VTF联合Y27632在制备角膜内皮损伤修复药物中的应用制造技术

本发明专利技术提供的VTF(YAP抑制剂维替泊芬)联合Y

【技术实现步骤摘要】
VTF联合Y27632在制备角膜内皮损伤修复药物中的应用


[0001]本专利技术属于生物医药
，涉及VTF联合Y27632在制备角膜内皮损伤修复药物中的应用。

技术介绍

[0002]角膜内皮细胞的功能对维持角膜透明起着至关重要的作用，角膜内皮细胞是位于角膜最内面的单层六角形上皮细胞，角膜内皮细胞为角膜提供充足的营养并维持角膜透明。角膜内皮细胞受损会导致角膜内皮细胞的主动转运功能及角膜内皮层间的复合连接受损，水分进入角膜基质层，使基质层内胶原纤维失去正常规则的排列，纤维间隙扩大，基质层含水量增多，角膜混浊水肿，严重者出现大泡性角膜病变。所以角膜内皮功能障碍通常引起角膜混浊和水肿，严重影响视觉功能，也是角膜盲的主要原因。而且角膜内皮细胞由于存在增殖抑制而在体内无法进行增殖，所以角膜内皮损伤目前治疗方法主要是角膜移植，然而，由于缺乏健康的供体角膜，这种治疗是有限的。
[0003]角膜受损的种类很多，比如白内障虽然可采用超声乳化白内障吸除联合人工晶状体植入的手术方法，具有操作简单、手术时间短、创伤小、术后恢复快的优势。但由于多数老年患者患有糖尿病，经手术治疗后角膜内皮细胞损伤严重，不利于术后康复。
[0004]近年来有研究表明，角膜内皮细胞(Corneal endothelial cells，CECs)在一定条件下可重新获得增殖扩增的特性，在一定程度上可修复损伤的CECs的结构和功能，但无法避免重编程过程中带来的病理性EndMT。EndMT是指CECs失去正常形态而向间质细胞形态转变，并EndMT是导致CECs结构功能改变、角膜透明度下降的主要原因。

