夏洛来羊高繁基因FecB的引物特异位点及应用制造技术

本发明专利技术涉及繁殖功能基因检测技术领域，具体为夏洛来羊高繁基因FecB的引物特异位点及应用，包括：夏洛来羊血样采集：所述提取DNA的血液样本为1毫升，所述采血后放入含有EDTA的采血管中，

【技术实现步骤摘要】
夏洛来羊高繁基因FecB的引物特异位点及应用


[0001]本专利技术涉及繁殖功能基因检测
，具体为夏洛来羊高繁基因FecB的引物特异位点及应用。

技术介绍

[0002]中国有着悠久的养羊历史，养羊品种和数量均位于世界前茅。绵羊是我国重要的经济动物之一，其中产羔性状是绵羊三大重要经济性状(产羔、肉和毛皮)中所占权重最大的生产性状，但是绵羊属于季节性发情动物，且每次产羔数较少，为了实现经济利益最大化，人们开始研究如何让母羊一次产下多只羔羊。
[0003]FecB基因是在1980年被首次发现的，其基因编码区上发生了A746G突变，导致了第249位氨基酸由谷氨酰胺变为精氨酸，使得蛋白质结构发生改变，削弱BMPR
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1B对颗粒细胞类固醇类生成的抑制作用，导致颗粒细胞提前分化和卵泡提前成熟，夏洛来羊高繁基因FecB的SNP位点与繁殖性能进行相关性分析，探究不同SNP位点对夏洛来羊的繁殖性能的影响。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于提供夏洛来羊高繁基因FecB的引物特异位点及应用，以解决上述
技术介绍
中提出的夏洛来羊高繁基因FecB的SNP位点与繁殖性能进行相关性分析，探究不同SNP位点对夏洛来羊的繁殖性能的影响的问题。
[0005]为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案，夏洛来羊高繁基因FecB的引物特异位点及应用，包括：
[0006]夏洛来羊血样采集：
[0007]所述提取DNA的血液样本为1毫升，所述采血后放入含有EDTA的采血管中，r/>‑
20℃保存。
[0008]DNA的提取：
[0009]所述DNA提取使用Ezup柱式血液基因组DNA抽提试剂盒，
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20℃保存。
[0010]繁殖性能数据：
[0011]所述产羔数据由同一羊场进行采集与统计分析。
[0012]引物设计：
[0013]所述根据FecB基因序列设计引物，得到目的基因片段。
[0014]产物扩增：
[0015]所述按照对应程序进行产物扩增，所述扩增结束以后取混匀的5uL产物和1uL样品缓冲液于电泳中(1.0％琼脂糖凝胶)。
[0016]优选的，所述使用Ezup柱式血液基因组DNA抽提试剂盒提取夏洛来羊血液中的DNA。
[0017]优选的，所述混匀的5uL产物和1uL样品缓冲液内加入3uL Marker作为对照，电泳
条件设置为120V，300mA，20min，电泳结束之后将胶板取出放在照胶仪器中观察目的条带，把清晰的条带进行拍照记录，随后将合格的产物送往上海生工单向测序，进行序列比对，SNP图谱分析，突变位点碱基识别和基因型确定。
[0018]优选的，所述PCR产物扩增结束以后选择目的条带单一且清晰的片段，所述将测序结果与FecB基因序列比对，发现2个突变位点，为A431965G、C413217T。
[0019]优选的，所述FecB基因的两个位点C413217T、A431965G的加性效应均为负值，说明这两个位点的等位基因发生自然突变和替代是正效应，对繁殖性能均有提升作用。
[0020]优选的，所述FecB基因中C413217T位点CC基因型的产羔数优于其他基因型，A431965G位点的AA基因型优于其他基因型。
[0021]与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：
[0022]1、利用SNP对夏洛来羊FecB基因进行基因分型，找到SNP位点并对SNP位点进行遗传多样性分析，而且与繁殖性能进行相关性分析，确定影响繁殖性能的基因型及单倍型组合。有利于促进夏洛来羊的选育及改良，推动了绵羊基因育种工作的进展，为培育更高繁殖力绵羊提供理论支撑。
[0023]2、FecB基因A431965G位点的AA基因型C413217T位点的CC基因型是繁殖性能的优势基因型，单倍型组合AACC为夏洛来羊的育种工作提供了新的数据体系，有利于促进夏洛来羊的选育及改良。
附图说明
[0024]图1为本专利技术琼脂糖凝胶检测DNA示意图；
