【技术实现步骤摘要】
一种果糖探针结合蛋白Tom22及其筛选方法和应用
[0001]本专利技术涉及生物
，具体涉及一种果糖探针结合蛋白Tom22及其筛选方法和应用。
技术介绍
[0002]果糖因其甜度高、溶解性好和价格低廉等特点而常作为一种甜味剂添加到食品和饮料中。然而过量的果糖摄入也带来许多公共健康问题，给人们的生活带来了困扰。流行病学研究发现，高糖饮料的摄入量与慢性肾病的发病机率显著增加呈正相关。本专利技术实验室前期研究证实长期高果糖饮食可以引发大鼠肾脏损伤，表现为蛋白尿和肾小球足细胞足突融合与脱落。慢性肾病可以改变足细胞的结构和功能，使足细胞失去特定的分化标志，降低肾小球滤过能力。研究发现高果糖摄入加速足细胞损伤，造成足细胞为肾小球毛细血管提供的结构支撑减少，肾小球滤过和重吸收功能障碍，促进尿酸、肌酐、尿素氮和蛋白尿的产生。
[0003]线粒体主要功能是通过氧化磷酸化分解代谢葡萄糖，氨基酸和脂肪酸，产生ATP，满足足细胞维持滤过、稳定结构、运动性和足突重塑等正常功能所需能量。此外，线粒体参与调节氧化应激、脂质代谢、氧化还原平衡...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种果糖探针结合蛋白Tom22，其特征在于：所述的果糖探针结合蛋白Tom22的氨基酸序列为SEQ ID No.1所示的氨基酸序列。2.权利要求1所述的果糖探针结合蛋白Tom22的筛选方法，其特征在于包括如下步骤：(1)设计并合成可通过紫外交联和点击化学反应钓取果糖直接结合蛋白的果糖探针；(2)基于ABPP技术，利用果糖探针在体外培养的足细胞中识别果糖结合蛋白，并通过紫外交联共价标记结合蛋白；(3)探针标记的蛋白经点击化学反应富集后，采用非标记定量质谱技术筛选和鉴定潜在的果糖直接结合蛋白，制得果糖探针结合蛋白Tom22。3.根据权利要求2所述的果糖探针结合蛋白Tom22的筛选方法，其特征在于：在步骤(1)中，所述的果糖探针的结构式如式(I)所示：4.根据权利要求3所述的果糖探针结合蛋白Tom22的筛选方法，其特征在于：在步骤(1)中，所述的果糖探针的制备方法，包括如下步骤：(step 1)称量化合物1对羟基苯甲酸、叔丁基二甲基氯硅烷和咪唑，至圆底烧瓶中，加入N,N
‑
二甲基甲酰胺溶液后，利用磁力搅拌器室温搅拌24h后，将圆底烧瓶中反应产物转移至分液漏斗中，并加入乙醚和水进行萃取，收集上层有机相溶液，在所收集的有机相溶液中加入水，再进行萃取，收集上层有机相溶液转移至烧杯中，用无水MgSO4进行脱水；脱水后的溶液经抽滤后转移至圆底烧瓶中，通过旋转蒸发仪去除乙醚，获得产物；随后加入二氯甲烷溶解产物并转至硅胶柱，用二氯甲烷进行洗脱以纯化；含纯化后产物的洗脱液转移至圆底
烧瓶中通过旋转蒸发仪去除二氯甲烷，旋干后分别加入体积比为5：1：4的四氢呋喃溶液、水和冰乙酸，置磁力搅拌器上室温搅拌21h后，将反应液转移至分液漏斗中，加入乙醚和水进行萃取，乙醚和水的体积比为2:1，收集有机相溶液并转移至烧杯中，用无水MgSO4进行脱水；脱水后的溶液转移至圆底烧瓶并通过旋转蒸发仪去除乙醚；旋干后获得透明液体状产物，上硅胶柱，快速用二氯甲烷进行洗脱以纯化；含纯化后产物的洗脱液转移至圆底烧瓶中，再次通过旋转蒸发仪去除二氯甲烷，旋干并抽真空，抽真空时间为15min，在圆底烧瓶里可见白色晶体状产物，即获得叔丁基二甲基氯硅烷将对羟基苯甲酸的羟基保护起来的化合物2；(step 2)称量N,N'
‑
二环己基碳酰亚胺至烧杯中，加入二氯甲烷溶解；称量化合物2、果糖二丙酮和4
‑
二甲氨基吡啶至25mL圆底烧瓶中，加入二氯甲烷，置磁力搅拌器上；在冰浴条件下缓慢滴加N,N'
‑
二环己基碳酰亚胺溶液到圆底烧瓶中，滴加完毕后撤去冰盒，在室温条件下搅拌反应液12h，使果糖二丙酮连接到化合物2上；之后圆底烧瓶在冰浴条件下搅拌10min可见二环己基脲析出，随后将圆底烧瓶中反应产物进行抽滤，将抽滤后的溶液转移至分液漏斗中，并依次用10％Na2CO3溶液、1M的HCI溶液、饱和NaCl溶液分别萃取2次，收集有机相溶液并转移至烧杯中，加入无水MgSO4进行脱水；脱水后的溶液经抽滤后转移至圆底烧瓶中，通过旋转蒸发仪旋干，获得的产物中加入5mL石油醚/乙酸乙酯溶解后上硅胶柱进行纯化，其洗脱液为石油...
【专利技术属性】
技术研发人员：孔令东，方雷，程旭，吴文苑，章竞子，
申请(专利权)人：南京大学，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。