泛菌B-3在降解烟草中纤维素的应用制造技术

本申请公开了一种泛菌B

【技术实现步骤摘要】
泛菌B
‑
3在降解烟草中纤维素的应用


[0001]本专利技术申请涉及生物工程
，具体涉及一种泛菌B
‑
3在降解烟草中纤维素的应用。

技术介绍

[0002]烟草中的纤维素与半纤维素、木质素、果胶等物质共同组成了烟梗的细胞壁结构。烟叶中总细胞壁物质含量在20～30%左右，在烟梗和烟草薄片中甚至占到总质量的1/3以上。已有研究表明，纤维素含量的高低与烟梗品质密切相关，纤维素含量过高，会在燃吸过程中产生一种尖刺的刺激感和一种类似纸张燃烧的不良气味，从而对卷烟品质产生副作用；另外，大量的纤维素在超过600℃的温度下会热裂解生成稠环芳烃（PAH），影响烟叶吸食安全性。
[0003]为改善烟丝质量，提升卷烟原料品质，需要有效降解烟丝中的纤维素，使其含量保持在合理范围；此外，专利技术人研究发现，纤维素结构性质较为稳定，在烟丝自然醇化过程中很难降解，因此，研究和开发新的烟丝细胞壁物质降解技术，对提高卷烟品质，节约生产成本，增加企业经济效益具有广泛而现实的意义。
[0004]公开于该
技术介绍
部分的信息仅用于加深对本公开的
技术介绍
的理解，而不应当被视为承认或以任何形式暗示该信息构成本领域技术人员所公知的现有技术。