[0025]图2为本专利技术FecB基因的C413217T位点PCR扩增产物示意图；
[0026]图3为本专利技术FecB基因的A431965G位点PCR扩增产物示意图；
[0027]图4为本专利技术SNP在FecB基因的分布示意图。
具体实施方式
[0028]下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0029]请参阅图1
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4，本专利技术提供的一种实施例：
[0030]夏洛来羊高繁基因FecB的引物特异位点及应用，包括：
[0031]实验动物：
[0032]选取1710只平均体重55kg、3岁的夏洛来母羊，采集后的样品无污染的保存在本实验室。
[0033]夏洛来羊血样采集：
[0034]提取DNA的血液样本为1毫升，采血后放入含有EDTA的采血管中，
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20℃保存。
[0035]DNA的提取：
[0036]取血液样品加入到1.5mL离心管中，加入PBS Solution使总体积为200uL，混匀，随后加入20uL的Proteinase K，再加入200uL的Buffer DL，将其震荡混匀，放置在56℃的水浴
中10min。再向上述离心管中加入200uL的无水乙醇，充分的颠倒混匀，随后将吸附柱放入收集管中，用移液器将溶液和半透明纤维状悬浮物全部加入吸附柱中，静置2min，再10000rpm室温离心1min，倒掉收集管中废液，再将吸附柱放回收集管中，向吸附柱中加入500uL GW Solution，10000rpm离心30s倒掉废液，再向吸附柱中加入700uL Wash Solution，10000rpm离心30s倒掉废液，之后将吸附柱重新放回收集管中，于12000rpm室温离心2min，去掉残留的Wash Solution，最后取出吸附柱，放入一个新的1.5mL离心管中，加入50uL的CE Buffer静置3min，12000rpm室温离心2min，收集DNA溶液，并于
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20℃保存，备用。
[0037]DNA质量鉴定：
[0038]所述使用分光光度计计算OD 260/280的比值来检测DNA浓度是否符合试验要求，如果比值在1.6
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1.8说明提取的DNA中无杂质，可用于后续使用。
[0039]繁殖性能数据：
[0040]夏洛来羊的产羔数据由同一羊场进行采集与统计分析。
[0041]引物设计：
[0042]根据FecB基因序列设计引物，得到目的基因片段(表1)。
[0043]表1FecB基因目的片段扩本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.夏洛来羊高繁基因FecB的引物特异位点及应用，其特征在于，包括：夏洛来羊血样采集：所述提取DNA的血液样本为1毫升，所述采血后放入含有EDTA的采血管中，
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20℃保存。DNA的提取：所述DNA提取使用Ezup柱式血液基因组DNA抽提试剂盒，
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20℃保存。繁殖性能数据：所述产羔数据由同一羊场进行采集与统计分析。引物设计：所述根据FecB基因序列设计引物，得到目的基因片段。产物扩增：所述按照对应程序进行产物扩增，所述扩增结束以后取混匀的5uL产物和1uL样品缓冲液于电泳中(1.0％琼脂糖凝胶)。2.根据权利要求1所述的夏洛来羊高繁基因FecB的引物特异位点及应用，其特征在于：所述使用Ezup柱式血液基因组DNA抽提试剂盒提取夏洛来羊血液中的DNA。3.根据权利要求1所述的夏洛来羊高繁基因FecB的引物特异位点及应用，其特征在于：所述混匀的5uL产物和1uL样品缓冲液内加入3uL Marker作为对照，电泳条件设置为120...

【专利技术属性】
技术研发人员：王泽英，丛玉艳，王国春，杨术环，孔令超，夏德翠，张贺春，张宏亮，郝志国，张艳平，岳密江，王成，吴冬雷，孙迎港，陈芮，吴彦智，乔艳军，李茜，汪小微，张秋，潘媛，李帅彤，李思沂，刘一宁，刘庆坤，侯思冰，李嘉琪，
申请(专利权)人：沈阳农业大学，
类型：发明
国别省市：