激活TAS1R3受体的活性成分在制备改善贫血的药物中的应用制造技术

本发明专利技术提供了一种筛选能激活TAS1R3受体的活性成分的方法，属于中药活性成分筛选技术领域。本发明专利技术通过建立生物传感器，生物传感器检测各浓度的化合物溶液与TAS1R3受体反应后的电流信号；根据化合物的浓度的常用对数与电流变化之间的线性拟合方程计算化合物与TAS1R3受体相互作用的解离常数K

【技术实现步骤摘要】
激活TAS1R3受体的活性成分在制备改善贫血的药物中的应用


[0001]本专利技术涉及中药制剂活性成分筛选
，尤其涉及激活TAS1R3受体的活性成分在制备改善贫血的药物中的应用。

技术介绍

[0002]具甘味药性的中药在复方配伍及发挥药效中占据着不可或缺的地位，其在复方中具有独特的配伍作用，被广泛用于脾胃病、糖尿病、妇科病、眼病、冠心病、高血压、以阴阳气血失调为主的围绝经期综合征等多种临床疾病治疗。以甘味药治疗符合“调以甘药”的原则，是中医辨证论治的精髓所在。甘味中药主要包含糖类、苷类、氨基酸类和蛋白类等物质，其味觉表达与TAS1R3受体相关性十分密切。但目前还没有人对TAS1R3受体特异性识别的活性成分的抗贫血药效进行评价。

