用于癌症疗法的双顺反子抑制性嵌合抗原受体(iCAR)/激活性嵌合抗原受体(aCAR)构建体制造技术

本发明专利技术涉及通过采用双顺反子抑制性嵌合抗原受体(iCAR)/激活性嵌合抗原受体(aCAR)构建体以在癌症治疗疗法中使用的癌症免疫疗法领域。领域。领域。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于癌症疗法的双顺反子抑制性嵌合抗原受体(iCAR)/激活性嵌合抗原受体(aCAR)构建体
相关申请的交叉引用
[0001]本申请根据35 U.S.C.
§
119要求2021年4月22日提交的美国专利申请号63/178,452和2020年9月4日提交的美国专利申请号63/074,812的优先权，这两项专利申请都通过援引以其全文明确并入本文。


[0002]本专利技术涉及通过采用与激活性嵌合抗原受体(aCAR)配对的抑制性嵌合抗原受体(iCAR)以在癌症治疗疗法中使用的癌症免疫疗法领域。

技术介绍

[0003]鉴定仅由肿瘤细胞而非健康组织表达的可靶向抗原无疑是当今癌症免疫疗法的主要挑战。T细胞能够根除肿瘤细胞的临床证据来自于大量评价利用T细胞治疗癌症的高度多样化方法的研究(Rosenberg和Restifo,Science[科学],348(6230):62
‑
68(2015))。这些方法采用骨髓移植伴供体淋巴细胞输注、肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)的过继转移、经由CAR将T细胞基因重定向到预选抗原进行治疗(Gross和Eshhar,Annual Review of Pharmacology and Toxicology[药理学与毒理学年评],56:59
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83,(2016))或T细胞受体(TCR)、使用免疫检查点抑制剂、BiTE(双特异性T细胞接合分子)技术(Einsele,H.等人,Cancer[癌症],126(14):3192
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3201(2020))或主动接种疫苗。其中，基因工程化T细胞的使用和主动免疫的不同策略需要关于有可能产生持久临床反应但副作用最小的候选抗原的预先存在的信息。然而，正如S.Rosenberg的综述的标题所述，“Finding suitable targets is the major obstacle to cancer gene therapy[寻找合适的靶标是癌症基因疗法的主要障碍]”(Rosenberg,Cancer Gene Therapy[癌症基因疗法],21:45
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47(2014))。
[0004]使用嵌合抗原受体(或CAR)以不依赖于MHC的方式针对所选择的抗原基因重定向T细胞(或免疫系统的其他杀伤细胞，诸如自然杀伤(NK)细胞和细胞因子诱导的杀伤细胞)的概念是由Gross和Eshhar在20世纪80年代末首次提出的(Gross等人,PNAS[美国国家科学院院刊],86(24):10024
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1002(1989))。它们是由编码细胞外单链抗体可变片段(scFv)的嵌合基因合成产生的，该可变片段通过柔性铰链和跨膜结构域与共刺激结构域和信号传导组分融合，这些信号传导组分包括能够激活T细胞的CD3
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ζ或FcRγ链的基于免疫受体酪氨酸的激活基序。目前，CAR正在进行几十项临床试验的研究，并且已经在B细胞恶性肿瘤中显示出极高的功效(Dotti等人,2014；Gill和June,263(1):68
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89(2015)；Gross和Eshhar,Annual Review of Pharmacology and Toxicology[药理学与毒理学年评],56:59
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83,2016)。CAR
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T细胞疗法的安全性在很大程度上由其区分肿瘤和健康组织的能力来决定。靶向实体瘤的主要风险以及已经在临床和临床前研究中报告的不良自身免疫效应的直接原因是由靶抗原的肿瘤外表达引起的脱瘤(off
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tumor)、在靶(on
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target)毒性(在综述(Gross和Eshhar,2016b)和(Klebanoff等人,Nature Medicine[自然医学]22:26
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36(2016))中详细阐述)。
[0005]尽管无疑很吸引人，但以前这些基于CAR的方法需要调整CAR scFv的亲和力以选择性地结合肿瘤中的高水平的抗原，同时最大限度地减少对健康组织中较低水平的抗原的识别。另外，需要平衡激活信号和共刺激信号两者的幅度，以实现有效的在靶、在瘤T细胞反应性。值得注意的是，在B细胞恶性肿瘤中，CAR靶向B细胞独有的抗原，不需要调整亲和力或T细胞信号传导。对于实体瘤，这种平衡是否可以在临床环境中常规实现是值得怀疑的。
[0006]当由CAR重定向的杀伤细胞靶向的肿瘤抗原与正常组织共享时，就会出现脱瘤反应性。然而，如果正常组织表达另一种不存在于肿瘤上的表面抗原，则它可以被含有抑制性信号传导部分的抑制性CAR(iCAR)靶向，该抑制性信号传导部分在接合时阻止通过激活性CAR(aCAR)进行的T细胞激活。因此，aCAR和iCAR的共表达将引导杀伤细胞靶向肿瘤，同时使正常组织得以幸免。
[0007]iCAR没有激活结构域(诸如FcRγ或CD3
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ζ)，而是具有源自可以拮抗T细胞激活的抑制性受体(诸如CTLA
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4、PD
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1或NK抑制性受体)的信号传导结构域。
[0008]本领域仍然需要癌症疗法，特别是包含iCAR以便限制脱靶效应的疗法。本专利技术通过提供单顺反子aCAR和iCAR构建体或包含此类iCAR并且可用于癌症治疗的双顺反子构建体的共转导来满足该需求。

技术实现思路

[0009]本专利技术提供了用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体及其用途。
