斑叶兰组培快繁的方法技术

本发明专利技术公开了一种斑叶兰组培快繁的方法，以植物茎段作为外植体，利用不同的培养基配方诱导出斑叶兰幼芽，使其以丛生芽的方式增殖，壮苗生根，以达到快速繁殖的目的，本发明专利技术方法简单易行，操作方便，繁殖速度快。

【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于植物组织培养
，更具体涉及一种借助基本培养基和附加不同成份对斑叶兰进行组培快繁的方法。
技术介绍
斑叶兰(Goodyera schlechtendaliana)又名小叶青、银线莲，属兰科斑叶兰属多年生草本植物，高20厘米左右，生于海拔500-2800米的山坡或沟谷常绿阔叶林下，喜荫蔽湿润环境。斑叶兰具有较高的药用价值，以全草入药，性寒，味淡；清肺止咳，解毒消肿，活血止痛，软坚散结；在临床治疗肺结核咳嗽、支气管炎、毒蛇咬伤、痈疖疮疡、鼻疖等验方中都被使用。另外，斑叶兰叶片十分美丽，十分精美，有宝石兰之称，可小盆栽植放于案上，或作假山、园林的点缀陪衬植物。由于本种植物用途广泛、药效显著，药农大肆不加保护采掘，使之处于濒危境地。斑叶兰的繁殖一般采用分株法，由于在自然条件下的繁殖系数极低，一般年繁殖系数在2左右，远远不能满足市场所需。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供了一种斑叶兰组培快繁的方法，方法简便易行，操作方便，采用此种方法能快速繁殖大量斑叶兰种苗，以有效保护野生资源，解决中药材来源匮乏的问题，满足人们用药与观赏需求。为了达到上述目的，本专利技术采用以下技术措施以斑叶兰植株茎段作为外植体，首先将植株用流水冲洗1小时，洗净，切成1～2cm长的茎段，用75％酒精浸泡10～30秒钟，无菌水冲洗3次，再用0.1％升汞消毒10～15分钟，用无菌水冲洗4～5次，将消毒好的茎段接入配制好的MS培养基中，这种培养基包括MS基本培养基和附加不同成份的物质，附加不同的物质为6-苄氨基嘌呤(6-Benzyl aminopurine简称BA)1.0～4.0mg/L、萘乙酸(I-NaphthyIacetic acid简称NAA)0.1～0.5mg/L、琼脂5000～6000mg/L、糖20000～30000mg/L，椰子汁5％～10％；光照培养(室内)，每天光照12～14小时，光强2000～3000Lx，温度为20～25℃，培养30～60天，茎节处开始萌发出幼芽；接着将长出的幼芽转入增殖培养基中，这种培养基包括MS基本培养基和附加不同成份的物质，附加不同的物质为6-苄氨基嘌呤(6-Benzylaminopurine简称BA)2.0～6.0mg/L、萘乙酸(I-NaphthyIacetic acid简称NAA)0.5～1.0mg/L、琼脂5000～6000mg/L、糖20000～30000mg/L，椰子汁5％～10％；光照培养，光强2000～3000Lx，每天光照12～14小时，温度为20～25℃，培养30～60天，幼芽会长出丛生芽，以后每30天扩繁一次；第三是壮苗培养，当增殖到所需数量时，利用配制好的壮苗培养基使得芽长大从而达到壮苗的目的，这种培养基包括1/2MS基本培养基和附加不同成份的物质，附加不同的物质为6-苄氨基嘌呤(6-Benzyl aminopurine简称BA)0.5～2.0mg/L、萘乙酸(I-NaphthyIacetic acid简称NAA)0.1～0.5mg/L、琼脂5000～6000mg/L、糖20000～30000mg/L，香蕉汁5％～10％；光照培养，光强2000～3000Lx，每天光照12～14小时，温度为20～25℃，培养30～60天，待苗长至3～4cm高时即可进行生根培养；第四是生根培养，将3～4cm高的苗接入配制好的生根培养基中，这种生根培养基包括1/2MS基本培养基和附加不同成份的物质，附加不同的物质为萘乙酸(I-NaphthyIacetic acid简称NAA)0.2～0.8mg/L、琼脂5000～6000mg/L、糖20000～30000mg/L，活性炭0.3～0.5％；光照培养，光强2000～3000Lx，每天光照12～14小时，温度为20～25℃，培养20～30天，即可长出2～3条根，根粗壮，约2cm长。本专利技术与现有技术相比，具有以下优点和效果方法简单易行，操作方便，繁殖速度快，30天的增殖倍数达到3～4倍，一个芽一年内可繁殖100万株种苗。具体实施例方式斑叶兰繁殖的具体步骤如下(一)选取新长出的斑叶兰植株作为外植体，用流水冲洗1小时，洗净，切成1～2cm长的茎段，在75％酒精中浸泡10或20或30秒钟，无菌水冲洗3次，再用0.1％升汞消毒10或12或15分钟，用无菌水冲洗4～5次；其次是将消毒好的茎段接入配制好的培养基中，这种培养基包括MS基本培养基和附加不同成份的物质，其中附加成份为6-苄氨基嘌呤2.0mg/L、萘乙酸0.2mg/L、琼脂粉5500mg/L、糖30000mg/L，椰子汁10％混配；第三是光照培养，光强2000Lx，每天光照12小时，温度为25℃，培养40天，茎节处开始萌发出幼芽。