一种用于检测日勾维多细菌源菌的引物组及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种用于检测日勾维多细菌源菌的引物组及其应用。所述引物组核酸序列包括：SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.9所示序列中的任意一组或至少两组的组合。本发明专利技术以日勾维多细菌源菌的看家基因为目标基因，设计了特异性引物，优化了反应条件和扩增程序，建立了双重PCR快速检测方法，可快速地检出样品中的日勾维多细菌源菌。检出样品中的日勾维多细菌源菌。检出样品中的日勾维多细菌源菌。

【技术实现步骤摘要】
一种用于检测日勾维多细菌源菌的引物组及其应用


[0001]本专利技术属于分子生物学
，涉及一种用于检测日勾维多细菌源菌的引物组及其应用。

技术介绍

[0002]近年来，美国FDA以及欧盟非食品类消费品快速预警系统通报了多批化妆品因污染日勾维多细菌源菌(Pluralibactergergoviae)被召回的事件，主要出现在面膜、面霜、淋洗类化妆品中。日勾维多细菌源菌是常见的条件致病菌，在人体免疫力低下时能引起泌尿系统、呼吸系统感染以及菌血症等疾病。目前，国内外化妆品微生物检验方法中均没有收录日勾维多细菌源菌的检验方法，只有SY
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LAB公司声称开发了针对日勾维多细菌源菌的快速检测试剂盒RiboFlow P/En，但该方法检测的是肠杆菌科细菌，不具有专一性。
[0003]聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)是实验室常用的快速检测方法，双重PCR是指在一个反应体系中加入两对不同的引物同时进行扩增，可更加准确快速地检出目标微生物。
[0004]CN105002270A公开了一种特异性检测肠杆菌科细菌的引物、探针及其应用，所述特异性检测肠杆菌科细菌以及可同时检测肠杆菌科细菌和阪崎肠杆菌的引物和探针，针对菌株的特性进行了特异型设计，可确保结果的准确性。但是此方法检测的是肠杆菌科细菌和阪崎肠杆菌，对于日勾维多细菌源菌的检测不具有专一性和特异性。
[0005]CN116287342A公开了一种同时检测4种肠杆菌科细菌和8种耐碳青霉烯基因的核酸质谱方法和试剂盒，所述方法能一次性检测肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌、大肠埃希菌和铜绿假单胞菌以及KPC
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2、NDM型、OXA
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48型、OXA
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23型、IMP型、VIM型、CMY
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2和ADC
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68等8个耐碳青霉烯基因，但是对于日勾维多细菌源菌的检测同样不具有专一性和特异性。
[0006]综上所述，亟需提供一种用于检测日勾维多细菌源菌的引物组，以实现对日勾维多细菌源菌的专一性和特异性检测，简化检测方法的同时提高检测灵敏性。