[0010]本专利技术提供了用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，该构建体包含：i.iCAR部分，其中该iCAR部分包含：a.任选地处于VH
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VL或VL
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VH取向的iCAR单链可变片段(scFv)组分；b.iCAR铰链结构域组分；c.iCAR跨膜(TM)结构域组分；d.iCAR抑制结构域组分；以及ii.aCAR部分，其中该iCAR部分包含：a.任选地处于VH
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VL或VL
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VH取向的aCAR单链可变片段(scFv)组分；b.aCAR铰链结构域组分；c.aCAR共刺激结构域组分；d.aCAR激活信号传导结构域；以及iii.连接(i)中的该iCAR部分和(ii)中的该aCAR部分的接头。
[0011]在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一些实施例中，以任一取向连接VH
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VL或VL
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VH的接头包括一个或多个选自由以下项组成的组的接头：(G4S)X3接头(SEQ ID NO:81)、G4S(SEQ ID NO:153)、(G4S)X3(SEQ ID NO:154)和Whitlow接头(SEQ ID NO:82)。
[0012]在用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体的一本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，所述构建体包含：iv.iCAR部分，其中所述iCAR部分包含：a.任选地处于VH
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VL或VL
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VH取向的iCAR单链可变片段(scFv)组分；b.iCAR铰链结构域组分；c.iCAR跨膜(TM)结构域组分；d.iCAR抑制结构域组分；以及v.aCAR部分，其中所述iCAR部分包含：a.任选地处于VH
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VL或VL
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VH取向的aCAR单链可变片段(scFv)组分；b.aCAR铰链结构域组分；c.aCAR共刺激结构域组分；d.aCAR激活信号传导结构域；以及vi.连接(i)中的所述iCAR部分和(ii)中的所述aCAR部分的接头。2.根据权利要求1所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中以任一取向连接所述VH
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VL或VL
‑
VH的所述接头包括一个或多个选自由以下项组成的组的接头：(G4S)X3接头(SEQ ID NO:81)、G4S(SEQ ID NO:153)、(G4S)X3(SEQ ID NO:154)和Whitlow接头(SEQ ID NO:82)。3.根据权利要求1或2所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR scFv组分靶向HLA抗原。4.根据权利要求1至3中任一项所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述HLA抗原选自由以下项组成的组：HLA
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A2、HLA
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A3、HLA
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A、HLA
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B、HLA
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C、HLA
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G、HLA
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E、HLA
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F、HLA
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DPA1、HLA
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DQA1、HLA
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DQB1、HLA
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DQB2、HLA
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DRB1和HLA
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DRB5。5.根据权利要求1至4中任一项所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR scFv组分选自由以下项组成的组：BB7.2、3PF12、3PF12/C4、3PF12/F12、3PF12/B11、W6/32、BBM.1、SN66E3、Ha5C2.A2、MWB1、MWB1
‑
mod、Hz.BB7.2 VH1
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69_A18VK、Hz.BB7.2 VH1
‑
69(27,30)_A18、Hz.BB7.2 VH1
‑
69(27,30,48)_A18、Hz.BB7.2 VH1
‑
69(27,30,67)_A18、Hz.BB7.2 VH1
‑
69(27,30,69)_A18、Hz.BB7.2 VH1