MS基本培养基的成份(单位mg/L)硝酸氨(NH4NO3) 1650硝酸钾(KNO3) 1900二水氯化钙(CaCl2·2H2O) 440七水硫酸镁(MgSO4·7H2O) 370磷酸二氢钾(KH2PO4) 170碘化钾(KI) 0.83硼酸(H3BO3) 6.2四水硫酸锰(MnSO4·4H2O) 22.3七水硫酸锌(ZnSO4·7H2O) 8.6二水钼酸钠(Na2MoO4·2H2O) 0.25五水硫酸铜(CuSO4·5H2O) 0.025六水氯化钴(CoCl2·6H2O) 0.025七水硫酸亚铁(FeSO4·7H2O) 27.8乙二胺四乙酸二钠(Na2·EDTA·2H2O) 37.3肌醇100烟酸0.5盐酸吡哆醇 0.5盐酸硫胺素 0.1甘氨酸 2(二)增殖培养将长出的幼芽转入增殖培养基中，这种培养基包括MS基本培养基和附加不同成份的物质，MS基本培养基成份同上，附加成份为BA5.0mg/L、NAA1.0mg/L、琼脂5500mg/L、糖30000mg/L，椰子汁10％；光照培养(室内)，光强2000Lx，每天光照12小时，温度为25℃，培养30天，幼芽会长成丛生芽，以后每30天扩繁一次；(三)壮苗培养当增殖到所需数量时，利用配制好的壮苗培养基使得芽长大从而达到壮苗的目的，这种培养基包括1/2MS基本培养基和附加不同成份的物质，1/2MS基本培养基是将MS基本培养基成份用量减半，MS基本培养基成份同上，附加物质为BA 1.0mg/L、NAA 0.2mg/L、琼脂5500mg/L、糖30000mg/L，香蕉汁10％；光照培养，光强2000Lx，每天光照12小时，温度为25℃，培养30天，待苗长至3-4cm高时即可进行生根培养；(四)生根培养将3～4cm高的苗接入配制好的生根培养基中，这种生根培养基包括1/2MS基本培养基和附加不同成份的物质，1/2MS基本培养基是将MS基本培养基成份用量减半，MS基本培养基成份同上，附加物质为NAA 0.6mg/L、琼脂5500mg/L、糖20000mg/L，活性炭0.5％；光照培养，光强2000Lx，每天光照12小时，温度为25℃，培养25天，即可长出2～3条根，根粗壮，约2cm长。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种斑叶兰组培快繁的方法，包括下列步骤：Ａ、以斑叶兰植株茎段作为外植体，将植株洗净，切成１－２ｃｍ长的茎段，用７５％酒精浸泡１０～３０秒钟，用０．１％升汞消毒１０～１５分钟，用无菌水冲洗４～５次，将消毒好的茎段接入配制好的ＭＳ培养基 中，培养基为ＭＳ基本培养基和附加不同成份的物质，附加不同的物质为：６－苄氨基嘌呤１．０～４．０ｍｇ／Ｌ、萘乙酸０．１～０．５ｍｇ／Ｌ、琼脂５０００～６０００ｍｇ／Ｌ、糖２００００～３００００ｍｇ／Ｌ，椰子汁５％～１０％；光照培养，每天光照１２～１４小时，光强２０００～３０００Ｌｘ，温度为２０～２５℃；Ｂ、增殖培养，将长出的幼芽转入增殖培养基中，这种培养基为ＭＳ基本培养基和附加不同成份的物质，附加不同的物质为：６－苄氨基嘌呤２．０～６．０ｍｇ／Ｌ、萘乙酸０．５～１．０ｍ ｇ／Ｌ、琼脂、糖、椰汁含量及光照条件同步骤Ａ；Ｃ、壮苗培养，壮苗培养基为１／２ＭＳ基本培养基和附加不同成份的物质，附加不同的物质为：６－苄氨基嘌呤０．５～２．０ｍｇ／Ｌ、萘乙酸０．１～０．５ｍｇ／Ｌ、香蕉汁５％～１０％，琼脂、糖含量 及光照条件同步骤Ａ；Ｄ、生根培养，将３～４ｃｍ高的苗接入配制好的生根培养基中，培养基为１／２ＭＳ基本培养基和附加不同成份的物质，附加不同的物质为：萘乙酸０．２～０．８ｍｇ／Ｌ、活性炭０．３～０．５％，琼脂、糖含量及光照条件同步骤Ａ。...

【技术特征摘要】
1.一种斑叶兰组培快繁的方法，包括下列步骤A、以斑叶兰植株茎段作为外植体，将植株洗净，切成1-2cm长的茎段，用75％酒精浸泡10～30秒钟，用0.1％升汞消毒10～15分钟，用无菌水冲洗4～5次，将消毒好的茎段接入配制好的MS培养基中，培养基为MS基本培养基和附加不同成份的物质，附加不同的物质为6-苄氨基嘌呤1.0～4.0mg/L、萘乙酸0.1～0.5mg/L、琼脂5000～6000mg/L、糖20000～30000mg/L，椰子汁5％～10％；光照培养，每天光照12～14小时，光强2000～3000Lx，温度为20～25℃；B、增殖培养，将长出的幼芽转入增殖培养基中，这...

【专利技术属性】
技术研发人员：付志惠，杨波，李洪林，张建霞，
申请(专利权)人：中国科学院武汉植物园，
类型：发明
国别省市：83[中国|武汉]