技术实现思路

[0007]针对现有技术的不足和实际需求，本专利技术提供一种用于检测日勾维多细菌源菌的引物组及其应用，解决了现有引物及检测方法不能对日勾维多细菌源菌的专一性和特异性检测，灵敏度低，检测方法复杂等问题。
[0008]为达到此专利技术目的，本专利技术采用以下技术方案：
[0009]第一方面，本专利技术提供了一种用于检测日勾维多细菌源菌的引物组，所述引物组核酸序列包括：SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.9所示序列中的任意一组或至少两组的组合。
[0010]本专利技术以日勾维多细菌源菌的看家基因为目标基因，设计了特异性引物，优化了反应条件和扩增程序，建立了双重PCR快速检测方法，可快速地检出样品中的日勾维多细菌
源菌。
[0011]所述日勾维多细菌源菌的看家基因包括：
[0012]gyrB基因(Genebank：JX425004)：编码DNA解旋酶B亚单位；
[0013]ropB基因(Genebank：JX425263)：编码RNA聚合酶β亚单位；
[0014]infB基因(Genebank：JX425133)：编码起始转录因子2；
[0015]atpD基因(Genebank：JX424874)：编码ATP合成酶β亚单位。
[0016]使用Geneious prime软件设计4对PCR扩增引物(表1)，细菌16s rRNA扩增引物序列为27f*(对应SEQ ID NO.10)和1495r(对应SEQ ID NO.11)，各引物的Rough Tm值在55℃～56℃，由生工生物工程(上海)股份有限公司合成。
[0017]上述55℃～56℃中的具体点值可以选择55.1℃、55.2℃、55.3℃、55.4℃、55.5℃、55.6℃、55.7℃、55.8℃、55.9℃、56℃等。
[0018]表1
[0019]序列编号引物名称长度(bp)引物序列(5
’‑3’
)SEQ ID NO.1gyrB
‑
F18GAGCCTGGAAACCTTCACSEQ ID NO.2gyrB
‑
R18CTTCTTGCTGTAGCCCTCSEQ ID NO.3infB
‑
F17CCTGCTGAACGCTATCCSEQ ID NO.4infB
‑
R18CACCTCTTTGCCGAGTTCSEQ ID NO.5ropB
‑
F18CGCAGGACATGATCAACGSEQ ID NO.6ropB
‑
R18ATCGTCTACGAAACGGCCSEQ ID NO.7atpD
‑
F18ACCCTCGGCCGTATTATGSEQ ID NO.8atpD
‑
R18GTTCATCTGGCCGTACACSEQ ID NO.9ropB
‑
R(insert)18TGCCGAGATACGACGCTTSEQ ID NO.1027f*21GAGAGTTTGATCCTGGCTCAGSEQ ID NO.111495r20CTACGGCTACCTTGTTACGA
[0020]在一个具体示例中，所述日勾维多细菌源菌扩增引物的名称可不同，但是引物的核苷酸序列相同；在引物Tm值不发生变化的情况下，其核苷酸序列可适当变化，例如：引物可为包含表1中扩增引物中17bp长度的核苷酸序列。
[0021]在一个具体示例中，所述日勾维多细菌源菌PCR扩增反应体系可适当改变，例如：使用其他品牌的PCR反应mix溶液；本专利技术中除了使用日勾维多细菌源菌的菌液作为PCR扩增模板之外，还可使用日勾维多细菌源菌的菌落或DNA作为扩增模板；日勾维多细菌源菌PCR扩增反应条件可适当改变，例如：DNA变性温度(94℃～98℃)及时间(30s～90s)、退火时间(5s～60s)、延伸时间(5s～60s)及退火温度，如将退火温度设为65℃以上。
[0022]在一个具体示例中，所述日勾维多细菌源菌双重PCR使用的测试样品类型可不同，如：除了可使用沐浴露和洗发水等淋洗类化妆品外，还可以包括其它任何类型的样品。
[0023]第二方面，本专利技术提供了第一方面所述的用于检测日勾维多细菌源菌的引物组在制备检测日勾维多细菌源菌的产品中的应用。
[0024]第三方面，本专利技术提供了一种用于检测日勾维多细菌源菌的试剂盒，所述试剂盒包括第一方面所述的用于检测日勾维多细菌源菌的引物组。
[0025]第四方面，本专利技术提供了一种非疾病诊断和/本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于检测日勾维多细菌源菌的引物组，其特征在于，所述引物组核酸序列包括：SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.9所示序列中的任意一组或至少两组的组合。2.权利要求1所述的用于检测日勾维多细菌源菌的引物组在制备检测日勾维多细菌源菌的产品中的应用。3.一种用于检测日勾维多细菌源菌的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1所述的用于检测日勾维多细菌源菌的引物组。4.一种非疾病诊断和/或治疗为目的的检测日勾维多细菌源菌的方法，其特征在于，所述方法包括：以待测样本的核酸为模板，利用权利要求1所述的用于检测日勾维多细菌源菌的引物组进行双重PCR扩增，根据双重PCR扩增结果进行判断。5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述待测样本包括：含有化妆品的培养液；优选地，所述化妆品包括面霜、洗发水或沐浴露中的任意一...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘丰，周志，王娜娜，孙晓，王晓冲，江坤，王晓炜，王平，
申请(专利权)人：深圳市药品检验研究院深圳市医疗器械检测中心，
类型：发明
国别省市：