‑
69(27,30,67,69)_A18、Hz.BB7.2 VH1
‑
3_A18、Hz.BB7.2 VH1
‑
3(48)_A18、Hz.BB7.2 VH1
‑
3(67)_A18、Hz.BB7.2 VH1
‑
3(69)_A18、Hz.BB7.2VH1
‑
3(71)_A18、Hz.BB7.2 VH1
‑
3(73)_A18、MWB1.2、SN66E3.2和SN66E3.3。6.根据权利要求1至5中任一项所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR scFv组分是BB7.2。7.根据权利要求6所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR scFv包含来自BB7.2的Vh和Vl(SEQ ID NO:37和38)或来自SEQ ID NO:37和38的vhCDR1、vhCDR2、vhCDR3、vlCDR1、vlCDR2和vlCDR3。8.根据权利要求6所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR scFv包含来自Hz.BB7.2 VH1
‑
69_A18VK的Vh和Vl(SEQ ID NO:57和58)或来自SEQ ID NO:57和58的vhCDR1、vhCDR2、vhCDR3、vlCDR1、vlCDR2和vlCDR3。
9.根据权利要求6所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR scFv包含来自Hz.BB7.2 VH1
‑
69(27,30)_A18的Vh和Vl(SEQ ID NO:59和60)或来自SEQ ID NO:59和60的vhCDR1、vhCDR2、vhCDR3、vlCDR1、vlCDR2和vlCDR3。10.根据权利要求6所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR scFv包含来自Hz.BB7.2 VH1
‑
69(27,30,48)_A18的Vh和Vl(SEQ ID NO:61和62)或来自SEQ ID NO:61和62的vhCDR1、vhCDR2、vhCDR3、vlCDR1、vlCDR2和vlCDR3。11.根据权利要求6所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR scFv包含来自Hz.BB7.2 VH1
‑
69(27,30,67)_A18的Vh和Vl(SEQ ID NO:63和64)或来自SEQ ID NO:63和64的vhCDR1、vhCDR2、vhCDR3、vlCDR1、vlCDR2和vlCDR3。12.根据权利要求6所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR scFv包含来自Hz.BB7.2 VH1
‑
69(27,30,69)_A18的Vh和Vl(SEQ ID NO:65和66)或来自SEQ ID NO:65和66的vhCDR1、vhCDR2、vhCDR3、vlCDR1、vlCDR2和vlCDR3。13.根据权利要求6所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR scFv包含来自Hz.BB7.2 VH1
‑
69(27,30,67,69)_A18的Vh和Vl(SEQ ID NO:67和68)或来自SEQ ID NO:67和68的vhCDR1、vhCDR2、vhCDR3、vlCDR1、vlCDR2和vlCDR3。14.根据权利要求6所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR scFv包含来自Hz.BB7.2 VH1
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3_A18的Vh和Vl(SEQ ID NO:69和70)或来自SEQ ID NO:69和70的vhCDR1、vhCDR2、vhCDR3、vlCDR1、vlCDR2和vlCDR3。15.根据权利要求6所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR scFv包含来自Hz.BB7.2 VH1
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3(48)_A18的Vh和Vl(SEQ ID NO:71和72)或来自SEQ ID NO:71和72的vhCDR1、vhCDR2、vhCDR3、vlCDR1、vlCDR2和vlCDR3。16.根据权利要求6所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR scFv包含来自Hz.BB7.2 VH1
‑
3(67)_A18的Vh和Vl(SEQ ID NO:73和74)或来自SEQ ID NO:73和74的vhCDR1、vhCDR2、vhCDR3、vlCDR1、vlCDR2和vlCDR3。17.根据权利要求6所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR scFv包含来自Hz.BB7.2 VH1
‑
3(69)_A18的Vh和Vl(SEQ ID NO:75和76)或来自SEQ ID NO:75和76的vhCDR1、vhCDR2、vhCDR3、vlCDR1、vlCDR2和vlCDR3。18.根据权利要求6所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR scFv包含来自Hz.BB7.2 VH1
‑
3(71)_A18的Vh和Vl(SEQ ID NO:77和78)或来自SEQ ID NO:77和78的vhCDR1、vhCDR2、vhCDR3、vlCDR1、vlCDR2和vlCDR3。19.根据权利要求6所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR scFv包含来自Hz.BB7.2 VH1
‑
3(73)_A18的Vh和Vl(SEQ ID NO:79和80)或来自SEQ ID NO:79和80的vhCDR1、vhCDR2、vhCDR3、vlCDR1、vlCDR2和vlCDR3。20.根据权利要求6所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR scFv是SEQ ID NO:167的BB7.2。
