条件如表所示(表3)，按照对应程序进行产物扩增，扩增结束以后取混匀的5uL产物和1uL样品缓冲液于电泳中(1.0％琼脂糖凝胶)，同时加入5uLMarker作为对照，电泳条件设置为120V，300mA，2本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.羊绒细度功能基因KRT26和TCHH的分型应用，其特征在于，包括：绒山羊血样采集：所述提取DNA的血液样本为1毫升，所述采血后放入含有EDTA的采血管中，
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20℃保存。DNA的提取：所述DNA提取使用EZ
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10旋转柱血液基因组DNA纯化试剂盒，
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20℃保存。产绒性能数据：所述羊绒数据由畜牧科学研究院进行采集与统计分析。引物设计所述根据KRT26和TCHH序列设计引物，得到目的基因片段。产物扩增所述按照对应程序进行产物扩增，所述扩增结束以后取混匀的5uL产物和1uL样品缓冲液于电泳中(1.0％琼脂糖凝胶)。2.根据权利要求1所述的羊绒细度功能基因KRT26和TCHH的分型应用，其特征在于：所述使用Ezup柱式血液基因组DNA抽提试剂盒提取绒山羊血液中的DNA。3.根据权利要求1所述的羊绒细度功能基因KRT26和TCHH的分型应用，其特征在于：所述PCR反应结束后，选择一个清晰的、单一的目的片段，测序结果与KRT26和TCHH基因序列进行比较，发现两个突变位点，在KRT26基因中检测到1个SNP，在TCHH基因中检测到1个SNP。4.根据权利要求3所述的羊绒细...

【专利技术属性】
技术研发人员：王泽英，秦宇婷，徐亚男，郭素平，丛玉艳，豆兴堂，韩迪，张宇，顾铭，陈芮，孙迎港，吴彦智，乔艳军，张秋，李茜，汪小微，
申请(专利权)人：沈阳农业大学，
类型：发明
国别省市：