一种南美白对虾副溶血弧菌感染模型的构建方法技术

本发明专利技术公开了一种南美白对虾副溶血弧菌感染模型的构建方法，包括如下步骤：使用副溶血弧菌对南美白对虾进行浸浴攻毒；攻毒结束后清洗南美白对虾，并置于无副溶血弧菌水体中暂养24～72h，得到南美白对虾副溶血弧菌感染模型。本发明专利技术中的构建方法能够实现批量获得用于治疗场景的感染副溶血弧菌的南美白对虾模型，可短时间内于有限空间获得大量感染对虾，对虾感染后副溶血弧菌数量级高且稳定，死亡率低，该感染模型能够于实验室内模拟实际养殖中对虾感染副溶血弧菌后的治疗场景，适合用作实验室内抑菌原料的批量筛选、原料体内有效性评估或最佳应用场景的确定。或最佳应用场景的确定。

【技术实现步骤摘要】
一种南美白对虾副溶血弧菌感染模型的构建方法


[0001]本专利技术涉及动物模型构建
，具体涉及一种南美白对虾副溶血弧菌感染模型的构建方法。

技术介绍

[0002]副溶血弧菌是一种常见的水产养殖致病菌，可导致甲壳类、贝类或鱼类等发病，其中，在发病对虾体内检出的几率最高。副溶血弧菌的致病过程包括黏附、侵袭、体内增殖及产生毒力因子等步骤，受强毒副溶血弧菌感染的发病对虾主要表现为红腿或者烂鳃，进食减少或者停止进食、运动活力下降，同时伴随肠炎症状，继而引发对虾出现批量死亡。由副溶血弧菌引起的急性肝胰腺坏死症，给对虾养殖造成了巨大的经济损失。
[0003]目前针对对虾养殖中的弧菌感染问题，主要采用预防或治疗的方式进行解决。预防方法是在日常养殖中应用产品以避免弧菌大量滋生；治疗则是当养殖动物体内弧菌超标时应用产品以抑制弧菌。目前水产养殖类动物建立的副溶血弧菌感染模型多是匹配预防场景，模型的建立思路以先投喂药物，再急性攻毒为主，重点关注攻毒后试验动物引发的高死亡现象。而针对治疗场景，则无合适的弧菌感染模型，因为在实际养殖中，一方面，受水质、温度、病原菌浓度和养殖密度等条件综合影响，对虾体内弧菌数量变化波动大且无显著规律，24h内即可有2
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3个数量级的变化，因此稳定性差，药物无法进行准确评估；另一方面，相比于其他对虾种属，如斑节对虾和中国明对虾，受强毒致病菌感染的南美白对虾死亡速度更快，生存率更低，一般48h内即可使对虾大批量死亡，这就导致药物的使用无切入机会；第三，实际养殖中多为高密度养殖，而在强毒致病菌侵袭时，高密度通常伴随着高死亡率。而上述这三点制约着以治疗场景为导向的感染副溶血弧菌南美白对虾的集中批量获得。
[0004]综合考虑副溶血弧菌的致病特点、现有模型应用场景的有限性且无法于有限空间内获得大量实验对象，目前在水产养殖领域仍未建立良好的治疗场景下快速批量获得感染副溶血弧菌南美白对虾的方法，因此无法批量开展以治疗为目的的药物评估试验，给弧菌致病机制以及药物筛选或药效评估等造成困难。
[0005]因此，开发一种稳定性好，可重复性高，可用于治疗场景下抑菌功能原料的批量筛选或体内有效性评估及原料的最佳应用场景确定的南美白对虾副溶血弧菌感染模型具有十分重要的意义。