21.根据权利要求1至4中任一项所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR scFv组分是3PF12。22.根据权利要求21所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR scFv包含来自3PF12/C4的Vh和Vl(SEQ ID NO:39和40)或来自SEQ ID NO:39和40的vhCDR1、vhCDR2、vhCDR3、vlCDR1、vlCDR2和vlCDR3。23.根据权利要求21所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR scFv包含来自3PF12/F12的Vh和Vl(SEQ ID NO:41和42)或来自SEQ ID NO:41和42的vhCDR1、vhCDR2、vhCDR3、vlCDR1、vlCDR2和vlCDR3。24.根据权利要求21所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR scFv包含来自3PF12/B11的Vh和Vl(SEQ ID NO:43和44)或来自SEQ ID NO:43和44的vhCDR1、vhCDR2、vhCDR3、vlCDR1、vlCDR2和vlCDR3。25.根据权利要求21所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR scFv是SEQ ID NO:168的3PF12。26.根据权利要求1至2中任一项所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR scFv组分是SN66E3。27.根据权利要求26所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR scFv包含来自SN66E3.1的Vh和Vl(SEQ ID NO:49和50)或来自SEQ ID NO:49和50的vhCDR1、vhCDR2、vhCDR3、vlCDR1、vlCDR2和vlCDR3。28.根据权利要求26所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR scFv是SEQ ID NO:169的SN66E3.1。29.根据权利要求26所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR scFv包含来自SN66E3.2的Vh和Vl(SEQ ID NO:165和166)或来自SEQ ID NO:165和166的vhCDR1、vhCDR2、vhCDR3、vlCDR1、vlCDR2和vlCDR3。30.根据权利要求26所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR scFv是SEQ ID NO:285的SN66E3.2。31.根据权利要求26所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR scFv包含来自SN66E3.3的Vh和Vl(SEQ ID NO:283和284)或来自SEQ ID NO:283和284的vhCDR1、vhCDR2、vhCDR3、vlCDR1、vlCDR2和vlCDR3。32.根据权利要求26所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR scFv是SEQ ID NO:286的SN66E3.3。33.根据权利要求1至4中任一项所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR scFv组分是W6/32。34.根据权利要求33所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR scFv包含来自W6/32的Vh和Vl(SEQ ID NO:45和46)或来自SEQ ID NO:45和46的vhCDR1、vhCDR2、vhCDR3、vlCDR1、vlCDR2和vlCDR3。35.根据权利要求1至5中任一项所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR scFv组分是BBM.1。36.根据权利要求35所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR scFv包含来自BBM.1的Vh和Vl(SEQ ID NO:47和48)或来自
SEQ ID NO:47和48的vhCDR1、vhCDR2、vhCDR3、vlCDR1、vlCDR2和vlCDR3。37.根据权利要求1至5中任一项所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR scFv组分是Ha5C2.A2。38.根据权利要求33所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR scFv包含来自Ha5C2.A2的Vh和Vl(SEQ ID NO:51和52)或来自SEQ ID NO:51和52的vhCDR1、vhCDR2、vhCDR3、vlCDR1、vlCDR2和vlCDR3。39.根据权利要求1至5中任一项所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR scFv组分是MWB1。40.根据权利要求39所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR scFv包含来自MWB1的Vh和Vl(SEQ ID NO:53和54)或来自SEQ ID NO:53和54的vhCDR1、vhCDR2、vhCDR3、vlCDR1、vlCDR2和vlCDR3。41.根据权利要求35所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR scFv包含来自MWB1
‑
mod(MWB1.1)的Vh和Vl(SEQ ID NO:55和56)或来自SEQ ID NO:55和56的vhCDR1、vhCDR2、vhCDR3、vlCDR1、vlCDR2和vlCDR3。42.根据权利要求35所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR scFv包含来自MWB1.2的Vh和Vl(SEQ ID NO:163和164)。43.根据权利要求1至4中任一项所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR scFv是MWB1.1 scFvVH_VL(SEQ ID NO:273)。44.根据权利要求1至5中任一项所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR scFv是MWB1.2 scFvVH_VL(SEQ ID NO:274)。45.根据权利要求1至44中任一项所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR铰链结构域组分选自PD
‑
1铰链、CD28铰链和CD8铰链(包括CD8a铰链)、LIR1 Ig3
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4铰链、LIR1 Ig
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4铰链、LIR1 52aa铰链、LIR1 36aa铰链、LIR1 30aa铰链、LIR1 26aa铰链、LIR1 8aa铰链、CD33铰链、KIR2DL1铰链、PD
