一种原代组织细胞的提取方法技术

本发明专利技术公开了一种原代组织细胞的提取方法，包括以下步骤：获取器官组织，然后采用两个具有类四棱锥表面微结构的研磨平面相互旋转运动剪碎器官组织，将剪碎的器官组织用消化酶溶液消化，之后加入胎牛血清终止消化，首次离心去除上清液，再加入红细胞裂解液，吹散混匀后再次离心去除上清液，得到提取的原代细胞。本发明专利技术通过两个具有棱状微结构的研磨平面相互旋转运动剪碎器官组织，经两个研磨平面中的棱状微结构交错时产生的剪切力来剪切组织，能够减轻切割软体组织时对组织细胞的挤压破坏作用，同时通过环形阵列的多个棱状微结构持续剪切，提高组织的剪碎效果，为细胞提取创造更有利条件，提取的细胞活率高，活性好，且提取量高。高。高。

【技术实现步骤摘要】
一种原代组织细胞的提取方法


[0001]本专利技术涉及组织细胞提取
，具体涉及一种原代组织细胞的提取方法。

技术介绍

[0002]在目前精准医学的趋势推动下，个体化治疗逐渐成为精准治疗的趋势。但是从病人器官组织中提取特异性的原代组织细胞，却一直是一个难题。
[0003]现有的原代组织细胞提取方法中采用大多转子离心破碎组织，这样细胞破坏程度较高，导致原代细胞提取效率低。

