一种用于诊断IgG4相关性疾病检测试剂盒及其应用制造技术

本发明专利技术提供了一种用于诊断IgG4相关性疾病检测试剂盒及其应用；包括：抗体的染料配对：IgG4抗体

【技术实现步骤摘要】
一种用于诊断IgG4相关性疾病检测试剂盒及其应用


[0001]本专利技术涉及试剂盒领域；尤其涉及一种用于诊断IgG4相关性疾病检测试剂盒及其应用。

技术介绍

[0002]IgG4相关性疾病(IgG4
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RD)是一种罕见的系统性疾病，以慢性炎症及纤维化为特征，隐匿进展，严重可危及生命。IgG4
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RD常累及全身多个器官，组织呈现类瘤样改变，由于缺少特异的生物标志物，导致IgG4
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RD误诊误治时有发生。受累组织的特征性病理改变是IgG4
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RD诊断的关键指标。最新的IgG4
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RD诊治指南将受累组织的病理特征在诊断中的权重大大增加，因此受累组织活检成为诊断疾病重要指标。
[0003]组织活检是诊断疾病的金标准，在IgG4
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RD的诊断中占有很大权重。免疫组化技术作为组织染色的经典方法在病理诊断中广泛应用，也是目前公认的标准方法。免疫组化方法需要在连续切片上分别进行IgG4、IgG免疫组化染色，并且在显微镜下人工计数得出结果。现有方法存在以下问题：1.如何在连续切片上寻找同一视野？两张连续3um的石蜡切片理论上是可以找到相同或相似的视野，但这对制片技术有一定的要求，这其中包括切片、捞片，染色等一系列的质控环节和影响因素，增加了找到相同视野的难度，增加了病理诊断的工作量；2.如何准确的得到IgG4及IgG的高倍视野下个数？目前对IgG4和IgG的计数多由病理医生在镜下数数得到，这样就存在较多的主观因素的成分，不同的医生可能会得到相似但不同的结果，而如果这种差异发生在IgG4/IgG的临界值就会对诊断结果产生的影响。
[0004]IgG4
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RD受累组织的主要病理特征包括席纹状纤维化，闭塞性静脉炎和IgG4高倍镜下计数及IgG4/IgG比例等指标，其中IgG4高倍镜下计数及IgG4/IgG比例在疾病诊断中特异性最高。因此，得到受累组织中准确的IgG4高倍镜下计数及IgG4/IgG比例是诊断疾病的关键。然而目前使用的免疫组化方法需要在连续切片上分别进行IgG4、IgG免疫组化染色，并且在目镜下人工计数得出结果，这种方法对制片技术要求高且依赖于医生的主观判断。解决诊断中的IgG4、IgG染色，并在同一视野下计算准确的IgG4/IgG比例是提高IgG4
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RD早期诊断率的关键，因此，本专利技术检测试剂盒应用对于IgG4
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RD的诊断意义重大。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的是提供了一种用于诊断IgG4相关性疾病检测试剂盒及其应用。本专利技术通过使用多标记免疫组化染色技术对IgG4相关性疾病(IgG4
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RD)受累组织中的关键指标：IgG4/IgG的比例进行了量化算法，并于现有的传统免疫组化技术进行比较，建立了稳定可靠的诊断手段；在同一视野显示两种指标并能精确计数的方法对诊断IgG4
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RD至关重要。
[0006]本专利技术是通过以下技术方案实现的：
[0007]本专利技术涉及一种用于诊断IgG4相关性疾病检测试剂盒，该试剂盒包括：抗体的染料配对：IgG4抗体
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PPD 520、IgG抗体
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PPD 650和CD38抗体
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PPD 570，抗体稀释液，辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔/鼠通用二抗，信号放大液，核染料，非免疫动物血清，封片剂，抗原
修复液和洗液。
[0008]优选地，所述抗原修复液的配方为：1L所述抗原修复液中：1.21gTris，0.29g EDTA，0.5ml吐温溶于1L灭菌去离子水中，调pH至9.0。
[0009]优选地，所述洗液的配方为：1L所述洗液中：15.76g Tris
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HCL，9.0g NaCl溶于1L灭菌去离子水中。
[0010]优选地，所述抗体的修复条件：在输出功率为700W的微波炉处于低火
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解冻中间档3min，加热至沸腾，放入切片，调高火档15分钟，抗原修复。
[0011]优选地，所述试剂盒的染色具体步骤为：