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1(47)铰链、PD
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1(42)铰链、PD
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1(36)铰链、PD
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1(30)铰链、PD
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1(26)铰链和PD
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1(20)铰链。46.根据权利要求45所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR铰链结构域组分是PD
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1铰链(SEQ ID NO:86)。47.根据权利要求45所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR铰链结构域组分是CD28铰链(SEQ ID NO:85)。48.根据权利要求45所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR铰链结构域组分是CD8α铰链(SEQ ID NO:84)。49.根据权利要求45所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR铰链结构域组分是LIR1 Ig3
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4铰链(SEQ ID NO:87)。50.根据权利要求45所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR铰链结构域组分是LIR1 Ig
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4铰链(SEQ ID NO:88)。51.根据权利要求45所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR铰链结构域组分是LIR1 52aa铰链(SEQ ID NO:89)。52.根据权利要求45所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR铰链结构域组分是LIR1 36aa铰链(SEQ ID NO:90)。
53.根据权利要求45所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR铰链结构域组分是LIR1 30aa铰链(SEQ ID NO:91)。54.根据权利要求45所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR铰链结构域组分是LIR1 26aa铰链(SEQ ID NO:289)。55.根据权利要求45所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR铰链结构域组分是LIR1 8aa铰链(SEQ ID NO:92)。56.根据权利要求45所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR铰链结构域组分是CD33铰链(SEQ ID NO:93)。57.根据权利要求45所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR铰链结构域组分是KIR2DL1铰链(SEQ ID NO:94)。58.根据权利要求45所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR铰链结构域组分是PD
‑
1(47)铰链(SEQ ID NO:290)。59.根据权利要求45所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR铰链结构域组分是PD
‑
1(42)铰链(SEQ ID NO:291)。60.根据权利要求45所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR铰链结构域组分是PD
‑
1(36)铰链(SEQ ID NO:292)。61.根据权利要求45所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR铰链结构域组分是PD
‑
1(30)铰链(SEQ ID NO:293)。62.根据权利要求45所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR铰链结构域组分是PD
‑
1(26)铰链(SEQ ID NO:294)。63.根据权利要求45所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR铰链结构域组分是PD
‑
1(20)铰链(SEQ ID NO:295)。64.根据权利要求1至63中任一项所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR TM结构域组分选自PD
‑
1TM结构域、CD28 TM结构域、CD8TM结构域(包括CD8a TM结构域)、LIR1 TM结构域、CD33 TM结构域和KIR2DL1 TM结构域。65.根据权利要求57所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR TM结构域组分是PD
‑
1TM结构域(SEQ ID NO:97)。66.根据权利要求57所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR TM结构域组分是CD28 TM结构域(SEQ ID NO:96)。67.根据权利要求57所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR TM结构域组分是CD8αTM结构域(SEQ ID NO:95)。68.根据权利要求57所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR TM结构域组分是LIR1 TM结构域(SEQ ID NO:98)。69.根据权利要求57所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR TM结构域组分是CD33 TM结构域(SEQ ID NO:99)。70.根据权利要求57所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR TM结构域组分是KIR2DL1 TM结构域(SEQ ID NO:100)。71.根据权利要求1至63中任一项所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单
顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR抑制结构域组分是来自选自由以下项组成的组的蛋白质的抑制结构域：PD
‑
1、KIR2DL1、KIR2DL2、KIR2DL3、KIR2DL4、KIR2DL5A、KIR3DL1、KIR3DL2、KIR3DL3、LAIR1、CD22、CD33、SIGLEC5、SIGLEC6、SIGLEC7、SIGLEC8、SIGLEC9、SIGLEC10、SIGLEC11、SIGLEC12、PECAM1/CD31、CD200R1、FCRL1、FCRL2、FCRL3、FCRL4、FCRL5、SLAMF1、SLAMF5、BTLA、LAG3、2B4、CD160、CEACAM1、TIM3、VISTA、TIGIT、SIRPα、FcγRIIB、CD5、CD300a、CD300f、LIR1、LIR2、LIR3、LIR5、LIR8、Ly9、2xPD1(G4S)、2xPD1(PD1)、PVRIg和AA2AR。72.根据权利要求64所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR抑制结构域组分是PD
‑
1抑制结构域(SEQ ID NO:101)。73.根据权利要求64所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR组分是KIR2DL1抑制结构域(SEQ ID NO:102)。74.根据权利要求64所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR组分是KIR2DL2抑制结构域(SEQ ID NO:103)。75.根据权利要求64所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR组分是KIR2DL3抑制结构域(SEQ ID NO:104)。76.根据权利要求64所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR抑制结构域组分是KIR2DL4抑制结构域(SEQ ID NO:105)。77.根据权利要求64所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR抑制结构域组分是KIR2DL5A抑制结构域(SEQ ID NO:106)。78.根据权利要求64所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR抑制结构域组分是KIR3DL1抑制结构域(SEQ ID NO:107)。79.根据权利要求64所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR抑制结构域组分是KIR3DL2抑制结构域(SEQ ID NO:108)。80.根据权利要求64所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR抑制结构域组分是KIR3DL3抑制结构域(SEQ ID NO:109)。81.根据权利要求64所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR抑制结构域组分是LAIR1抑制结构域(SEQ ID NO:110)。82.根据权利要求64所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR抑制结构域组分是CD22抑制结构域(SEQ ID NO:111)。83.根据权利要求64所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR抑制结构域组分是CD33抑制结构域(SEQ ID NO:112)。84.根据权利要求64所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR抑制结构域组分是SIGLEC5抑制结构域(SEQ ID NO:113)。85.根据权利要求64所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR抑制结构域组分是SIGLEC6抑制结构域(SEQ ID NO:114)。86.根据权利要求64所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR抑制结构域组分是SIGLEC7抑制结构域(SEQ ID NO:115)。87.根据权利要求64所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR抑制结构域组分是SIGLEC8抑制结构域(SEQ ID NO:116)。
88.根据权利要求64所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR抑制结构域组分是SIGLEC9抑制结构域(SEQ ID NO:117)。89.根据权利要求64所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR抑制结构域组分是SIGLEC10抑制结构域(SEQ ID NO:118)。90.根据权利要求64所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR抑制结构域组分是SIGLEC11抑制结构域(SEQ ID NO:119)。91.根据权利要求64所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR抑制结构域组分是SIGLEC12抑制结构域(SEQ ID NO:120)。92.根据权利要求64所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR抑制结构域组分是PECAM1/CD31抑制结构域(SEQ ID NO:121)。93.根据权利要求64所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR抑制结构域组分是CD200R1抑制结构域(SEQ ID NO:122)。94.根据权利要求64所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR抑制结构域组分是FCRL1抑制结构域(SEQ ID NO:123)。95.根据权利要求64所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR抑制结构域组分是FCRL2抑制结构域(SEQ ID NO:124)。96.根据权利要求64所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR抑制结构域组分是FCRL3抑制结构域(SEQ ID NO:125)。97.根据权利要求64所述的用于共转导的双顺反子iCAR/aCAR构建体或单顺反子aCAR和iCAR构建体，其中所述iCAR抑制结构域组分是F...

【专利技术属性】
技术研发人员：J，
申请(专利权)人：依姆派特生物美国股份有限公司，
类型：发明
国别省市：