中短链脂肪酸生物传感器菌株及其构建方法和应用技术

本发明专利技术属于生物工程技术领域，特别涉及一种中短链脂肪酸生物传感器菌株及其构建方法和应用。为了高通量筛选中短链脂肪酸，解决现有检测方法检测通量低，检测成本高的问题，本发明专利技术提供一种检测中短链脂肪酸的生物传感器菌株，将该生物传感器的报告元件表达盒整合在酿酒酵母基因组上，使其可以稳定表达。同时比较了酿酒酵母基因组上3个整合位点表达报告元件对生物传感器性能的影响，获得了性能良好的中短链脂肪酸生物传感器菌株A

【技术实现步骤摘要】
中短链脂肪酸生物传感器菌株及其构建方法和应用


[0001]本专利技术属于生物工程
，特别涉及一种中短链脂肪酸生物传感器菌株及其构建方法和应用。

技术介绍

[0002]中短链脂肪酸及其衍生物在医药、防腐或生物燃料等工业领域有着广泛的应用。目前，主要使用GC、LC、GC
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MS/LC
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MS等方法检测中短链脂肪酸，检测成本高，检测通量低，当面临高通量筛选中短链脂肪酸生产菌株时，基于色谱法的检测手段往往成为限速步骤。随着合成生物学的发展，利用生物传感器进行筛选可以大大加快生产菌株的优化速度，逐渐成为替代色谱法的一种高通量检测方法。
[0003]生物传感器是一个将输入信号(如代谢物浓度)转换为荧光或基因表达等可测量输出信号的基因编码元件。生物传感器主要由两个部分组成，分别为实现信号产生的生物识别元件(包括酶、抗体、抗原、微生物、细胞、组织、核酸等生物活性物质)与辅助信号导出的信号输出元件。其中，实现信号产生的生物识别元件是构成生物传感器的核心部分。生物传感器具有操作简单、灵敏度高、稳定性好、成本低等特点，在生物检测、生物生产和生物修复等方面也有着广泛的应用，为生物行为编程和基础生物学研究提供了强有力的工具。基于转录因子的生物传感器由转录因子、应答元件和报告元件三部分组成。报告元件通常是一种荧光蛋白，其表达受配体诱导的转录因子控制。
[0004]目前，能够检测识别中短链脂肪酸的生物材料报道较少，因此，探索一种全新的生物材料用于制备生物传感器进行筛选检测中短链脂肪酸对医药、防腐或生物燃料等工业领域有着重要的意义。

