一组蛋白标志物在制备鉴别原发性肺腺癌与结直肠癌肺转移的试剂中的应用制造技术

本发明专利技术涉及一组蛋白标志物在鉴别原发性肺腺癌与结直肠癌肺转移的试剂中的应用，具体地，本发明专利技术涉及FABP1、MLPH或NARR在鉴别具有肠型或黏液分化特征的原发性肺腺癌与结直肠癌肺转移中的应用，本发明专利技术还涉及用于鉴别具有肠型或黏液分化特征的原发性肺腺癌与结直肠癌肺转移的试剂盒。本申请中，FABP1、MLPH或NARR的检测可对疑似患有肠型或黏液分化特征的原发性肺腺癌或结直肠癌肺转移的患者进行准确诊断，对于改善患者的预后具有重大意义，同时可以作为潜在的治疗靶点供后续研究。可以作为潜在的治疗靶点供后续研究。可以作为潜在的治疗靶点供后续研究。

【技术实现步骤摘要】
一组蛋白标志物在制备鉴别原发性肺腺癌与结直肠癌肺转移的试剂中的应用


[0001]本申请属于分子生物学领域，具体涉及一组蛋白标志物在鉴别具有肠型或黏液分化特征的原发性肺腺癌与结直肠癌肺转移中的应用。

技术介绍

[0002]具有肠型或黏液分化特征的原发性肺腺癌在病理形态上易与结直肠腺癌相混淆，需要排除转移性结直肠癌方可诊断原发性肺腺癌。目前临床实践中，原发和转移的鉴别诊断仍具有挑战性。尚不能根据常规的组织形态学、免疫组织化学、基因突变进行区分，必须结合临床病史和全面细致的影像学检查，如CT、PET
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CT、消化内镜等，排除胃肠道肿瘤后，综合考虑后方可诊断原发性肺腺癌。这个过程复杂、耗时、昂贵、且有压力，可能错失最佳治疗窗口、延误患者病情。
[0003]目前临床常用于鉴别具有肠型或黏液分化特征的原发性肺腺癌和结直肠癌肺转移的免疫组化标志物有CK7、CK20、CDX2、TTF
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1。但值得注意的是，上述免疫组化标志物并不具有诊断及鉴别诊断特异性。结合PubMed收录涉及肺肠型腺癌文献分析，肺肠型腺癌CK7阳性率为88.2%（149/169），CDX2阳性率为78.1%（132/169），CK20阳性率为48.2%（82/170），TTF
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1阳性率为38.8%（66/170）。在肠型或黏液样分化特征的原发性肺腺癌中，TTF
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1常常表达缺失，并且CK7阴性的具有肠型或黏液分化特征的原发性肺腺癌并不罕见。此外，在部分结直肠癌病例中也可发现CK7阳性表达，有研究报道TTF
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1阳性表达的结直肠癌肺转移病例。现有免疫组化标志物局限性增加了鉴别诊断的难度。一些新兴的免疫组化标志物，如SATB2、β
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Catenin等的鉴别诊断效能尚有争议，仍需进一步评估。
[0004]目前临床常用于鉴别具有肠型或黏液分化特征的原发性肺腺癌和转移性结直肠癌的免疫组化标志物CK7、CK20、CDX2、TTF
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1存在局限性，仅依据此进行鉴别诊断，部分病例可能误诊，将对患者生命健康造成巨大损失。因此，仍需要开发一些新的免疫组化标志物来准确地鉴别具有肠型或黏液分化特征的原发性肺腺癌和转移性结直肠癌。

