一种希氏乳杆菌及其在土壤改良修复上的应用制造技术

本发明专利技术涉及农业微生物技术领域，提供了一种希氏乳杆菌，于2022年12月28日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.26341；本发明专利技术还提供了一种希氏乳杆菌在土壤改良修复上的应用。借此，本发明专利技术的希氏乳杆菌具有降解重金属、调节土壤盐碱、促进植物种子发芽生长等功效，利用其制备的复合微生物菌剂存活时间长、高效、无二次污染、且成本低。且成本低。且成本低。

【技术实现步骤摘要】
一种希氏乳杆菌及其在土壤改良修复上的应用


[0001]本专利技术涉及农业微生物
，尤其涉及一种希氏乳杆菌及其在土壤改良修复上的应用。

技术介绍

[0002]土壤是人类生存的根本，更是农业发展的物质基础，近年来，随着城市化及工业化的快速发展，土壤正在遭受着更加严重的污染和破坏，如果不加以治理和改善，不仅会降低农作物的产量和品质，影响农业的可持续发展，还会危害人类的身心健康，因此，加强对土壤的保护和治理已成了当下刻不容缓的事情。
[0003]目前，用于土壤污染治理的方法有物理化学法和生物修复方法，一般的物理化学修复法对高浓度的重金属污染场地比较有效，对中轻度受污染的耕地应用较少，且物理设备投入成本高，化学试剂使用不当还易造成土壤二次污染，生物法高效易控制、成本低廉、环境友好，深受大家青睐。但是，目前生物修复产品多为易繁殖、代谢快的芽孢类菌剂，其在环境不适的情况下会处于芽孢休眠状态，很难起到好的改良效果。
[0004]因此，急需筛选出高抗重金属且能调节盐碱，又能促进耕地作物生长的非芽孢类工程菌，并制作出市场上需求的高效快速改良修复土壤的复合菌剂产品。
[0005]综上可知，现有技术在实际使用上显然存在不便与缺陷，所以有必要加以改进。

