一种用聚丙烯酰胺凝胶电泳分析糖胺聚糖药物的方法技术

本发明专利技术公开了一种用聚丙烯酰胺凝胶电泳分析糖胺聚糖药物的方法。本发明专利技术将相应的糖胺聚糖酶制得糖胺聚糖衍生物后在进行电泳分析，利用电泳的分子筛以及电荷效应可以将不同分子量大小的糖胺聚糖给分离开来。实验过程简单，条件易于控制，重现性好，实验成本低，易于普及，且本发明专利技术成功用于检测肝素、低分子肝素以及硫酸软骨素，表现出高的清晰度和稳定性，为应用于更多样品检测提供了可能，为糖胺聚糖类药物的检测建提供了一个强大有力的工具。类药物的检测建提供了一个强大有力的工具。

【技术实现步骤摘要】
一种用聚丙烯酰胺凝胶电泳分析糖胺聚糖药物的方法


[0001]本专利技术涉及一种用聚丙烯酰胺凝胶电泳分析低分子肝素、肝素以及硫酸软骨素的方法，属于药物、原料检测


技术介绍

[0002]近年来随着全球老龄化的增加以及静脉血栓栓塞症患者的增加，肝素和低分子肝素这种抗凝血的药物逐渐走进人们的视野。肝素主要用于血栓栓塞性疾病、心肌梗塞、心血管手术、心脏导管检查、体外循环等，并且在术中、术后起到重要的抗凝作用。低分子肝素是由肝素解聚制备而成，临床上适用于快速抗凝的病症。达肝素和那屈肝素都是通过亚硝酸降解法降解肝素得到的，结构类似，但是达肝素的平均分子量稍大于那屈肝素的平均分子量。依诺肝素是通过β
‑
消除法降解肝素得到的，是临床上最常用的低分子肝素。
[0003]硫酸软骨素自1958年在重庆西南制药厂投入生产，于20世纪70年代扩大生产，直至现在硫酸软骨素的需求量也具有很庞大的市场。硫酸软骨素主要用于关节炎以及滴眼液的制作，常与氨基葡萄糖同用，起到止痛以及促进软骨再生的作用。硫酸软骨素在作为药物外，也作为健康食品和改善关节本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用聚丙烯酰胺凝胶电泳分析糖胺聚糖药物的方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）1mg的肝素、低分子肝素以及硫酸软骨素溶于水：酶解缓冲液=1：1的溶液中，向其中分别加入肝素酶Ⅰ、肝素酶Ⅱ、肝素酶Ⅲ或硫酸软骨素ABC酶解制得含有不同寡糖的糖胺聚糖，肝素及低分子肝素酶解时间36~72h，硫酸软骨素酶解15~36h；（2）步骤（1）中所述酶解缓冲液：在100ml水中溶解0.385g醋酸铵、0.0222g氯化钙以及0.01g牛血清蛋白，最终将溶液PH调整为PH=7；（3）将制得的糖胺聚糖衍生物进行冻干，将冻干后的样品溶于50
µ
l水中，并向其中加入50
µ
l 80%（w/v）蔗糖溶液以及10
µ
l 10
µ
g/
µ
l溴酚蓝溶液以制得电泳样品；（4）用22%~26%分离胶缓冲液和10%（w/v）的APS以及TEMED聚合生成分离胶，用5%的浓缩胶缓冲液和10%（w/v）的APS以及TEMED聚合生成浓缩胶，在制取浓缩胶加入至玻璃板时需及时插入进样梳；（5）步骤（4）中所述22%分离胶：含有20g丙烯酰胺、2g甲叉双丙烯酰胺以及15g蔗糖，使用电泳缓冲液定容至100ml；可通过调整丙烯酰胺的含量改变分离胶的浓度，含有21g丙烯酰胺时分离胶浓度为23%，以此类推可配置出22%~26%的分离胶缓冲液；（6）步骤（5）中所述5%浓缩胶：含有4.75g丙烯酰胺以及0.25g甲叉双丙烯酰胺，使用电泳缓冲液定容至95ml，使用盐酸调节至PH=6.3，最终定容为100ml；（7）将上部缓冲液加入至两个玻璃板内，将电泳缓冲液倒入至电泳槽内，样品加入至进样孔，在350V电压下待样品跑至浓缩胶...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙晓君，李春花，李珊，王润波，
申请(专利权)人：济南大学，
类型：发明
国别省市：