技术实现思路

[0005]有鉴于此，本专利技术的目的之一在于提供一种VTF联合Y27632在制备角膜内皮损伤修复药物中的应用，本专利技术的目的之二在于提供一种促进角膜内皮损伤修复的眼用制剂。
[0006]为达到上述目的，本专利技术提供如下技术方案：
[0007]1.VTF联合Y27632在制备角膜损伤修复药物中的应用。
[0008]进一步，在VTF联合Y27632在制备角膜损伤修复药物中的应用中，Y27632结构式如下：
[0009][0010]VTF结构式如下：
[0011][0012]进一步，在VTF联合Y27632在制备角膜损伤修复药物中的应用中，所述角膜损伤是角膜内皮损伤。
[0013]进一步，在VTF联合Y27632在制备角膜损伤修复药物中的应用中，所述药物的使用浓度为25μM～50μM。
[0014]进一步，在VTF联合Y27632在制备角膜损伤修复药物中的应用中，所述药物是眼用制剂。
[0015]进一步，在VTF联合Y27632在制备角膜损伤修复药物中的应用中，所述眼用制剂为滴眼剂、眼注射用剂、眼膏或眼用凝胶剂。
[0016]优选的，所述眼用制剂为眼注射用剂。
[0017]2本专利技术还提供一种促进角膜内皮损伤修复的眼用制剂，所述眼用制剂为包含有药理有效浓度的VTF和Y27632的药物。
[0018]进一步所述的眼用制剂中，所述药理有效浓度为25μM～50μM。
[0019]进一步所述的眼用制剂中，所述眼用制剂还包括药学上可接受的辅料。
[0020]进一步，所述的眼用制剂中，溶剂为注射用水或等渗调节剂。
[0021]所述等渗调节剂可以选自氯化钠生理盐水、葡萄糖注射液、山梨醇滴眼液、磷酸盐缓冲液(PBS)、甘露醇注射液、硼酸盐缓冲液、HBSS缓冲液或聚乙二醇滴眼液。
[0022]进一步，所述的眼用制剂中，还包括抑菌剂、稳定剂、增粘剂、增溶剂中的一种或多种药学上可接受的辅料。
[0023]进一步，所述的眼用制剂中，所述药学上可接受的辅料选自15
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羟基硬脂酸聚乙二醇酯、吐温80、聚氧乙烯蓖麻油、γ
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环糊精、羟丙基
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β
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环糊精、苯扎溴铵、苯扎氯铵、氯化钠、葡萄糖、羟丙甲纤维素。
[0024]本专利技术的有益效果在于：本专利技术提供的VTF(YAP抑制剂维替泊芬)联合Y
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27632(ROCK抑制剂)在动物水平上可以显著改善角膜内皮缺失代偿引起的角膜水肿，降低角膜厚度。二者联合应用于角膜内皮损伤相关动物模型物理损伤模型的治疗时，明确了其治疗效果，经动物以及细胞实验验证VTF联合Y
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27632应用时可以显著降低角膜内皮创面愈合过程中角膜内皮间充质转化(Corneal endothelial mesenchymal transformation，EndMT)；同时可以促进CECs的增殖，可用于防治物理损伤，化学损伤或紫外射线损伤等原因的角膜内皮损伤引起的疾病。
附图说明
[0025]为了使本专利技术的目的、技术方案和有益效果更加清楚，本专利技术提供如下附图进行说明：
[0026]图1为角膜内皮细胞(Human Corneal endothelial cells，HCECs)间充质转化实验结果，其中：A示TGF
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β诱导HCECs间充质后，加入各组药物或对比处理24小时，通过免疫荧光观察间充质标记物a
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SMA以及Vimentin的表达。B示药物处理HCECs后a
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SMA以及Vimentin阳性表达统计图。
[0027]图2为HCECs划痕愈合度的实验结果，其中：A示加入各组药物或对比处理24小时后，每12小时进行拍照记录；B示其各个时间点伤口划痕愈合率。
[0028]图3为HCECs增殖实验结果，其中：A示加入各组药物或对比处理20小时后，加入终浓度为5mg/ml EDU处理4小时，进行EDU染色后利用荧光显微镜进行拍照；B示EDU阳性细胞数颗数的统计。
[0029]图4为大鼠角膜内皮损伤造模示意图以及给药方式和时间。
[0030]图5为各实验组角膜厚度OCT扫描度结果，显示VTF联合Y
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27632处理角膜内皮损伤修复21天降低角膜水肿。其中：A示大鼠角膜内皮中央损伤2mm后，结膜下给药，每7天进行OCT扫描对角膜厚度进行拍照统计；B示各个时间点大鼠角膜厚度变化趋势。
[0031]图6为大鼠各实验组角膜内皮细胞间充质转化结果，显示VTF联合Y
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27632处理角膜内皮损伤修复21天抑制EndMT。其中：A示大鼠角膜内皮中央损伤2mm后，结膜下给药50μM VTF+50μM Y27632，21天后，通过角膜铺片，免疫荧染色观察间充质标记物a
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SMA以及Vimentin阳性表达；B示角膜内皮细胞表达a
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SMA以及Vimentin细胞数比例。
[0032]图7为大鼠各实验组角膜内皮细胞增殖结果，显示VTF联合Y
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27632处理角膜内皮损伤修复7天促进大鼠角膜内皮细胞增殖。其中：A示大鼠角膜内皮中央损伤2mm后，结膜下给药7天后通过EDU染色观本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.VTF联合Y27632在制备角膜损伤修复药物中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，Y27632结构式如下：VTF结构式如下：3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述角膜损伤是角膜内皮损伤。4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述药物的使用浓度为25μM～50μM。5.根据权利要求1～4任意项所述的应用，其特征在于，所述药物是眼用制剂。6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述眼用制剂...

【专利技术属性】
技术研发人员：张雪，刘红玲，杨于力，刘勇，
申请(专利权)人：中国人民解放军陆军军医大学第一附属医院，
类型：发明
国别省市：