日香桂ofbZIP98基因在促进大花烟草花器官增大中的应用制造技术

本发明专利技术公开了日香桂ofbZIP98基因在促进大花烟草花器官增大中的应用，属于植物分子生物学领域。本发明专利技术的日香桂ofbZIP98基因核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；本发明专利技术以日香桂盛花期花朵为材料，通过克隆得到日香桂ofbZIP98基因，在此基础上构建其过量表达载体pBI121

【技术实现步骤摘要】
日香桂ofbZIP98基因在促进大花烟草花器官增大中的应用


[0001]本专利技术属于植物分子生物学领域，更具体地说，涉及日香桂ofbZIP98基因在促进大花烟草花器官增大中的应用。

技术介绍

[0002]bZIP转录因子因其具有大约40
‑
60个氨基酸长的α螺旋组成的高度保守的bZIP结构域而被命名，该结构域由两个不同的功能区域组成：位于N末端高度保守的碱性区域和位于C端的亮氨酸拉链区域，两个结构域位于相邻的a螺旋上，可以通过双螺旋两侧的主要凹槽与DNA结合。
[0003]bZIP是在拟南芥各顶端分生组织中(包括花序、花朵、心皮边缘等的分生组织)中均能够表达的一种转录因子，能够诱导JAG和OFP1两种细胞增殖和细胞延伸调节基因的表达，也能够与WUS、JAB和BEL1等与分生组织和生殖增大相关的调节因子互作。
[0004]桂花(Osmanthus fragrans)，木犀科(Oleaceae)木犀属(Osmanthus)园林绿化树种，是我国十大传统名花之一，也可以用于食品加工、香膏香水制造以及芳香疗法等，具有重要的观赏价值和经济价值。桂花在我国的栽培历史已有2500多年，品种资源非常丰富，且不同桂花品种间的叶形、叶色、花香、花色等性状存在着明显差异。桂花花朵较小，采摘过程费时费力，因此挖掘调控桂花花器官大小的功能基因具有非常重要的意义。

