半滑舌鳎抗病蛋白SHP-1基因的应用制造技术

本发明专利技术属于鱼类基因工程技术领域，具体涉及一种半滑舌鳎抗病蛋白SHP

【技术实现步骤摘要】
半滑舌鳎抗病蛋白SHP
‑
1基因的应用


[0001]本专利技术属于鱼类基因工程
，具体涉及一种半滑舌鳎抗病蛋白SHP
‑
1基因的应用。

技术介绍

[0002]半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)其因肉质鲜美，营养丰富，是我国沿海城市主要养殖的高经济鱼类。鳗弧菌(Vibrio anguillarum)是一种条件致病菌，是导致水产养殖鱼类发生弧菌病的主要病原菌，鳗弧菌的感染途径主要包括皮肤、鳃、肠道等组织器官，能够引起水产动物全身性的组织病变，引起剧烈的炎症反应，从而产生大量的促炎介质并导致细胞因子风暴的发生，使鱼类在急性感染期发生大面积的死亡。因此，在急性感染早期阻断细胞因子风暴的产生对挽救水产养殖业的损失至关重要。
[0003]活化B细胞核因子kappa轻链增强子(Nuclear factor kappa light chain enhancer of activated B cells，NFκB)是一种广泛存在的转录因子，在先天免疫应答中发挥重要作用。NFκB是一个二聚体转录因子家族，主要由NF
‑
κB2 p52/p100、NF
‑
κB1 p50/p105、c
‑
Rel、RelA/p65和RelB组成，这些蛋白形成异二聚体或同二聚体复合物，可调控基因表达，并影响先天和适应性免疫、炎症、应激反应、B细胞发育和淋巴器官形成等各种不同的生物学过程。研究发现，病原菌感染会导致NFκB刺激触发炎症介质的表达，包括细胞因子、趋化因子和胞粘附分子，并形成正反馈回路，可以在短时间内产生大量的炎症因子，导致细胞因子风暴的发生，短时间大量的炎症因子的产生会损伤机体的组织与器官，从而导致机体因过度的炎症反应而死亡。
[0004]SHP
‑
1(src
‑
homology domain 2
‑
containing protein tyrosine phosphatase
‑
1,SHP
‑
1)，是由PTPN6基因编码的含有SH2结构域的非受体型蛋白酪氨酸磷酸酶。我们通过研究发现，SHP
‑
1作为JAK/STAT3、NFκB以及PI3K/AKT多种信号通路的负调控因子，其去磷酸化作用影响细胞增殖、分化、活性和凋亡，SHP
‑
1可能与硬骨鱼类的炎症反应具有显著的相关性，通过对SHP
‑
1在鱼类炎症方面作用机制的研究将降低水产养殖中病原菌感染导致的经济损失，对水产养殖业发展至关重要。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于提供一种半滑舌鳎抗病蛋白SHP
‑
1基因在提高硬骨鱼类抗病力方面的应用，所述SHP
‑
1基因的表达可防治鱼类的细菌性炎症，抑制炎症细胞因子的产生，阻断细胞因子风暴的产生。
[0006]本专利技术是采用以下技术方案实现的：
[0007]本专利技术提供了半滑舌鳎抗病蛋白SHP
‑
1基因在制备用于防治半滑舌鳎细菌病的产品中的应用。
[0008]本专利技术提供了半滑舌鳎抗病蛋白SHP
‑
1在制备用于防治半滑舌鳎细菌病的产品中的应用。
[0009]本专利技术还提供了半滑舌鳎抗病蛋白SHP
‑
1基因在硬骨鱼类抗病新家系育种中的应用。
[0010]所述SHP
‑
1基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，所述蛋白SHP
‑
1的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。
[0011]所述产品具有下述1)
‑
4)种至少一种功能：
[0012]1)防治半滑舌鳎的细菌性炎症；
[0013]2)抑制炎症细胞因子的产生；
[0014]3)调控NFκB和IL
‑6‑
JAK
‑
STAT3信号通路；
[0015]4)阻断细胞因子风暴的产生。
[0016]所述产品包括半滑舌鳎抗病蛋白SHP
‑
1或含SHP
‑
1基因的重组表达质粒。
[0017]所述产品包括饲料、饲料添加剂、药物或药物组合物。
[0018]所述含SHP
‑
1基因的重组表达质粒的制备方法，包括以下步骤：
[0019](1)提取半滑舌鳎总RNA，逆转录得到总cDNA；
[0020](2)设计SHP
‑
1基因的正向引物和反向引物，以半滑舌鳎总cDNA为模板扩增得到扩增产物；
[0021](3)将扩增产物进行分子克隆，得到重组表达质粒。
[0022]优选的，分子克隆的酶切位点为HindIII和BamHI；
[0023]正向引物序列为CCAAGCTTATGGTTCGGTGGTTCCAC；
[0024]反向引物序列为CGGGATCCTTTTTTTCGCAACGAGCCGC。
[0025]与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：
[0026]1、本专利技术所述SHP
‑
1基因的表达可防治鱼类的细菌性炎症，抑制炎症细胞因子的产生，调控NFκB和IL
‑6‑
JAK
‑
STAT3信号通路，阻断细胞因子风暴的产生，能显著降低水产养殖中病原菌感染导致的经济损失，对水产养殖业发展至关重要。
[0027]2、本专利技术所述SHP
‑
1基因可通过基因编辑技术建立新的鱼类抗病家系。
附图说明
[0028]图1、pcDNA3.1
‑
SHP
‑1‑
EGFP重组表达质粒结构示意图；
[0029]图2、SHP
‑
1扩增、双酶切及菌落PCR鉴定；
[0030]图3、高浓度组半滑舌鳎死亡率统计和生存分析曲线；
[0031]图4、低浓度组半滑舌鳎死亡率统计和生存分析曲线；
[0032]图5、高浓度组半滑舌鳎SHP
‑
1、NFκB以及JAK
‑
STAT3信号通路关键因子的表达情况；
[0033]图6、高浓度组半滑舌鳎HE染色分析半滑舌鳎肝组织病理损伤变化；
[0034]图7、高浓度组半滑舌鳎HE染色分析半滑舌鳎肠组织病理损伤变化。
具体实施方式
[0035]下面结合实施例对本专利技术作进一步描述。
[0036]需要说明的是，实施例中用到的所有原料除特殊说明外，均为市购，其中，引物由北京擎科生物科技有限公司合成；SYBR Green Mix混合物购自南京诺唯赞生物公司；苏木
素、伊红染料、中性树胶购自武汉塞维尔生物科技有限公司。
[0037]实施例1
[0038]制备SHP
‑
1重组表达质粒pcDNA3.1...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.半滑舌鳎抗病蛋白SHP
‑
1基因在制备用于防治半滑舌鳎细菌病的产品中的应用。2.半滑舌鳎抗病蛋白SHP
‑
1在制备用于防治半滑舌鳎细菌病的产品中的应用。3.半滑舌鳎抗病蛋白SHP
‑
1基因在硬骨鱼类抗病新家系育种中的应用。4.根据权利要求1
‑
权利要求3所述的应用，其特征在于：所述SHP
‑
1基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，所述蛋白SHP
‑
1的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：所述产品具有下述1)
‑
4)种至少一种功能：1)防治半滑舌鳎的细菌性炎症；2)抑制炎症细胞因子的产生；3)调控NFκB和IL
‑6‑
JAK
‑
STAT3信号通路；4)阻断细胞因子风暴的产生。6.根据权...

【专利技术属性】
技术研发人员：沙珍霞，王宁宁，刘红宁，
申请(专利权)人：青岛大学，
类型：发明
国别省市：