一种Bt菌株及其在防治黄曲条跳甲方面的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种Bt菌株及其在防治黄曲条跳甲方面的应用，属于生物农药技术领域。所述菌株命名为：BS128，于2023年02月27日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为：CCTCC M 2023209。本发明专利技术通过室内生物活性评价，16000IU/mL苏云金芽孢杆菌BS128菌悬液对黄曲条跳甲3d的LC50值为60.0093μg/mL，16000IU/mL BS128菌悬液9000mL/hm2土壤处理对跳甲防治效果为67.66％，16000IU/mL BS128菌悬液9000mL/hm2叶面喷雾对黄曲条跳甲7d和10d防效分别为61.86％、62.16％，对黄曲条跳甲具有较强毒力，对蔬菜黄曲条跳甲防治作用，可应用于防治蔬菜黄曲条跳甲。防治蔬菜黄曲条跳甲。防治蔬菜黄曲条跳甲。

【技术实现步骤摘要】
一种Bt菌株及其在防治黄曲条跳甲方面的应用


[0001]本专利技术属于生物农药
，具体涉及一种Bt菌株及其在防治黄曲条跳甲方面的应用。

技术介绍

[0002]黄曲条跳甲Phyllotreta striolata(Fabricius)属于鞘翅目叶甲科，是一种世界性的害虫，其主要危害白菜、菜心、萝卜等十字花科蔬菜。幼虫和成虫自春到秋均能为害，苗期受害最重，成虫还可以造成白菜软腐病、黑腐病等病害传播蔓延。在我国南方，黄曲条跳甲由次要害虫上升为主要害虫，有超越小菜蛾成为蔬菜生产上第一大害虫的趋势。该虫在海南省1年发生7
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8代，世代重叠。随着海南省种植结构的调整，蔬菜种植面积不断扩大，且大部分地区蔬菜连作、套种等普遍，给黄曲条跳甲连续为害创造了适宜的环境，造成该虫已成为海南省蔬菜主要害虫之一。
[0003]而值得关注的是黄曲条跳甲合理有效的防治技术仍然是待解决的科学难题，黄曲条跳甲卵、幼虫等在土壤中不易于防治，成虫擅长跳跃并且抗药性较强，且该虫繁殖速度非常快，无有效的防治方法。目前生产上仍以化学防治为主要手段，且多数采取普遍的叶面喷药技术，无法兼顾土壤中的卵、蛹和幼虫，药剂持效期一过，成虫不断羽化出土危害，菜农增加喷药次数和加大用药量，造成害虫产生抗性，造成化学防治手段失灵。这种长期化学药剂防治不仅加剧了黄曲条跳甲抗药性，而且造成农药残留和环境污染。
[0004]采用环境友好的生物防治措施替代化学农药是未来现代化蔬菜产业发展的趋势，因此探索一种有效替代化学防治该虫害的绿色可持续生物防治措施是必然趋势。近年来，生物农药逐渐被开发用于植物病虫害的防治，其研究以及应用也越来越受到重视。而苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis，简称Bt)是目前世界上产量最大、应用最为广泛的一类微生物杀虫剂。Bt等生物农药是生态环境的调节者，是重点需要探索和替代化学防治的一种有效防治技术，因此，急需筛选出对黄曲条跳甲具有较强毒力的的Bt菌株。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于克服现有技术的缺点，提供一种Bt菌株及其在防治黄曲条跳甲方面的应用，该Bt菌株对黄曲条跳甲具有较强毒力，为黄曲条跳甲绿色可持续防控提供了一种有效手段。
[0006]一种Bt菌株，所述菌株命名为：BS128，于2023年02月27日保藏于中国典型培养物保藏中心，简称CCTCC，保藏号为：CCTCC M 2023209，拉丁文名称为Bacillus thuringiensis BS128，保藏地址为湖北省武汉市武昌区八一路299号武汉大学校内(武汉大学保藏中心)。
[0007]进一步地，所述Bt菌株的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
[0008]进一步地，所述Bt菌株的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。
[0009]一种菌剂，含有权利要求1所述的Bt菌株。
[0010]上述Bt菌株、上述的菌剂在防治黄曲条跳甲方面的应用。
[0011]进一步地，所述菌剂中Bt菌株的浓度为16000IU/mL。
[0012]进一步地，将所述菌剂进行叶片喷雾。
[0013]进一步地，将所述菌剂进行土壤喷雾。
[0014]进一步地，所述黄曲条跳甲为菜心黄曲条跳甲。