[0012]步骤1，单抗IgG4染色：石蜡切片进行常规脱蜡至水步骤，抗原微波热修复，非免疫动物血清室温封闭10min，IgG4稀释比例为1：100，4℃过夜孵育，洗液3min，3次，辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔/鼠通用二抗室温孵育，10min，洗液3min，3次，PPD 520染色剂1：100稀释，室温孵育，10min，洗液3min，3次，微波洗脱多余染色剂，得IgG4抗体
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PPD 520；
[0013]步骤2，单抗IgG染色：非免疫动物血清室温封闭10min，IgG稀释比例为1：100，37℃孵育1h，洗液3min，3次，二抗室温孵育，10min，洗液3min，3次，PPD 650染色剂1：100稀释，室温孵育，10min，洗液3min，3次，微波洗脱多余染色，得IgG抗体
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PPD 650；
[0014]步骤3，单抗CD38染色：非免疫动物血清室温封闭10min，CD38稀释比例为1：100，37℃孵育1h，洗液3min，3次，二抗室温孵育，10min，洗液3min，3次，PPD 570染色剂1：100稀释，室温孵育，10min，洗液3min，3次，微波洗脱多余染色，得CD38抗体
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PPD 570；
[0015]步骤4，染核：在染完三个单抗IgG4抗体
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PPD 520、IgG抗体
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PPD 650、CD38抗体
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PPD 570的切片上加核染料DAPI，1：100稀释，室温孵育10min，洗液3min，3次，封片剂封片，多光谱显微镜观察。
[0016]本专利技术具有以下优点：
[0017]本专利技术所涉及的用于IgG4相关性疾病病理诊断的多标免疫组化检测试剂盒，该试剂盒可运用患者的组织切片多标记免疫染色及光谱成像技术，实现了在一张切片上检测IgG4
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IgG
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CD38三种分子标记，并通过软件算法计算出IgG4/IgG比例及IgG4/CD38比例，最终实现了提高诊断准确率的目的，并易于在临床应用。
附图说明
[0018]图1是使用多光谱显微镜20倍物镜下采集IgG4+密集浸润的区域图像。
具体实施方式
[0019]下面结合具体实施例对本专利技术进行详细说明。应当指出的是，以下的实施实例只是对本专利技术的进一步说明，但本专利技术的保护范围并不限于以下实施例。
[0020]实施例
[0021]本实施例涉及一种用于诊断IgG4相关性疾病检测试剂盒，该试剂盒包括：抗体的染料配对：IgG4抗体
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PPD 520、IgG抗体
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PPD 650和CD38抗体
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PPD 570，抗体稀释液，辣根过氧化物本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于诊断IgG4相关性疾病检测试剂盒，其特征在于，该试剂盒包括：抗体的染料配对：IgG4抗体
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PPD520、IgG抗体
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PPD650和CD38抗体
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PPD570，抗体稀释液，辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔/鼠通用二抗，信号放大液，核染料，非免疫动物血清，封片剂，抗原修复液和洗液。2.如权利要求1所述的用于诊断IgG4相关性疾病检测试剂盒，其特征在于，所述抗原修复液的配方为：1L所述抗原修复液中：1.21gTris，0.29gEDTA，0.5ml吐温溶于1L灭菌去离子水中，调pH至9.0。3.如权利要求1所述的用于诊断IgG4相关性疾病检测试剂盒，其特征在于，所述洗液的配方为：1L所述洗液中：15.76gTris
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HCL，9.0gNaCl溶于1L灭菌去离子水中。4.如权利要求1所述的用于诊断IgG4相关性疾病检测试剂盒，其特征在于，所述抗体的修复条件：在输出功率为700W的微波炉处于低火
‑
解冻中间档3min，加热至沸腾，放入切片，调高火档15分钟，抗原修复。5.如权利要求1所述的用于诊断IgG4相关性疾病检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒的染色具体步骤为：步骤1，单抗IgG4染色：石蜡切片进行常规脱蜡至水步骤，抗原微波热修复，非免疫动物血清室温封闭10min，IgG4稀释比例为1：100，4℃过夜孵育，洗液3min，3次，辣根过...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱平，张葵，郑朝晖，符向辉，
申请(专利权)人：中国人民解放军空军军医大学，
类型：发明
国别省市：