技术实现思路

[0005]专利技术人通过研究发现，从雪茄中分离、筛选得到的泛菌（Pantoea sp.）B
‑
3菌株，通过选择性培养基诱导培养，可选择性分泌纤维素酶，其酶制剂可选择性的降解烟丝中的纤维素，并有效改善烟叶/烟丝的品质。/>[0006]根据本公开的一个方面，将保藏编号为 CCTCC NO：M 20221165的泛菌B
‑
3或其生物制剂应用在烟叶/烟丝中纤维素的降解中。
[0007]根据本公开的另一个方面，将保藏编号为 CCTCC NO：M 20221165的泛菌B
‑
3应用于降解烟叶/烟丝中纤维素的生物制剂的制备当中。
[0008]在本公开的一些实施例中，上述生物制剂的制备方法，包括如下步骤：（1）活化菌种：取保藏编号为 CCTCC NO：M 20221165的泛菌B
‑
3菌株接种NA固体培养基上，25～35℃条件下培养1～2 d；（2）制备种子液：刮取步骤（1）中所培养的菌体，接种于液体NA培养基中，在25～40℃，140r/min～200 r/min震荡培养24～72 h，得到种子液；（3）扩大培养：取步骤（2）中种子液按照培养基重量的2～4%接种于产纤维素酶选择性诱导液体培养基中，在温度25℃～35℃、摇床转速180 r/min～220 r/min震荡培养12h～36h；（4）制备生物制剂：取步骤（3）中培养后的培养基上清液，将所述上清液通过陶瓷膜部分过滤，而后在超滤膜部分过滤，将得到的粗酶母液用无菌水按照1：8～10的体积比稀
释，得生物制剂。
[0009]在本公开的一些实施例中，所述步骤（1）中的NA固体培养基组成为：以g/L计，含牛肉膏2.8～3.2、蛋白胨9.0～11.0、NaCl 4.5～5.5、琼脂18～22，且其pH 6.5～7.0，110～125℃下灭菌15～25 min。
[0010]在本公开的一些实施例中，所述步骤（2）中的液体NA培养基组成为：以g/L计，含牛肉膏2.8～3.2、蛋白胨9.0～11.0、NaCl 4.5～5.5，且其pH 6.5～7.0，110～125下℃灭菌15～25 min。
[0011]在本公开的一些实施例中，所述步骤（3）中的扩大培养基含：羧甲基纤维素钠15.0 g/L、蛋白胨5.0 g/L、酵母粉10.0g/L、KH2PO41.5 g/L、MgSO4•
7H2O 0.25 g/L、NaCl 5.0 g/L，且pH值为7.5。
[0012]根据本公开的再一个方面，将保藏编号为 CCTCC NO：M 20221165的泛菌B
‑
3应用于纤维素酶的制备中。
[0013]根据本公开的另一个方面，提供一种烟叶处理方法，包括如下步骤：（1）将生物制剂与烟叶/烟丝按照1：2～4的质量比，均匀添加到烟叶/烟丝中；（2）调节烟叶/烟丝水分含量至24～26%，在温度34～36℃、湿度70～80%的条件下密封放置30～40 h；（3）将烟叶/烟丝在70～80℃条件下烘干10～20min，即成。
[0014]本申请实施例中提供的一个或多个技术方案，至少具有如下任一技术效果或优点：1. 泛菌（Pantoea sp.）B
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3，其代谢产物能有效降低烟草中纤维素的含量，并改善烟草在燃吸过程中的刺激感和不良气味，以及烟草吸食安全性。
[0015]2. 设计了简便的生物制剂进行烟草加工处理方法，其工艺流程简便高效，加工处理成本较低，且处理周期较短、安全可靠，能够明显降低烟草中的纤维素含量并改善烟叶/烟丝品质等技术优点，因而在卷烟制造
具有较好地推广应用价值。
附图说明
[0016]图1为本申请一实施例中菌株B
‑
3产纤维素酶酶活性回归变量分析。
具体实施方式
[0017]为了更好的理解本申请技术方案，下面将结合说明书附图以及具体的实施方式对上述技术方案进行详细的说明。
[0018]在以下实施例中所涉及的仪器设备如无特别说明，均为常规仪器设备；所涉及的试剂和培养基如无特别说明，均为市售常规试剂和培养基；所涉及的试验方法，如无特别说明，均为常规方法。
[0019]以下实施例中所涉及的泛菌B
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3菌株，其分类命名为Pantoeasp.，已于2022年7月25日保藏于中国典型培养物保藏中心，其保藏编号为 CCTCC NO：M 20221165，其筛选及鉴定过程参见专利申请CN202211161758.4。
[0020]实例一：泛菌B
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3菌株生物制剂制备将筛选所得B
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3菌株用于降解烟丝中的纤维素，需首先将该菌株制备成易于使用
的生物制剂，具体制备过程如下：（1）活化菌种：将保存的泛菌B
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3菌株采用点种法接种于NA固体培养基（以g/L计，含牛肉膏3.0、蛋白胨10.0、NaCl 5.0、琼脂20，且pH=7.0，121℃灭菌20 min）上，于30℃条件下培养2 d。
[0021]（2）制备种子液：在超净工作台中刮取步骤（1）中所培养的菌体，接种于含有5mL液体NA培养基（以g/L计，含牛肉膏3.0、蛋白胨10.0、NaCl 5.0，pH 6.8，121℃灭菌20 min）的18
×
180的试管中，在30℃，140～200 r/min（最优170 r/min）的摇床中震荡培养36h，即得到种子液。
[0022]（3）扩大培养：将步骤（2）中种子液按照培养基重量的3%接种于产纤维素酶专用液体培养基中（培养基组成：羧甲基纤维素钠(CMC
‑
Na)15.0 g/L、蛋白胨5本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.保藏编号为 CCTCC NO：M 20221165的泛菌B
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3或其生物制剂在降解烟叶/烟丝中纤维素的应用。2.保藏编号为 CCTCC NO：M 20221165的泛菌B
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3在制备降解烟叶/烟丝中纤维素的生物制剂中的应用。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，包括如下步骤：（1）活化菌种：将保藏编号为 CCTCC NO：M 20221165的泛菌B
‑
3菌株接种NA固体培养基上，25～35℃条件下培养1～2 d；（2）制备种子液：刮取步骤（1）中所培养的菌体，接种于液体NA培养基中，在25～40℃，140r/min～200 r/min震荡培养24～72 h，得到种子液；（3）扩大培养：取步骤（2）中种子液按照培养基重量的2～4%接种于产纤维素酶选择性诱导液体培养基中，在温度25℃～35℃、摇床转速180 r/min～220 r/min震荡培养12h～36h；（4）制备生物制剂：取步骤（3）中培养后的培养基上清液，将所述上清液通过陶瓷膜部分过滤，而后在超滤膜部分过滤，将得到的粗酶母液用无菌水按照1：8～12的体积比稀释，得生物制剂。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，在所述步骤（1）中，NA固体培养基组成为：以g/L...

【专利技术属性】
技术研发人员：王欢欢，武云杰，王鹏泽，付博，张晓平，田斌强，姬会福，薛刚，
申请(专利权)人：河南农业大学，
类型：发明
国别省市：