一种基于光切割的荧光分析检测黄曲霉毒素B1含量的方法技术

本发明专利技术公开了一种基于光切割的荧光分析检测黄曲霉毒素B1含量的方法，涉及生物检测技术领域。所述方法包括利用荧光探针组合对黄曲霉毒素B1的含量进行检测的步骤；所述Aptamer的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，FAM基团标记于SEQ ID NO.1所示核苷酸序列的3

【技术实现步骤摘要】
一种基于光切割的荧光分析检测黄曲霉毒素B1含量的方法


[0001]本专利技术涉及生物检测
，特别是涉及一种基于光切割的荧光分析检测黄曲霉毒素B1含量的方法。

技术介绍

[0002]随着科技发展，人们生活水平日益提升，对于食品安全要求越来越高。食品在生产储存等过程中如果保存不当易产生黄曲霉毒素，尤其易发生霉变农作物中如玉米、大豆等或其制品。黄曲霉毒素毒性和致癌性极强，特别是黄曲霉毒素B1(AFB1)，已被世界卫生组织列为I类致癌物质。为了确保食品的安全，如何采取相关检测技术检测食品毒素AFB1一直以来都是被探讨的话题之一。
[0003]现有技术中AFB1的检测方法主要有比色法、荧光法、电化学法、高效液相色谱法(HPLC)、表面等离子共振法、新型荧光适配体传感器等，但目前大多数带有靶标识别单元的生物传感器是“被动型”的，即目标探针“始终处于活跃状态”，一旦与靶标分子AFB1反应即输出特异性信号，很难实现该过程的可控调控和精准控制。对于实际检测样品，由于样品的复杂性，如组分多、丰度低、结构复杂等特点，需要在追求高灵敏度、高特异性的基础上实现实时、原位的可控激活，实现对靶标分子AFB1的精准检测。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的是提供一种基于光切割的荧光分析检测黄曲霉毒素B1含量的方法，以解决上述现有技术存在的问题，本专利技术提供的方法可实现对黄曲霉毒素B1的光敏性检测，且检测灵敏度高，特异性强。
[0005]本专利技术利用光的即时操作和远程触发性，开发“活性抑制”状态的生物传感器可避免现有技术的缺陷。在生物传感过程中，处于“活性抑制”状态的靶标识别单元即使在有靶标分子AFB1存在时，仍处于惰性状态，直到特定时间，被选择性激活转换到“开启”状态，与靶标分子AFB1结合，实现荧光信号输出。
[0006]基于此，本专利技术提供了如下方案：
[0007]本专利技术提供一种基于光切割的荧光分析法检测黄曲霉毒素B1含量的荧光探针组合，包括荧光探针Aptamer和PC
‑
strand；
[0008]所述Aptamer的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，FAM基团标记于SEQ ID NO.1所示核苷酸序列的3
’
端；
[0009]所述PC
‑
strand的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，TAMRA基团标记于SEQ ID NO.2所示核苷酸序列的5
’
端，PC基团标记于SEQ ID NO.2所示核苷酸序列的10bp和11bp处碱基之间；
[0010]所述PC基团的结构式如下：
[0011][0012]本专利技术还提供上述的荧光探针组合在制备基于光切割的荧光分析法检测黄曲霉毒素B1含量的试剂盒中的应用。
[0013]本专利技术还提供一种基于光切割的荧光分析法检测黄曲霉毒素B1含量的试剂盒，所述试剂盒包括上述的荧光探针组合。
[0014]本专利技术还提供上述的荧光探针组合或试剂盒在检测黄曲霉毒素B1含量中的应用。
[0015]本专利技术还提供一种基于光切割的荧光分析法检测黄曲霉毒素B1含量的方法，包括以下步骤：
[0016](1)Aptamer溶液、PC
‑
strand溶液和Tris缓冲溶液混合反应后进行紫外光照射，得到混合反应体系溶液；
[0017](2)取相同体积的步骤(1)得到的混合反应体系溶液，分别加入体积相同但浓度不同的黄曲霉毒素B1标准溶液，反应后分别检测荧光强度，之后绘制得到关于黄曲霉毒素B1浓度和荧光强度的标准曲线；
[0018](3)取步骤(1)得到的混合反应体系溶液，加入待检样品溶液，反应后检测荧光强度，之后根据所述标准曲线，核算得到所述待检样品溶液中的黄曲霉毒素B1含量；
[0019]在步骤(1)中，所述Aptamer的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，FAM基团标记于SEQ ID NO.1所示核苷酸序列的3
’
端；所述PC
‑
strand的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，TAMRA基团标记于SEQ ID NO.2所示核苷酸序列的5
