环六肽抗菌化合物制造技术

本发明专利技术提供了一类新的环六肽抗菌药物ｙａｎｇｌｉｎｇｍｙｃｉｎｓ，属药物技术领域。本发明专利技术涉及的化合物其结构式如下所示，其氨基酸组成包括缬氨酸和其它非常见氨基酸，如２－甲氨基丙酸、哌嗪－３－羧酸以及６－氯－３α－羟基－１，２，３，３α，８，８α－六氢吡咯［２，３－并］吲哚－２－羧酸等，各氨基酸的构型为Ｌ－型或Ｄ－型。本发明专利技术涉及的化合物对蜡状芽孢杆菌，枯草杆菌，金黄色葡萄球菌以及耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌等多种革兰氏阳性细菌具有强烈的抑制作用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及药物
，具体地说，是从土壤放线菌发酵液中提取分离的一类yanglingmycinso
技术介绍
从微生物次生代谢物中筛选生物活性物质是新药研究与开发的一个重要途径。截 止目前为止，已经明确结构的微生物次级代谢产物超过50000多个，其中具有明确生物活 性的化合物22000多个。自Wakesman从灰链霉菌的培养液中分离到链霉素以后，土壤放线 菌就成为抗生素的最主要来源，其所产生的抗生素数量占所有微生物活性代谢物的47%。Yanglingmycins i 由^> 畠自 K M ^ ± ^ Φ W Streptomyces alboflavus No. 313代谢产生的一类新型环六肽抗菌化合物，主要包括yanglingmycin A，B和C三个组 分。其氨基酸组成包括缬氨酸和其它非常见氨基酸，如2-甲氨基丙酸、哌嗪-3-羧酸以及 6_氯-3α-羟基-1，2，3，3α，8，8α-六氢吡咯B引哚_2_羧酸等。目前已发现的 与此结构类似的环六肽抗生素还有himastatin和chloptosin，但后二者均是两个环六肽 形成的二聚体，同时在氨基酸组成上也存在差异。Yanglingmycins 对蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)，枯草杆菌(B. subtilis)， 金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)以及耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌(Methicil lin-resistantStaphtlococcus aureus)等多种革兰氏阳性细菌具有强烈的抑制作用。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一类新型环六肽抗菌药物yanglingmycins。采用高分辨质谱和核磁共振等波谱技术，确定了本专利技术所涉及化合物的化学结 构，其结构式如下所示。 Yanglingmycin A由一分子缬氨酸、2-甲氨基丙酸、6_氯_3 α -羟基-1，2，3，3 α， 8，8α-六氢吡咯吲哚-2-羧酸和三分子哌嗪-3-羧酸共计四种氨基酸组成，各 氨基酸的构型为L-型或D-型。Yanglingmycin B由一分子缬氨酸、2-甲氨基丙酸、6_氯_3 α -羟基-1，2，3，3 α， 8，80-六氢吡咯吲哚-2-羧酸、2，3，4，5_四氢哒嗪-3-羧酸和二分子哌嗪-3-羧 酸共计四种氨基酸组成，各氨基酸的构型为L-型或D-型。Yanglingmycin C由一分子缬氨酸、2-甲氨基丙酸、6-氯_3 α -羟基-1，2，3，3 α， 8，8α-六氢吡咯吲哚-2-羧酸、4-羟基-6-甲氧基_1，2，3，4-四氢哒嗪-3-羧 酸和二分子哌嗪-3-羧酸共计四种氨基酸组成，各氨基酸的构型为L-型或D-型。本专利技术的优点是Yanglingmycins对蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)，枯 草杆菌(B. subtilis)，金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)等多种革兰氏阳性 细菌具有强烈的抑制作用，尤其是对重要的抗性菌，如耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌 (Methicillin-resistant Staphylococcusaureus, MRSA)具有很好的抑制活性。具体实施例方式通过下述实施例有助于理解本专利技术，但并不限制本专利技术的内容。