用于预防核酸扩增技术中遗留污染的改良方法技术

改良的预防扩增反应中遗留污染的方法，包括用尿嘧啶－Ｎ－ＤＮＡ糖基化酶处理含尿嘧啶ＤＮＡ，在聚胺（例如亚精胺、精胺等）存在下加热ＤＮＡ。可选择地，用尿嘧啶－Ｎ－ＤＮＡ糖基化酶处理后，反应物进一步与具有ＡＰ裂解酶活性的酶孵育。

【技术实现步骤摘要】
专利
本专利技术一般地涉及核酸扩增的方法，更具体的，涉及核酸扩增中 遗留污染的控制。专利技术背景聚合酶链式反应(PCR)能特异扩增少至单拷贝的靶核酸序列。已 证实PCR的高敏感性和特异性在需要检测少量靶核酸的诊断学、法医 学和其他应用中很有价值。不幸地，PCR测定的所述高灵敏度使其易 受污染和假阳性结果的影响。在法医学和疾病筛查(例如HIV检测) 中，假阳性结果可能带来破坏性的后果。假阳性结果的最通常来源是遗留污染，其中先前测定中的PCR 产物(扩增子)污染后续的PCR测定。污染物可由技术人员、仪器甚 至经气雾剂传播。在一个阴性的样本中(无靶核酸存在)，污染物 造成了假阳性结果。在一个阳性的样本中(存在靶核酸)，污染物 与真实的靶标共扩增。该共扩增会歪曲定量测定(其中必须确定真实 耙标的确切量)的结果。预防遗留扩增的广泛且有效的途径包括使用尿嘧啶DNA糖基化 酶，尤其是UNG (EC 3.2.2.3)。这些酶类识别单链或双链DNA中存在 的尿嘧啶，并切割尿嘧啶石威基和脱氧核糖之间的N-糖苷键，留下脱碱 基位点。例如参见美国专利号6,713,294。尿嘧啶-DNA糖基化酶，缩 写为本文档来自技高网...

【技术保护点】
减少核酸溶液遗留污染的方法，包括步骤：　ａ．提供样品溶液；　ｂ．在适于产生具有至少一个脱碱基位点的ＤＮＡ的条件下孵育所述溶液；　ｃ．提供至少一种促脱碱基ＤＮＡ降解的试剂；　ｄ．在适于使所述具有至少一个脱碱基位点的ＤＮＡ降解的条件下孵 育所述样品溶液。

【技术特征摘要】
US 2008-6-26 61/076111确定。SEQ IDNO 1:人工序列5，隱TTTGCATGGCTGCUTGATGTCCCCCCACT國3，序列表〈110〉 F. Hoffmann-La Roche AG〈120〉用于预防核酸扩增技术中遗留污染的改良方法<130〉 24623-KOE〈160〉 1<170〉 Patentln version 3. 5<210〉 1<211> 29<212> DNA 〈213〉人工序列<220〉<223〉含脱氧尿喷啶的DNA寡核苷酸<400> 1tttgcatggc tgcutgatgt ccccccact权利要求1.减少核酸溶液遗留污染的方法，包括步骤a.提供样品溶液；b.在适于产生具有至少一个脱碱基位点的DNA的条件下孵育所述溶液；c.提供至少一种促脱碱基DNA降解的试剂；d.在适于使所述具有至少一个脱碱基位点的DNA降解的条件下孵育所述样品溶液。2. 权利要求l的方法，其中所述适于产生具有至少一个脱碱基 位点的DNA的条件包括存在具有DNA糖基化酶活性的酶。3. 权利要求2的方法，其中所述DNA糖基化酶活性是尿嘧...

【专利技术属性】
技术研发人员：R博亨兹基，A古普塔，J蒙蒂尔，SG威尔，
申请(专利权)人：霍夫曼拉罗奇有限公司，
类型：发明
国别省市：CH[瑞士]