技术实现思路

[0005]为了高通量筛选中短链脂肪酸，解决现有检测方法检测通量低，检测成本高的问题，本专利技术的目的是提供一种检测中短链脂肪酸的基因工程菌株，并将其用于生物传感器中高通量筛选中短链脂肪酸。具体是构建了一株中短链脂肪酸生物传感器，将该生物传感器的报告元件表达盒整合在酿酒酵母基因组上，使其可以稳定表达。进一步地，比较了酿酒酵母基因组上3个整合位点表达报告元件对生物传感器性能的影响，获得了性能良好的中短链脂肪酸生物传感器菌株A
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416d，其对于中短链脂肪酸高通量筛选具有重要意义。
[0006]本专利技术第一方面提供中短链脂肪酸生物传感器菌株，其是将Yep352
‑
PGT质粒整合在酿酒酵母基因组上，表达构建而成。
[0007]进一步地，所述Yep352
‑
PGT质粒是在基础质粒上，引入pPDR12片段、yeGFP片段构建而成；优选地，所述基础质粒为Yep352
‑
TT质粒。
[0008]进一步地，所述整合位点为酿酒酵母基因组ARS416附近，定义为416d位点，以上下同源臂序列分别为FA
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416d和FB
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416d识别重组。其中，所述FA
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416d和FB
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416d分别以酿酒酵母为基因组模板，引物分别为416d
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FA
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F/416d
‑
FA
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R，416d
‑
FB
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F/416d
‑
FB
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R进行PCR扩增
获得。
[0009]优选地，所述Yep352
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TT质粒的核苷酸序列如SEQ ID No 1所示。
[0010]SEQ ID No 1
[0011]AATTCGAGCTCGGTACCCAGTTCGAGTTTATCATTATCAATACTGCCATTTCAAAGAATACGTAAATAATTAATAGTAGTGATTTTCCTAACTTTATTTAGTCAAAAAATTAGCCTTTTAATTCTGCTGTAACCCGTACATGCCCAAAATAGGGGGCGGGTTACACAGAATATATAACATCGTAGGTGTCTGGGTGAACAGTTTATTCCTGGCATCCACTAAATATAATGGAGCCCGCTTTTTAAGCTGGCATCCAGAAAAAAAAAGAATCCCAGCACCAAAATATTGTTTTCTTCACCAACCATCAGTTCATAGGTCCATTCTCTTAGCGCAACTACAGAGAACAGGGGCACAAACAGGCAAAAAACGGGCACAACCTCAATGGAGTGATGCAACCTGCCTGGAGTAAATGATGACACAAGGCAATTGACCCACGCATGTATCTATCTCATTTTCTTACACCTTCTATTACCTTCTGCTCTCTCTGATTTGGAAAAAGCTGAAAAAAAAGGTTGAAACCAGTTCCCTGAAATTATTCCCCTACTTGACTAATAAGTATATAAAGACGGTAGGTATTGATTGTAATTCTGTAAATCTATTTCTTAAACTTCTTAAATTCTACTTTTATAGTTAGTCTTTTTTTTAGTTTTAAAACACCAAGAACTTAGTTTCGAATAAACACACATAAACAAACAAACTCGAGATAAAGCAATCTTGATGAGGATAATGATTTTTTTTTGAATATACATAAATACTACCGTTTTTCTGCTAGATTTTGTGAAGACGTAAATAAGTACATATTACTTTTTAAGCCAAGACAAGATTAAGCATTAACTTTACCCTTTTCTCTTCTAAGTTTCAATACTAGTTATCACTGTTTAAAAGTTATGGCGAGAACGTCGGCGGTTAAAATATATTACCCTGAACGCTGCAGGcatgcAAGCTTGGCACTGGCCGTCGTTTTACAACGTCGTGACTGGGAAAACCCTGGCGTTACCCAACTTAATCGCCTTGCAGCACATCCCCCCTTCGCCAGCTGGCGTAATAGCGAAGAGGCCCGCACCGATCGCCCTTCCCAACAGTTGCGCAGCCTGAATGGCGAATGGCGCCTGATGCGGTATTTTCTCCTTACGCATCTGTGCGGTATTTCACACCGCATAGGGTAATAACTGATATAATTAAATTGAAGCTCTAATTTGTGAGTTTAGTATACATGCATTTACTTATAATACAGTTTTTTAGTTTTGCTGGCCGCATCTTCTCAAATATGCTTCCCAGCCTGCTTTTCTGTAACGTTCACCCTCTACCTTAGCATCCCTTCCCTTTGCAAATAGTCCTCTTCCAACAATAATAATGTCAGATCCTGTAGAGACCACATCATCCACGGTTCTATACTGTTGACCCAATGCGTCTCCCTTGTCATCTAAACCCACACCGGGTGTCATAA
[0012]TCA本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.中短链脂肪酸生物传感器菌株，其特征在于：其是将Yep352
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PGT质粒整合在酿酒酵母基因组上，表达构建而成。2.根据权利要求1所述的中短链脂肪酸生物传感器菌株，其特征在于：所述Yep352
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PGT质粒是在基础质粒上，引入pPDR12片段、yeGFP片段构建而成；优选地，所述基础质粒为Yep352
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TT质粒。3.根据权利要求1或2所述的中短链脂肪酸生物传感器菌株，其特征在于：所述整合位点为酿酒酵母基因组416d位点。4.根据权利要求3所述的中短链脂肪酸生物传感器菌株，其特征在于：所述Yep352
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TT质粒的核苷酸序列如SEQ ID No 1所示；所述pPDR12片段的核苷酸序列如SEQ ID No 2所示；所述yeGFP片段的核苷酸序列如SEQ ID No 3所示。5.根据权利要求4所述的中短链脂肪酸生物传感器菌株，其特征在于：所述Yep352
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PGT质粒的核苷酸序列如SEQ ID No 4所示。6.根据权利要求1～5任一项所述的中短链脂肪酸生物传感器菌株，其特征在于：所述酿酒酵母为酿酒酵母CICC32315的α单倍体。7.根据权利要求6所述的中短链脂肪酸生物传感器菌株，其特征在于：所述整合方法是以质粒Yep352
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PGT为目标基因，扩增获得FA
‑
P
‑
GFP
‑
T
‑<...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈叶福，王洪，武晓乐，赵东，李蕊蕊，郑佳，刘方圆，
申请(专利权)人：宜宾五粮液股份有限公司，
类型：发明
国别省市：