技术实现思路

[0003]本专利技术的目的在于提供激活TAS1R3受体的活性成分在制备改善贫血的药物中的应用。
[0004]为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：
[0005]本专利技术提供了一种筛选能激活TAS1R3受体的活性成分的方法，包括以下步骤：
[0006]S1.构建生物传感器，所述生物传感器的基底为具生物修饰功能的半导体材料，所述生物传感器的生物识别元件为TAS1R3受体；
[0007]S2.按照浓度由低到高的顺序，依次加入不同浓度梯度的化合物溶液，用生物传感器检测各浓度的化合物溶液与TAS1R3受体反应后的电流信号；
[0008]S3.化合物在一定浓度范围内，化合物的浓度的常用对数与电流变化相对值呈线性关系，确定线性拟合方程；
[0009]S4.根据线性拟合方程计算化合物与TAS1R3受体相互作用的解离常数K
D
值；
[0010]S5.筛选出K
D
值在10
‑
13
～10
‑8M范围内的化合物，即为能激活TAS1R3受体的活性成分。
[0011]优选的，所述生物传感器包括TAS1R3
‑
HEMT生物传感器、TAS1R3@AuNPs/SPCE生物传感器。
[0012]优选的，所述化合物溶液的浓度为10
‑4～10
‑
14
mol/L。
[0013]本专利技术还提供了白术内酯II、丹皮酚或甘草酸在制备TAS1R3受体激活试剂中的应用。
[0014]本专利技术还提供了白术内酯II、丹皮酚或甘草酸在制备改善贫血的药物中的应用。
[0015]通过采用上述技术方案，本专利技术具有如下有益效果：
[0016]本专利技术通过建立生物传感器，生物传感器检测各浓度的化合物溶液与TAS1R3受体反应后的电流信号；根据化合物的浓度的常用对数与电流变化之间的线性拟合方程计算化合物与TAS1R3受体相互作用的解离常数K
D
值，筛选出K
D
值在10
‑
13
～10
‑8M范围内的化合物，
即为能激活TAS1R3受体的活性成分。
[0017]在本专利技术中，白术内酯II、甘草酸与TAS1R3蛋白相互作用解离常数K
D
值分别为3.759
×
10
‑8M、4.435
×
10
‑9M；与TAS1R3蛋白结合力非常强。并且白术内酯II、甘草酸在一定浓度内具有改善贫血的功能，为中药中具甘味特性且治疗贫血或血虚证的候选化合物筛选及新药研发提供了新思路。
附图说明
[0018]图1为TAS1R3与白术内酯II相互作用分析；(a)为不同浓度梯度的白术内酯II溶液I
‑
T曲线，(b)白术内酯II浓度的常用对数与电流变化相对值的线性关系。
[0019]图2为不同浓度的活性成分处理不同时间后的斑马鱼存活情况；(a)中的活性成分为白术内酯II；(b)中的活性成分为甘草酸。
[0020]图3为不同苯肼浓度对斑马鱼胚胎发育及红细胞的影响；(A)为苯肼浓度与斑马鱼死亡率之间的关系，(B)为苯肼浓度与斑马鱼心脏部位染色面积之间的关系，(C)为苯肼浓度与斑马鱼心脏部位染色示意图。
[0021]图4为各药物干预组斑马鱼心脏部位染色面积统计分析(与空白对照组比较，#P<0.001；与模型对照组比较，*P<0.001)。
具体实施方式
[0022]本专利技术提供了一种筛选能激活TAS1R3受体的活性成分的方法，包括以下步骤：
[0023]S1.构建生物传感器，所述生物传感器的基底为具生物修饰功能的半导体材料，所述生物传感器的生物识别元件为TAS1R3受体；
[0024]S2.按照浓度由低到高的顺序，依次加入不同浓度梯度的化合物溶液，用生物传感器检测各浓度的化合物溶液与TAS1R3受体反应后的电流信号；
[0025]S3.化合物在一定浓度范围内，化合物的浓度的常用对数与电流变化相对值呈线性关系，确定线性拟合方程；
[0026]S4.根据线性拟合方程计算化合物与TAS1R3受体相互作用的解离常数K
D
值；
[0027]S5.筛选出K
D
值在10
‑
13
～10
‑8M范围内的化合物，即为能激活TAS1R3受体的活性成分。
[0028]本专利技术精密称取白术内酯II、甘草酸标准品，采用PBS或去离子水将上述标准品均配制为10
‑3mol/L标准品溶液，按10倍浓度梯度稀释11次，得到浓度依次为10
‑4～10
‑
14
mol/L标准品溶液，备用。
[0029]本专利技术采用生物传感器将活性成分的标准品溶液从低到高浓度的顺序依次进样，反应时间5～10min，采用计时电流法或线性扫描伏安法检测室温下样品与TAS1R3蛋白反应后的I
‑
T曲线或I
DS
‑
V
DS
曲线，各浓度重复测量3次。观察浓度的常用对数(Lg[C])与电流相对变化值((I
‑
I0)/I0)的线性关系，以及样品浓度与浓度/电流变化的线性关系。本专利技术所述生物传感器优选为TAS1R3
‑
HEMT生物传感器或TAS1R3@AuNPs/SPCE生物传感器。
[0030]本专利技术根据浓度与浓度/电流变化的线性关系，确定线性拟合方程，根据线性拟合方程计算化合物与TAS1R3受体相互作用的解离常数K
D
值，筛选出K
D
值在10
‑
13
～10
‑8M范围内的化合物，即为能激活TAS1R3受体的活性成分。
[0031]下面结合实施例对本专利技术提供的技术方案进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本专利技术保护范围的限定。
[0032]实施例1活性成分与TAS1R3受体相互作用表征方法
[0033](1)待测样品溶液配制
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种筛选能激活TAS1R3受体的活性成分的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1.构建生物传感器，所述生物传感器的基底为具生物修饰功能的半导体材料，所述生物传感器的生物识别元件为TAS1R3受体；S2.按照浓度由低到高的顺序，依次加入不同浓度梯度的化合物溶液，用生物传感器检测各浓度的化合物溶液与TAS1R3受体反应后的电流信号；S3.化合物在一定浓度范围内，化合物的浓度的常用对数与电流变化相对值呈线性关系，确定线性拟合方程；S4.根据线性拟合方程计算化合物与TAS1R3受体相互作用的解离常数K
D
值；S5.筛选出K
D
值在1...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴志生，胡小艳，王静，郇星月，
申请(专利权)人：北京中医药大学，
类型：发明
国别省市：