技术实现思路

[0006]针对上述的缺陷，本专利技术的目的在于提供一种希氏乳杆菌及其在土壤改良修复上的应用，此种希氏乳杆菌具有降解重金属、调节土壤盐碱、促进植物种子发芽生长等功效，利用其制备的复合微生物菌剂存活时间长、高效、无二次污染、且成本低。<br/>[0007]为了实现上述目的，本专利技术提供一种希氏乳杆菌，所述希氏乳杆菌的拉丁文为Lactobacillushilgardii，该菌株于2022年12月27日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.26341。
[0008]本专利技术还提供一种复合微生物菌剂，由上述希氏乳杆菌制备得到。
[0009]根据本专利技术的复合微生物菌剂，其总有效活菌数不少于2亿cfu/g。
[0010]一种复合微生物菌剂的制备方法，包括如下步骤：
[0011]a、将希氏乳杆菌、植物乳杆菌、枯草芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌和酿酒酵母分别接种于培养基中，培养20～28h，得到种子液。
[0012]b、将希氏乳杆菌、植物乳杆菌和酿酒酵母的种子液混合接种到二级发酵罐中，置于30～35℃条件下培养48～72h，得到二级种子液。
[0013]c、将二级种子液与枯草芽孢杆菌和巨大芽孢杆菌的种子液接种到三级发酵罐中，置于30～35℃条件下培养5～7d，得到复合微生物菌剂。
[0014]根据本专利技术的制备方法，所述三级发酵罐的培养基为红糖、尿素、磷酸二氢钾、玉米粉、豆面。
[0015]根据本专利技术的制备方法，所述红糖、尿素、磷酸二氢钾、玉米粉、豆面的质量比为：50～70：20～40：1～2：50～80：10～20。
[0016]根据本专利技术的制备方法，所述二级发酵罐的培养基为YEPD培养基。
[0017]一种希氏乳杆菌在土壤改良修复上的应用。
[0018]本专利技术的目的在于提供一种希氏乳杆菌，该菌株具有降解重金属、调节土壤盐碱、促进植物种子发芽生长等功效；利用上述菌株制备的复合微生物菌剂具有存活时间长、高效、无二次污染、成本低等多种优势。综上所述，本专利技术的有益效果是：此种希氏乳杆菌具有降解重金属、调节土壤盐碱、促进植物种子发芽生长等功效，利用其制备的复合微生物菌剂存活时间长、高效、无二次污染、且成本低。
附图说明
[0019]图1为希氏乳杆菌平板形态图；
[0020]图2为希氏乳杆菌显微镜下的菌落形态图；
[0021]图3为Biolog95种碳源步利用实验结果图；
[0022]图4为不同重金属镉、汞下希氏乳杆菌的生长情况图；
[0023]图5为希氏乳杆菌对重金属镉、汞的吸附降解能力图；
[0024]图6为不同盐浓度下希氏乳杆菌长势情况图；
[0025]图7为不同pH值条件下希氏乳杆菌生长情况图；
[0026]图8为不同pH值条件下希氏乳杆菌降碱能力结果图；
[0027]图9为希氏乳杆菌促生发芽试验图。
具体实施方式
[0028]为了使本专利技术的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图，对本专利技术进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。
[0029]本专利技术提供了一种希氏乳杆菌(编号为DB
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16)，拉丁文为Lactobacillus hilgardii，该菌株于2022年12月27日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称：CGMCC，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号)，保藏编号为CGMCCNo.26341。
[0030]上述希氏乳杆菌的筛选和鉴定方法，包括以下步骤：
[0031]步骤一菌株的筛选
[0032]取土壤10g加入灭菌去离子水90ml混匀(所述土壤选自西安市灞桥区受中轻度污染的土壤，其pH值为7.16～7.33，EC值为1.006～1.566ms/cm，镉含量0.26～1.30mg/kg，汞含量0.901～10.5mg/kg)，配制成100g/L的母液，然后依次稀释到10～7，选取适宜的梯度浓度涂布于镉(浓度为5mg/kg)、汞(浓度为20mg/kg)的LB、MRS、PDA固体培养基中，在28～35℃下培养48～120h，选取具有重金属污染耐受程度强、长势好的菌株进行多次分离纯化，得到一株长势较好的乳酸菌，在MRS培养基上菌落圆形、隆起、表面光滑、有光泽，边缘整齐，记为DB
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16。(参见图1)
[0033]步骤二菌株的鉴定
[0034]1、形态观察
[0035]取上述菌株进行形态观察、革兰氏染色观察，得出DB
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16呈杆状，革兰氏染色阳性，不形成芽孢。(参见图2)
[0036]2、微生物自动鉴定系统鉴定
[0037]取上述菌株经BIOLOG4.20微生物自动鉴定系统鉴定，与希氏乳杆菌(Lactobacillushilgardii)符合，其95种碳源同步利用。(参见图3)
[0038]3、基因组鉴定
[0039]取上述菌株提取基因组DNA，进行16SrDNA和gyrB基因测序。
[0040]4、降解重金属能力的测定
[0041]将上述保存希氏乳杆菌，按照1％的接种量接种于镉、汞浓度分别为5mg/L、10mg/L、15mg/L、20mg/L、25mg/L、30mg/L的MRS液体培养基中，置于37℃条件下培养5d，测定菌体生长情况(OD600值)及希氏乳杆菌对不同浓度重金属的吸附降解情况。
[0042]该菌株在镉5～25mg/kg、汞5～20mg/kg范围内生长良好，在镉浓度30mg/L、汞浓度25mg/L长势变弱，在汞浓度30mg/L时不能生本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种希氏乳杆菌，其特征在于，所述希氏乳杆菌的拉丁文为Lactobacillus hilgardii，该菌株于2022年12月27日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.26341。2.一种复合微生物菌剂，其特征在于，由权利要求1所述的希氏乳杆菌制备得到。3.根据权利要求2所述的复合微生物菌剂，其特征在于，总有效活菌数不少于2亿cfu/g。4.一种制备权利要求2所述的复合微生物菌剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：a、将希氏乳杆菌、植物乳杆菌、枯草芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌和酿酒酵母分别接种于培养基中，培养20～28h，得到种子液；b、将希氏乳杆菌、植物乳杆菌和酿酒酵母的种子液混...

【专利技术属性】
技术研发人员：谭德星，苏晓艺，鲁雪利，
申请(专利权)人：潍坊市华滨生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：