[0015]本专利技术具有以下优点：本专利技术公开了一种Bt菌株，从海南省土壤中分离出的一株对黄曲条跳甲高毒力Bt菌株BS128，根据形态学和分子水平鉴定，明确该菌株属于苏云金芽孢杆菌，含有cry8Ga新型杀虫编码基因。本专利技术通过室内生物活性评价，16000IU/mL苏云金芽孢杆菌BS128菌悬液对黄曲条跳甲3d的LC50值为60.0093μg/mL，16000IU/mL BS128菌悬液9000mL/hm2土壤处理对跳甲防治效果为67.66％(15d)，16000IU/mL BS128菌悬液9000mL/hm2叶面喷雾对黄曲条跳甲7d和10d防效分别为61.86％、62.16％，对黄曲条跳甲具有较强毒力，对蔬菜黄曲条跳甲防治作用，可应用于防治蔬菜黄曲条跳甲。
附图说明
[0016]图1为菌株BS128扫描电镜观察，其中，A：7000倍下的BS128；B：10000倍下正在分离的晶体与芽胞注：S：芽胞(spore)；C：伴胞晶体(crystal)。
[0017]图2为Bt菌株BS128的cry8类基因PCR产物及酶切检测电泳结果，图中，M1：λDNA/Eco130I(kb)；1：BuiBui KpnI/DraI酶切消化产物；2：BS128 KpnI/DraI酶切消化产物；3：BuiBui(cry8Ca)PCR扩增产物；4：BS128 cry8类引物鉴定PCR扩增产物；M2：100bp ladder(1500，1000～100bp)。
具体实施方式
[0018]下面结合附图及实施例对本专利技术做进一步的描述，本专利技术的保护范围不局限于以下所述：实施例1：
[0019]1 材料与方法
[0020]1.1试验材料
[0021]供试作物：用于室内活性和田间药效测定菜心品种为005，购于海南林忠民菜种行有限公司，于2021年5月12播种。试验时期，黄曲条跳甲偏重发生。
[0022]培养基：LB固体与液体培养基、1/2LB固体与液体培养基、配制方法参见Sambrook(Sambrook J et al.，1989)。
[0023]菌株：Bt菌株分离自海南省海口市土壤样品，菌株BuiBui(FERM BP
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3465)由中国农业科学院植保所提供。
[0024]鉴定引物序列：具体鉴定引物序列参见表1，其中cry1、cry1i、cry2、cry3引物序列参见文献(张杰,宋福平,左雅慧,等.31株苏云金芽孢杆菌杀虫晶体蛋白基因型鉴定及表达产物研究[J].微生物学报,2000,40(4):372
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378)，cry4～7、cry9、cry10引物序列参见文献(孙晓东,阎伟,李朝绪,等.苏云金芽胞杆菌的鉴定及对椰子织蛾的致死作用[J].生物安全学报,2016,025(001):49
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53.)，cry8引物序列参见文献(王志鑫,束长龙,申培立,等.含cry8型基因苏云金芽孢杆菌的分离和鉴定[J].华北农学报,2014,29(06):149
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154.)。
[0025]表1鉴定引物及序列
[0026][0027][0028]供试虫源：从海南农业科学院蔬菜研究所基地菜心基地采集黄曲条跳甲成虫，实验室新鲜菜心叶片饲喂24h后，挑选健康大小一致的成虫作为室内活性测定虫源。
[0029]供试药剂：16000IU/mg的Bt菌株(以下称为苏云金芽孢杆菌BS128)，苏云金芽孢杆菌BS128菌悬液(菌株从海南农业科学院蔬菜研究所基地土壤中分离，本实验室生产)；32000IU/mg苏云金杆菌G033A可湿性粉剂(武汉科诺生物科技有限公司生产)；30％噻虫嗪水分散粒剂(瑞士先正本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种Bt菌株，其特征在于，所述菌株命名为：BS128，于2023年02月27日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为：CCTCC M 2023209。2.如权利要求1所述的一种Bt菌株，其特征在于，所述Bt菌株的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。3.如权利要求1所述的一种Bt菌株，其特征在于，所述Bt菌株的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。4.一种菌剂，其特征在于，含有权利要求1所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙晓东，边强，庞强强，周曼，
申请(专利权)人：南开大学，
类型：发明
国别省市：