实施例一Yanglingmycin A的分离及结构鉴定Streptomyces albofIavus 发酵液(50L)经 200 目筛网过滤后，用草酸调 pH 3.5， 静置、过滤，加NaOH调滤液至中性，用2kg HPD-400大孔吸附树脂静态吸附过夜。将吸附 好的大孔吸附树脂装入层析柱中，先用去离子水洗脱5000mL，洗脱液弃去。再用水甲醇 =7 3,6 4,5 5,4 6 (V/V)及纯甲醇五种洗脱液进行梯度洗脱，每种洗脱液洗脱 5000mL，收集水甲醇=4 6 (V/V)洗脱的馏分，减压浓缩至50mL。浓缩液经0. 45 μ m滤 膜过滤后用制备液相色谱纯化，得到yanglingmycin A 6. 3g。采用高分辨质谱和核磁共振波谱技术鉴定yanglingmycin A的化学结构，其主要 物理常数如下YanglingmycinA，无色微晶，熔点:208 210°C，+， (C35H5tlNltlO7Cl,计算值757. 3552)，结合1H NMR和13C NMR数据，确定化合物的分子式为 C35H49N1q07C1。Yanglingmycin A 的核磁波谱数据见表 1。实施例二Yanglingmycins 的抑菌活性采用微量稀释法测定yanglingmycin A对蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)，枯草 杆菌(B. subtilis)，金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)，大肠杆菌(Escherichia coil)，绿脓杆菌(Pseudomonas aeruginosa)以及耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌(Methici llin-resistantStaphylococcus aureus, MRSA)等六种供试细菌的抑菌活性，耐甲氧西林 金黄色葡萄球菌由南京医科大学提供，其余菌种购自中国普通微生物菌种保藏中心。以接种环自培养平皿上挑取4 5个相同形态的供试菌菌落，接入 Mueller-Hinton肉汤中，35°C培养至轻度混浊后(约3 5h)转入0. 9%生理盐水中，调整 到麦氏浊度为0. 5 (使其在650nm波长下吸光度为0. 020，此时相当于1. 5 X IO8CFU · mL—1)， 再用Mueller-Hinton肉汤稀释200倍，其接种量则相当于7. 5X IO5CFU · mL—1。将稀释好 的接种液转入96孔板中，每孔加液量100 μ L，再分别加入无菌水配制的不同浓度待测药液 100 μ L，每板另设不加任何药剂的空白对照和加药不接菌对照，实验中每个处理设三次重 复。氨苄青霉素为阳性对照药剂。将处理好的96孔板置培养箱中，35°C培养20h，650nm测 定透光率，记录不同药剂对供试细菌的MIC值。以透光率大于85%为抑制生长的标准，MIC 为抑制生长的最低浓度。实验结果见表2。Yanglingmycin A对蜡状芽孢杆菌、枯草杆菌、金黄色葡萄球菌以及耐甲氧西林的 金黄色葡萄球菌均具有很强的抑制作用，其活性明显优于对照药剂氨苄青霉素，但对革兰 氏阴性菌无明显活性。表1 Yanglingmycin A 的核磁波谱数据(CD3OD, 500MHz) 表2 Yanglingmycin A对六种供试细菌的抑菌活性权利要求一类新的环六肽抗菌药物yanglingmycins，其结构式如下所示F2009101279942C0000011.tif2.如权利要求1所述，yanglingmycinA由一分子缬氨酸、2-甲氨基丙酸、6-氯-3α -羟 基-1，2，3，3α，8，8α-六氢吡咯吲哚_2_羧酸和三分子哌嗪_3_羧酸共计四种 氨基酸组成，各氨基酸的构型为L-型或D-型。3.如权利要求1所述，yanglingmycinB由一分子缬氨酸、2-甲氨基丙酸、 6-氯-3 α-羟基-1，2，3，3 α，8，8 α-六氢吡咯吲哚_2_羧酸、2，3，4，5-本文档来自技高网...

【技术保护点】
一类新的环六肽抗菌药物ｙａｎｇｌｉｎｇｍｙｃｉｎｓ，其结构式如下所示：　　＊＊＊。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：吴文君，姬志勤，郭正彦，
申请(专利权)人：西北农林科技大学农药研究所，
类型：发明
国别省市：61[中国|陕西]