技术实现思路

[0005]针对现有技术存在的上述问题，本专利技术所要解决的技术问题在于提供日香桂ofbZIP98基因在促进大花烟草花器官增大中的应用，用于植物分子改良育种。
[0006]为了解决上述技术问题，本专利技术所采用的技术方案如下：
[0007]日香桂ofbZIP98基因在促进大花烟草花器官增大中的应用，所述ofbZIP98基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，包括以下步骤：
[0008](1)构建ofbZIP98基因的载体；
[0009](2)将所构建的ofbZIP98基因的载体转化到大花烟草中；
[0010](3)培育筛选得到花器官增大的转基因大花烟草。
[0011]所述的载体是植物表达载体。
[0012]所述的植物表达载体是pBI121
‑
ofbZIP98。
[0013]日香桂ofbZIP98基因在使大花烟草花冠直径增加中的应用，所述ofbZIP98基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
[0014]日香桂ofbZIP98基因在使大花烟草花冠周长增加中的应用，所述ofbZIP98基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
[0015]日香桂ofbZIP98基因在使大花烟草花冠面积增加中的应用，所述ofbZIP98基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
[0016]日香桂ofbZIP98基因在使大花烟草花冠筒直径增加中的应用，所述ofbZIP98基因
的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
[0017]日香桂ofbZIP98基因在使大花烟草花冠直径、花冠周长、花冠面积、花冠筒直径增加中的应用，所述ofbZIP98基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
[0018]相比于现有技术，本专利技术的有益效果为：
[0019]本专利技术以日香桂盛花期花朵为材料，通过克隆得到日香桂ofbZIP98基因，在此基础上构建其过量表达载体pBI121
‑
ofbZIP98，转入大花烟草中，得到转基因植株。ofbZIP98转基因株系的花器官组织与转入pBI121空载体的大花烟草株系(EV)和野生型大花烟草株系(WT)相比明显变大；ofbZIP98转基因株系与转入pBI121空载体的大花烟草株系(EV)和野生型大花烟草株系(WT)相比，花冠直径、花冠周长、花冠面积、花冠筒直径均显著增大。
附图说明
[0020]图1为目的基因ofbZIP98扩增产物琼脂糖凝胶电泳图；
[0021]图2为目的基因ofbZIP98扩增片段与载体连接转化后阳性单菌落检测图；
[0022]图3为ofbZIP98重组载体双酶切后的琼脂糖凝胶电泳图；
[0023]图4为转化农杆菌GV3101后的菌检琼脂糖凝胶电泳图；
[0024]图5为ofbZIP98转基因植株的阳性检测图；
[0025]图6为ofbZIP98转基因大花烟草花朵表型观测图；
[0026]图7为ofbZIP98转基因大花烟草基因表达情况图。
具体实施方式
[0027]下面结合具体实施例对本专利技术进一步进行描述。以下实施例中，未详细叙述的操作均为常规生物学实验操作，可参照分子生物学实验手册以及现有公开的期刊文献等进行，或者按照试剂盒和产品说明书进行。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
[0028]本申请所用材料为生长在桂花国家种质资源库内的日香桂盛花期花朵，2020年10月将日香桂花朵装入灭菌的离心管中，立即放入液氮中速冻，然后置于
‑
80℃冰箱内保存。
[0029]所用的大花烟草实生苗由南京林业大学王良桂课题组提供。
[0030]实施例1
[0031]1、提取RNA并反转录为cDNA
[0032]以日香桂盛花期花朵为材料，使用TIANGEN植物RNA提取试剂盒(DP432)提取植物总RNA。使用TaKaRaPrimeScript
TM
RTMasterMix(PerfectRealTime)反转录试剂盒将所提取到的RNA反转录成cDNA，最后得到的cDNA加水稀释10倍后于
‑
20℃冰箱保存。
[0033]2、设计引物
[0034]根据南京林业大学王良桂课题组已发表的桂花全基因组数据库(http://117.78.20.255/)，筛选得到1个基因序列，并命名为ofbZIP98。
[0035]利用BioXM软件对该基因的核苷酸全长序列进行酶切位点分析，选择SmaI和KpnI作为限制性内切酶。利用CE design软件设计引物。按要求进行相关信息的填写，具体包括载体上的酶切位点附近的序列、目的基因全长、按照5
′
端和3
′
端的顺序填写酶切位点，即可得到扩增引物，设计好的序列由捷瑞生物公司合成。引物序列如下：
[0036]ofbZIP98
‑
F：
[0037]5′‑
acgggggactctagaggatccATGAATAATTTCTTTGCGCCTCA
‑3′
，
[0038]ofbZIP98
‑
R：
[0039]5′‑
ataagggactgaccacccgggGTGAAGAAGACTTGTGGCAGTAGTG
‑
3'。
[0040]3、载体双酶切
[0041]提前将pBI21载体从本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.日香桂ofbZIP98基因在促进大花烟草花器官增大中的应用，所述ofbZIP98基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。2.根据权利要求1所述的日香桂ofbZIP98基因在促进大花烟草花器官增大中的应用，其特征在于，包括以下步骤：(1)构建ofbZIP98基因的载体；(2)将所构建的ofbZIP98基因的载体转化到大花烟草中；(3)培育筛选得到花器官增大的转基因大花烟草。3.根据权利要求2所述的日香桂ofbZIP98基因在促进大花烟草花器官增大中的应用，其特征在于，所述的载体是植物表达载体。4.根据权利要求3所述的日香桂ofbZIP98基因在促进大花烟草花器官增大中的应用，其特征在于，所述的植物表达载体是pBI121
‑
ofbZIP98。5.日香...

【专利技术属性】
技术研发人员：田清尹，杨秀莲，顾恒，王良桂，岳远征，施婷婷，
申请(专利权)人：南京林业大学，
类型：发明
国别省市：