球虫疫苗及其制备和使用方法技术

本发明专利技术涉及用于鸡球虫病的疫苗，该疫苗从三种减毒的艾美球虫种：堆形艾美球虫、巨型艾美球虫和柔嫩艾美球虫制得。该疫苗在刺激对抗球虫病的保护性免疫中与其它抗球虫药物相似或优于其它抗球虫药物。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及对抗由球虫引起的疾病的免疫组合物和疫苗的制备。 本专利技术还提供了对抗球虫病的减毒疫苗。
技术介绍
球虫病是由许多种球虫中的一种或多种感染而引起的疾病，球虫 是原生动物门(户ro^ zoa)的细分，是顶复动物亚门(J/7/co/z7p/e;^) 和艾美球虫属(A/边e/7s)的胞内原生动物寄生虫。艾美球虫属包含在 家禽中有主要经济重要性的物种，所述家禽诸如鸡、鸭、鹅、珠鸡(guinea fowl)、孔雀、雉、鴒子和火鸡。尽管球虫病发生在几乎所 有种类的鸟中，该寄生虫是宿主特异性的并且每个物种发生在单一或 有限组群的相关宿主中。另一方面，已知鸟类宿主容纳多于一个物种 的球虫。引起鸡球虫病的艾美球虫属的物种包括堆形艾美球虫 (f. a"r^////2a )、布氏艾美球虫(&6rwie"/)、哈氏艾美球虫 (f.力a^"/)、巨型艾美球虫(五,迈a;r/边a )、和緩艾美球虫(f.边/〃s)、 变位艾美球虫(A边/M")、毒害艾美球虫(A/ e""/jO 、早熟艾 美球虫(Am"oi)和柔嫩艾美球虫(￡M/2e//a)。堆形艾美球虫 是童子鸡(broiler )鸡窝中发现的最常见种之一。它具有极大的繁殖 潜能并被认为是致病的，因为它对体重增加、更高的飼料转化产生显 著的抑制，并且它在上段小肠中产生肉眼损害。在家禽中，鸡最易因球虫病而遭受显著经济损失，尽管在火鸡、 鵝、鸭和珠鸡中也可发生损失。球虫病还已经在圈养的雉和鹌鹁中产 生了严重的损失。球虫病感染的影响可以呈毁灭性群体死亡的高度可 见形式，但是另一种不利影响是由感染引起的发病率和/或重量减轻。 在生命周期中，艾美球虫寄生虫经历多个阶段(对于综述，参见， 例如U. S.专利No. 6， 100， 241 )。当鸡在地面喂养过程中或通过吸入尘 土而摄入称为孢子化卵嚢的感染阶段时，生活史开始。通过砂嚢和肠 道中的机械研磨作用和化学作用的组合使孢子化卵嚢的壁破裂，导致 四个孢子嚢的释放。孢子嚢进入十二指肠，在其中它们暴露于胆汁和 消化酶，导致每个孢子嚢两个子孢子的释放。子孢子是可移动的并寻找合适的宿主上皮细胞以穿透并在其中繁 殖。感染上皮细胞后，寄生虫进入其生活史的裂殖体期，每个裂殖体 产生8至16至>200个裂殖子。 一旦从裂殖体释放出来，裂殖子自由 地感染更多的上皮细胞。两至五个这样的无性生殖周期后，胞内裂殖 子生长成有性形式，称为雌性或大配子母细胞和雄性或小配子母细胞。 大配子母细胞通过从小配子母细胞中释放出来的小配子授精后，形成合子，其形成围绕自身的嚢壁。新形成的卵囊随着粪便从感染的鸡中 释i文出来。在正确的温度和湿度环境条件以及空气中充足氧的情况下，卵囊 将形成孢子进入感染阶段，准备感染新的宿主并因此传播疾病。因此， 不需要中间宿主用于鸟到鸟的寄生虫转移。艾美球虫属寄生虫感染鸡消化道的结果可能是体重增加的减少、 增加的饲料转化的降低，产蛋的停止，和(在一些情况中)死亡。家禽密集生产的增加已经伴随着由这种寄生虫引起的严重损失；实际上， 球虫病已经成为经济上重要的寄生虫疾病。在过去，已经尝试使用几种方法来控制球虫病。在化疗剂出现之 前，使用消毒剂改进环境卫生，以及对草垫的机械清除，是使用的主 要方法；但是通常仍残余足以传播疾病的卵囊。除了良好的管理，在 饲料或饮用水中引入抑球虫剂，在疾病控制上获得一些成功。已经发 现这样的试剂在几年内有效性下降，部分是由于球虫耐药林的产生。 此外，已经发现几种化疗剂在肉中留下残余物，使其不适于食用。U. S.