技术实现思路

[0005]本专利技术的技术目的是开发一组可用于鉴别具有肠型或黏液分化特征的原发性肺腺癌与肺转移性结直肠癌的蛋白标志物。
[0006]本专利技术的另一技术目的是提供上述蛋白标志在鉴别具有肠型或黏液分化特征的原发性肺腺癌与肺转移性结直肠癌中的用途。
[0007]本专利技术的又一技术目的是开发可用于鉴别具有肠型或黏液分化特征的原发性肺腺癌与肺转移性结直肠癌的试剂盒。
[0008]一方面，本专利技术提供FABP1、MLPH或NARR作为鉴别具有肠型或黏液分化特征的原发性肺腺癌与肺转移性结直肠癌的生物标志物的用途。
[0009]在具体实施方式中，当MLPH、NARR高表达或者免疫组化阳性时，判定为具有肠型或
黏液分化特征的原发性肺腺癌；当FABP1高表达或免疫组化阳性时，判定为肺转移性结直肠癌。
[0010]在具体实施方式中，通过检测待测样本的FABP1、MLPH或NARR来鉴别具有肠型或黏液分化特征的原发性肺腺癌与肺转移性结直肠癌，所述检测包括使用选自以下各项中的一种或几种技术手段来检测FABP1、MLPH或NARR的表达：蛋白免疫印记（Western blot）、酶联免疫吸附测定（ELISA）、免疫组织化学（IHC）、免疫细胞化学（ICC）、免疫组织荧光（IHF）、免疫细胞荧光（ICF）、免疫沉淀（IP）、流式细胞术、蛋白标签和质谱。
[0011]在具体实施方式中，所述待测样本为肿瘤细胞或肿瘤组织。
[0012]在具体实施方式中，所述待测样本为肿瘤组织的新鲜冷冻组织或石蜡包埋组织。
[0013]另一方面，本专利技术提供一种用于鉴别具有肠型或黏液分化特征的原发性肺腺癌与肺转移性结直肠癌的试剂盒，所述试剂盒含有用于检测FABP1、MLPH或NARR的试剂。
[0014]在具体实施方式中，所述用于检测FABP1、MLPH或NARR的试剂在蛋白水平上检测FABP1、MLPH或NARR的表达。
[0015]在具体实施方式中，所述试剂包括抗体。
[0016]在具体实施方式中，所述试剂盒包含免疫组化检测试剂，其至少包含针对FABP1、MLPH或NARR的抗体。
[0017]在具体实施方式中，所述试剂盒还包含酶标抗小鼠/兔IgG聚合物。
[0018]在具体实施方式中，所述试剂盒还包含二甲苯、无水乙醇、85％酒精、75％酒精、蒸馏水、抗原修复缓冲液、PBS缓冲液、3％双氧水溶液、DAB显色液、苏木素、盐酸酒精、返蓝液。
[0019]有益效果本申请基于蛋白质组学数据，利用机器学习算法筛选得到一组具有鉴别能力的蛋白标志物，在免疫组化水平进行独立队列验证后，得到一组鉴别具有肠型或黏液分化特征的原发性肺腺癌和转移性结直肠癌的免疫组化标志物： FABP1、MLPH、NARR，当MLPH、NARR高表达或者免疫组化阳性时，支持具有肠型或黏液分化特征的原发性肺腺癌的诊断；当原发组高表达FABP1高表达或免疫组化阳性时，支持肺转移性结直肠癌的诊断。本申请所述蛋白标志物的检测可及早对患者进行准确诊断，对于患者的精准治疗具有重大意义，同时可以作为潜在的治疗靶点供后续研究。
附图说明
[0020]图1：蛋白质组学分析质量控制结果。A，鉴定出7871种蛋白质；B，不同批次上机的样本检测结果；C，技术重复样本检测结果。
[0021]图2：应用3种机器学习算法筛选具有鉴别诊断能力的蛋白标志物。A，使用RF机器学习算法筛选得到的35个蛋白标志物进行聚类分析；B，使用SVM机器学习算法筛选得到33个蛋白标志物；C，使用LASSO机器学习算法筛选得到24个蛋白标志物；D，综合3种机器学习算法结果做出Venn图。
[0022]图3：发现队列中候选蛋白标志物免疫组化结果。
[0023]图4：独立验证队列中5种蛋白标志物免疫组化结果。
具体实施方式
[0024]以下通过具体实施例来描述本申请的
技术实现思路
，以使本领域的技术人员更好地理解本申请。
[0025]在本申请中，CDH17是指cadherin17，钙黏蛋白17。
[0026]FABP1是指fatty acid binding protein 1，脂肪酸结合蛋白 1。
[0027]MLPH是指melanophilin，黑色素。
[0028]NARR是指Nine amino
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acid residue
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repeats，九个氨基酸残基重复，是RAB34（Ras
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related protein Rab
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34，Ras相关蛋白Rab34）可变剪接产生的亚型，本申请中的抗体也针对Ra本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1. FABP1、MLPH或NARR作为鉴别具有肠型或黏液分化特征的原发性肺腺癌与肺转移性结直肠癌的生物标志物的用途。2.根据权利要求1所述的用途，其中，当MLPH、NARR高表达或者免疫组化阳性时，判定为具有肠型或黏液分化特征的原发性肺腺癌；当FABP1高表达或免疫组化阳性时，判定为肺转移性结直肠癌。3. 根据权利要求1所述的用途，其中，通过检测待测样本的FABP1、MLPH或NARR来鉴别具有肠型或黏液分化特征的原发性肺腺癌与肺转移性结直肠癌，所述检测包括使用选自以下各项中的一种或几种技术手段来检测FABP1、MLPH或NARR的表达：蛋白免疫印记（Western blot）、酶联免疫吸附测定（ELISA）、免疫组织化学（IHC）、免疫细胞化学（ICC）、免疫组织荧光（IHF）、免疫细胞荧光（ICF）、免疫沉淀（IP）、流式细胞术、蛋白标签和质谱。4.根据权利要求3所述的用途，其中，所述待...

【专利技术属性】
技术研发人员：聂秀，郭天南，常晓娜，柳佳莹，钱鎏佳，吴钧华，范军，黄博，
申请(专利权)人：华中科技大学同济医学院附属协和医院，
类型：发明
国别省市：