技术实现思路

[0006]本专利技术旨在至少解决现有技术中存在的上述技术问题之一。为此，本专利技术的目的在于提供一种南美白对虾副溶血弧菌感染模型的构建方法。基于本专利技术中的构建方法集中感染对虾后，体内副溶血弧菌能够长期维持高值且数量稳定，并且能够保持较高存活率，不会因为发病死亡而导致模型的丢失或影响试验结果的有效性。此方法能够于实验室内大批量获得感染副溶血弧菌的对虾，且可模拟出实际养殖中对虾感染弧菌后的治疗场景，稳定性好，可重复性高，可用于治疗场景下抑菌功能原料的批量筛选或体内有效性评估及原料
的最佳应用场景确定。
[0007]本专利技术的第一个方面，提供一种南美白对虾副溶血弧菌感染模型的构建方法，包括如下步骤：
[0008](1)使用副溶血弧菌对南美白对虾进行浸浴攻毒，其中，攻毒浓度为0.8～1.2
×
105cfu/mL，攻毒密度为18～22尾南美白对虾/L，攻毒时间为5.5～6.5h；
[0009](2)攻毒结束后清洗南美白对虾，并置于无副溶血弧菌水体中暂养24～72h，得到南美白对虾副溶血弧菌感染模型。
[0010]在本专利技术的一些实施方式中，在南美白对虾饱食后进行浸浴感染。
[0011]在本专利技术的一些实施方式中，所述攻毒浓度为0.9～1.1
×
105cfu/mL。
[0012]在本专利技术的一些实施方式中，所述攻毒浓度为1
×
105cfu/mL。
[0013]在本专利技术中，术语“攻毒浓度”是指浸浴用的水体中的副溶血弧菌的浓度。
[0014]在本专利技术的一些实施方式中，所述攻毒密度为19～21尾南美白对虾/L。
[0015]在本专利技术的一些实施方式中，所述攻毒密度为20尾南美白对虾/L。
[0016]在本专利技术中，术语“攻毒密度”是指浸浴的南美白对虾数量与所用水体(L)的比值。
[0017]在本专利技术的一些实施方式中，所述攻毒时间为6h。
[0018]在本专利技术中，术语“攻毒时间”是指南美白对虾在含有副溶血弧菌的浸浴水体中的浸浴时间。
[0019]在本专利技术的一些实施方式中，步骤(2)中，南美白对虾的清洗使用生理盐水，充分清洗南美白对虾体表沾染的含有副溶血弧菌的浸浴水体。
[0020]在本专利技术的一些实施方式中，所述南美白对虾的湿重为45～55mg。
[0021]在本专利技术的一些实施方式中，所述南美白对虾的湿重为50mg。
[0022]在本专利技术的一些实施方式中，所述浸浴攻毒的温度为20～24℃。
[0023]在本专利技术的一些实施方式中，所述浸浴攻毒的温度为21～23℃。
[0024]在本专利技术的一些实施方式中，所述浸浴攻毒的温度为22℃。
[0025]在本专利技术的一些实施方式中，所述暂养时的暂养密度为8～12尾南美白对虾/L。
[0026]在本专利技术的一些实施方式中，所述暂养时的暂养密度为10尾南美白对虾/L。
[0027]在本专利技术的一些实施方式中，所述暂养时的暂养温度为26～30℃。
[0028]在本专利技术的一些实施方式中，所述暂养时的暂养温度为27～29℃。
[0029]在本专利技术的一些实施方式中，所述暂养时的暂养温度为28℃。
[0030]在本专利技术的一些实施方式中，所述暂养时，每天换水并维持曝气。
[0031]在本专利技术的一些实施方式中，换水量为暂养水体总体积的50％以上。
[0032]在本专利技术的一些实施方式中，换水量为暂养水体总体积的70～80％。
[0033]在本专利技术的一些实施方式中，换水量为暂养水体总体积的75％。
[0034]在本专利技术的一些实施方式中，所述暂养时光暗交替为11～13h。
[0035]在本专利技术的一些实施方式中，所述暂养时光暗交替为12h。
[0036]在本专利技术的一些实施方式中，所述构建方法中均采用盐度为18～22
‰
的水体。
[0037]在本专利技术的一些实施方式中，所述构建方法中均采用盐度为20
‰
的水体。
[0038]在本专利技术中，在攻毒完成后，对虾仅需转移至清水中进行常规养殖，即可获得大批量弧菌数量稳定且死亡率低的感染对虾。而且，其操作简单且稳定性强，可于实验室有限空
exchange and environmental adaptation[J],mSystems,2020,5:e00799
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19)。此菌株由广东海大集团股份有限公司畜牧水产研究中心水产功能评测与开发技术平台保存。
[0054]在下述实施例中，实验所用南美白对虾虾苗购于广东海兴农集团中山分公司，湿重50mg，生本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种南美白对虾副溶血弧菌感染模型的构建方法，包括如下步骤：(1)使用副溶血弧菌对南美白对虾进行浸浴攻毒，其中，攻毒浓度为0.8～1.2
×
105cfu/mL，攻毒密度为18～22尾南美白对虾/L，攻毒时间为5.5～6.5h；(2)攻毒结束后清洗南美白对虾，并置于无副溶血弧菌水体中暂养24～72h，得到南美白对虾副溶血弧菌感染模型。2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述南美白对虾的湿重为45～55mg。3.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述浸浴攻毒的温度为20～24℃。4.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述暂养时的暂养密度为8～12...

【专利技术属性】
技术研发人员：宋冬冬，王健，
申请(专利权)人：广东海大集团股份有限公司，
类型：发明
国别省市：