专利No. 4， 438， 097; 4,639,372; 4,808,404; 5, 055, 292;5， 068，104 5， 637， 487 5， 795， 7415， 614，195 5， 709， 862 5， 846， 5275， 635，181 5， 780， 289 5, 885, 5685， 387， 414 ; 5， 602， 033 5，674，484 ; 5，677，438 5, 814, 320 ; 5, 843, 722 5,932, 225; 6， 001， 363和6， 100， 241涉及球虫病疫苗，包括活的和重 组的疫苗。然而，现有的球虫病疫苗存在一些问题，如降低的功效、 与其他寄生物(例如，梭菌(C/os"itf/咖))的交叉感染和差 的鸟性能(bird performance)。因此，对于不会不利影响鸟性能的 具有降低或不存在交叉感染的有效球虫病疫苗存在需要。的现有技术得到。专利技术概述本专利技术是部分基于减毒球虫病疫苗，与其他球虫病疫苗相比较时， 该疫苗面对毒力攻击是有效的、与梭菌的交叉感染降低并具有更好的 鸟性能(如通过饲料转化率所定义)。本专利技术涉及来自堆形艾美球虫、巨型艾美球虫和柔嫩艾美球虫早 熟抹的孢子化卵嚢的混合物。从由 一只或多只接种了堆形艾美球虫、 巨型艾美球虫或柔嫩艾美球虫早熟林培养物的鸡收获的种子培养物分 离孢子化卵囊，即，将一只或多只鸡接种堆形艾美球虫、巨型艾美球 虫或柔嫩艾美球虫中任一种的早熟林，形成三组鸡，每组接种不同的 艾美球虫林。合并所分离的孢子化卵嚢来配制来自堆形艾美球虫、巨 型艾美球虫和柔嫩艾美球虫早熟林的孢子化卵嚢混合物。在有利的实施方案中，鸡是2至8周龄的SPF鸡。在另一个有利 的实施方案中，每只鸡接种约100至约15000个卵囊来产生种子培养 物。在另一个有利的实施方案，通过离心从种子培养物分离孢子化卵 嚢。本专利技术还证实孢子化卵嚢是堆形艾美球虫、巨型艾美球虫或柔嫩 艾美球虫早熟林特征性的。本专利技术涉及来自堆形艾美球虫、巨型艾美球虫和柔嫩艾美球虫早 熟林的孢子化卵嚢的混合物，其中混合物是约10至约1000个堆形艾 美球虫卵嚢，约10至约100个巨型艾美球虫卵囊和约10至约1000 个柔嫩艾美球虫卵嚢。有利地，混合物是约500个堆形艾美球虫的卵 嚢，约50至约100个巨型艾美球虫的卵嚢和约100至约500个柔嫩艾 美球虫的卵嚢。更有利地，混合物是合并的约500个堆形艾美球虫的 卵囊，约IOO个巨型艾美球虫的卵嚢和约IOO个柔嫩艾美球虫的卵嚢。本专利技术还涉及特定比例的从堆形艾美球虫、巨型艾美球虫和柔嫩 艾美球虫早熟株分离的孢子化卵嚢，其中堆形艾美球虫巨型艾美球 虫柔嫩艾美球虫的比例为约10: 1至2: 2至10 (即，对于每10个堆 形艾美球虫的孢子嚢，存在约1至2个巨型艾美球虫的孢子嚢和约2 至IO个柔嫩艾美球虫的孢子囊)。有利地，堆形艾美球虫巨型艾美 球虫柔嫩艾美球虫的比例为约5: 1: 1 (即，10:2:2)。本专利技术还涉及测试来自堆形艾美球虫、巨型艾美球虫和柔嫩艾美 球虫早熟林的孢子化卵嚢混合物的功效。有利地，该测试涉及将约 100， 000至约500, 000个堆形艾美球虫的卵嚢和约10, 000至约1， 000, 000个巨型艾美球虫的卵囊或约10， 000至约100, 000个柔嫩艾美球虫的卵嚢的攻击剂量给予动物。在更有利的实施方案中，攻击剂量为约200, OOO个堆形艾美球虫的卵嚢和约20， OOO至约500， OOO个巨 型艾美球虫的卵嚢或约20， 000至约50， 000个柔嫩艾美球虫本文档来自技高网...

【技术保护点】
用于保护对抗堆形艾美球虫、巨型艾美球虫和柔嫩艾美球虫的免疫或疫苗组合物，该组合物包括药物学上可接受的赋形剂和从堆形艾美球虫、巨型艾美球虫和柔嫩艾美球虫的早熟株分离的孢子化卵囊的混合物，其中混合物基本上由约５００个堆形艾美球虫的卵囊，约５０至约１００个巨型艾美球虫的卵囊和约１００至约２５０个柔嫩艾美球虫的卵囊组成。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：LR麦克杜格尔德，AL富勒，JA普里查德，
申请(专利权)人：梅瑞尔有限公司，佐治亚州大学研究基金会，
类型：发明
国别省市：US[美国]