技术实现思路

[0004]为了克服现有技术的不足，本专利技术提供一种原代组织细胞的提取方法，以解决现有技术中原代细胞提取效率低的问题。
[0005]本专利技术解决其技术问题所采用的技术方案是：
[0006]一种原代组织细胞的提取方法，包括以下步骤：获取器官组织，然后采用两个具有棱状微结构的研磨平面相互旋转运动剪碎器官组织，将剪碎的器官组织用消化酶溶液消化，之后加入胎牛血清终止消化，首次离心去除上清液，再加入红细胞裂解液，吹散混匀后再次离心去除上清液，得到提取的原代细胞。
[0007]作为上述技术方案的进一步改进，两个所述研磨平面分别包括旋转底面和旋转顶面，所述旋转底面与旋转顶面之间通过一轴孔连接部转动连接，所述旋转底面上设置有若干类三棱柱结构的第一剪切块，所述旋转顶面上设有若干类四棱锥结构的第二剪切块，旋转底面和旋转顶面相互转动时，第一剪切块与第二剪切块交错具有剪切力，通过该剪切力剪碎器官组织。
[0008]作为上述技术方案的进一步改进，所述第一剪切块在旋转底面的一半径上具有多个，且多个述第一剪切块又分别以旋转底面的圆心环形阵列；所述第二剪切块在旋转顶面的一半径上具有多个，且多个述第二剪切块又分别以旋转顶面的圆心环形阵列。
[0009]作为上述技术方案的进一步改进，所述旋转底面以半径大小分为多个环形的剪切区域，不同剪切区域的第一剪切块环形阵列的个数不同，同一剪切区域的第一剪切块环形阵列的个数不同；所述旋转顶面也以半径大小分为多个环形的剪切区域，不同剪切区域的第二剪切块环形阵列的个数不同，同一剪切区域的第二剪切块环形阵列的个数不同。
[0010]作为上述技术方案的进一步改进，所述旋转底面上同一剪切区域的第一剪切块的尺寸沿半径增大方向逐渐增大；所述旋转顶面上同一剪切区域的第二剪切块的尺寸沿半径增大方向逐渐增大。
[0011]作为上述技术方案的进一步改进，所述消化酶溶的组成包括DMEMF12、CollagenaseⅠ、CollagenaseⅣ、Dispase和DNase。
[0012]作为上述技术方案的进一步改进，所述消化酶溶中CollagenaseⅠ的浓度为2mg/ml，CollagenaseⅣ的浓度为2mg/ml，Dispase的浓度为2mg/ml，DNase的浓度为1500unit/
ml。
[0013]作为上述技术方案的进一步改进，剪碎的器官组织在消化酶溶液中在37℃下摇床消化15min，然后加入胎牛血清终止消化。
[0014]作为上述技术方案的进一步改进，离心去除上清液的参数为：转速1000rpm、时间5min。
[0015]作为上述技术方案的进一步改进，加入的红细胞裂解液的体积为去除上清液后剩余沉淀体积的3倍。
[0016]本专利技术的有益效果是：通过两个具有棱状微结构的研磨平面相互旋转运动剪碎器官组织，经两个研磨平面中的棱状微结构交错时产生的剪切力来剪切组织，能够减轻切割软体组织时对组织细胞的挤压破坏作用，同时通过环形阵列的多个棱状微结构持续剪切，提高组织的剪碎效果，为细胞提取创造更有利条件，因此，本专利技术对器官组织提取原代细胞的提取率高。
附图说明
[0017]下面结合附图和实施例对本专利技术进一步说明。
[0018]图1是本专利技术中两个研磨平面装配示意图；
[0019]图2是图1结构拆分的剖面图；
[0020]图3
‑
图5分别是本专利技术中旋转顶面的立体图、俯视图和剖视图；
[0021]图6
‑
图8分别是本专利技术中旋转底面的立体图、俯视图和剖视图；
[0022]图9是本专利技术中第一剪切块与第二剪切块的位置示意图。
[0023]图10是本专利技术实施例1的组织提取死活荧光图像；
[0024]图11是本专利技术实施例1的原代组织细胞提取检测结果图；
[0025]图12是本专利技术实施例2的组织提取死活荧光图像；
[0026]图13是本专利技术实施例2的原代组织细胞提取检测结果图。
[0027]附图标记：10、旋转底面；11、第一剪切块；12、旋转孔；20、旋转顶面；21、第二剪切块；22、旋转轴。
具体实施方式
[0028]以下将结合实施例和附图对本专利技术的构思、具体结构及产生的技术效果进行清楚、完整地描述，以充分地理解本专利技术的目的、特征和效果。显然，所描述的实施例只是本专利技术的一部分实施例，而不是全部实施例，基于本专利技术的实施例，本领域的技术人员在不付出创造性劳动的前提下所获得的其他实施例，均属于本专利技术保护的范围。另外，专利中涉及到的所有联接/连接关系，并非单指构件直接相接，而是指可根据具体实施情况，通过添加或减少联接辅件，来组成更优的联接结构。本专利技术创造中的各个技术特征，在不互相矛盾冲突的前提下可以交互组合。
[0029]一种原代组织细胞的提取方法，包括以下步骤：获取器官组织，然后采用两个具有棱状微结构的研磨平面相互旋转运动剪碎器官组织，将剪碎的器官组织用消化酶溶液在37℃下摇床消化15min，之后加入胎牛血清(FBS)终止消化，在转速1000rpm下首次离心5min去除上清液，再加入剩余沉淀体积3倍体积的红细胞裂解液，吹散混匀后在转速1000rpm下再
次离心5min去除上清液，然后得到提取的原代细胞。
[0030]其中，消化酶溶液的成分为：DMEMF12细胞培养基、浓度为2mg/ml的CollagenaseⅠ(胶原酶Ⅰ)、CollagenaseⅣ(胶原酶Ⅳ)、Dispase(分散酶)和浓度为1500unit/ml的DNase(脱氧核糖核酸酶)。
[0031]参照图1和图2，上述实施例中的两个研磨平面分别包括旋转底面10和旋转顶面20，所述旋转底面10与旋转顶面20之间通过一轴孔连接部转动连接，所述轴孔连接部包括设置于旋转底面10中心处的旋转孔12以及设置于旋转顶面20中心处的旋转轴22，旋转轴22位于旋转孔12中转动时，旋转顶面20与旋转底面10相互转动。
[0032]具体的，参照图3
‑
图5，所述旋转底面10上设置有若干类三棱柱结构的第一剪切块11，所述第一剪切块11在旋转底面10的一半径上具有多个，且多个述第一剪切块11又分别以旋转底面10的圆心环形阵列；另外，所述旋转底面10以半径大小分为多个环形的剪切区域，不同剪切区域的第一剪切块11环形阵列的个数不同，同一剪切区域的第一剪切块11环形阵列的个数不同；进一步的，所述旋转底面10上同一剪切区域的第一剪切块11的尺寸沿半径增大方向逐渐本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种原代组织细胞的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：获取器官组织，然后采用两个具有棱状微结构的研磨平面相互旋转运动剪碎器官组织，将剪碎的器官组织用消化酶溶液消化，之后加入胎牛血清终止消化，首次离心去除上清液，再加入红细胞裂解液，吹散混匀后再次离心去除上清液，得到提取的原代细胞。2.根据权利要求1所述的一种原代组织细胞的提取方法，其特征在于，两个所述研磨平面分别包括旋转底面和旋转顶面，所述旋转底面与旋转顶面之间通过一轴孔连接部转动连接，所述旋转底面上设置有若干类三棱柱结构的第一剪切块，所述旋转顶面上设有若干类四棱锥结构的第二剪切块，旋转底面和旋转顶面相互转动时，第一剪切块与第二剪切块交错具有剪切力，通过该剪切力剪碎器官组织。3.根据权利要求2所述的一种原代组织细胞的提取方法，其特征在于，所述第一剪切块在旋转底面的一半径上具有多个，且多个述第一剪切块又分别以旋转底面的圆心环形阵列；所述第二剪切块在旋转顶面的一半径上具有多个，且多个述第二剪切块又分别以旋转顶面的圆心环形阵列。4.根据权利要求3所述的一种原代组织细胞的提取方法，其特征在于，所述旋转底面以半径大小分为多个环形的剪切区域，不同剪切区域的第一剪切块环形阵列的个数不同，同一剪切区域的第一剪切块环形阵列的个数不同；所述旋转顶面也以半径大小分为多个环形的剪切区...

【专利技术属性】
技术研发人员：王皖龙，马少华，朱雨，
申请(专利权)人：清华大学深圳国际研究生院，
类型：发明
国别省市：