’
端，PC基团标记于SEQ ID NO.2所示核苷酸序列的10bp和11bp处碱基之间；
[0020]所述PC基团的结构式如下：
[0021][0022]在步骤(3)中，所述混合反应体系溶液与所述待检样品溶液的体积比与步骤(2)中的混合反应体系溶液和黄曲霉毒素B1标准溶液的体积相同。
[0023]进一步地，在步骤(1)中，在所述Aptamer溶液、所述PC
‑
strand溶液和所述Tris缓冲溶液的混合溶液中，所述Aptamer的浓度为0.15μmol/L；所述PC
‑
strand的浓度为0.24μmol/L。
[0024]进一步地，在步骤(1)中，所述混合反应的温度为4℃。
[0025]进一步地，在步骤(1)中，所述紫外光照射的辐照强度为5mW/cm2。
[0026]进一步地，所述紫外光照射的辐照时间为8min。
[0027]进一步地，在步骤(2)和步骤(3)中，所述反应的温度均为37℃。
[0028]本专利技术公开了以下技术效果：
[0029]本专利技术以荧光标记的DNA单链Aptamer作为荧光探针，以具有光学活性基团标记的PC
‑
strand与荧光探针Aptamer部分互补，形成双链，此时猝灭基团TAMRA与荧光基团FAM的距离较近，荧光猝灭；在光照条件下，PC
‑
strand在光敏基团位置打开，形成两段，并分别与荧光探针Aptamer形成双链，此时，PC
‑
strand与Aptamer的结合力较弱。当靶标分子AFB1存在时，AFB1与荧光探针Aptamer特异性结合，形成二级结构，而PC
‑
strand与荧光探针Aptamer形成的双链结构被破坏，猝灭基团TAMRA远离荧光基团FAM，荧光恢复。基于Aptamer对AFB1具有特异性识别的作用，当加入与AFB1具有类似结构的赭曲霉毒素(OTA)或玉米赤霉烯酮(ZEN)时，荧光没有恢复，通过监测荧光信号变化，实现对靶分子AFB1的特异性检测，并应用于食物(如大米、玉米、大豆等)中AFB1的检测。
附图说明
[0030]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0031]图1为本专利技术检测方法的原理示意图；
[0032]图2为AD双链、A
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PD双链和A
‑
nPD双链的示意图；
[0033]图3为Aptamer溶液的浓度优化实验的荧光检测结果；...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于光切割的荧光分析法检测黄曲霉毒素B1含量的荧光探针组合，其特征在于，包括荧光探针Aptamer和PC
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strand；所述Aptamer的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，FAM基团标记于SEQ ID NO.1所示核苷酸序列的3
’
端；所述PC
‑
strand的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，TAMRA基团标记于SEQ ID NO.2所示核苷酸序列的5
’
端，PC基团标记于SEQ ID NO.2所示核苷酸序列的10bp和11bp处碱基之间；所述PC基团的结构式如下：2.一种如权利要求1所述的荧光探针组合在制备基于光切割的荧光分析法检测黄曲霉毒素B1含量的试剂盒中的应用。3.一种基于光切割的荧光分析法检测黄曲霉毒素B1含量的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1所述的荧光探针组合。4.一种如权利要求1所述的荧光探针组合或权利要求3所述的试剂盒在检测黄曲霉毒素B1含量中的应用。5.一种基于光切割的荧光分析法检测黄曲霉毒素B1含量的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)Aptamer溶液、PC
‑
strand溶液和Tris缓冲溶液混合反应后进行紫外光照射，得到混合反应体系溶液；(2)取相同体积的步骤(1)得到的混合反应体系溶液，分别加入体积相同但浓度不同的黄曲霉毒素B1标准溶液，反应后分别检测荧光强度，之后绘制得到关于黄曲霉毒素B1浓度和荧光强度的标准曲线；(3)取步骤(1)得到的混合反应体系溶液，加入待...

【专利技术属性】
技术研发人员：贾永梅，周国华，刘陪炼，陈益丽，李志果，刘玉革，
申请(专利权)人：岭南师范学院，
类型：发明
国别省市：