耐盐性相关的蛋白质RUB1及其相关生物材料与应用制造技术

本发明专利技术公开了一种耐盐性相关的RUB1蛋白质及其相关生物材料与应用。所述RUB1蛋白质具体可为如下A1)、A2)或A3)的蛋白质：A1)氨基酸序列是序列表中SEQ ID No.2的蛋白质；A2)将A1)的蛋白质经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的与A1)所示的蛋白质具有90％以上的同一性且具有相同活性的蛋白质；A3)在A1)或A2)的N末端或/和C末端连接蛋白质标签得到的融合蛋白质。RUB1蛋白质及其相关生物材料可用于调控耐盐性。生物材料可用于调控耐盐性。生物材料可用于调控耐盐性。

【技术实现步骤摘要】
耐盐性相关的蛋白质RUB1及其相关生物材料与应用


[0001]本专利技术涉及生物
中一种耐盐性相关的蛋白质RUB1及其相关生物材料与应用。

技术介绍

[0002]土壤盐渍化造成的耕地资源破坏、农业生产损失，已成为世界性的生态问题。盐胁迫是植物生长和产量的主要限制性因素之一，可引起植物体内一系列的生理和代谢反应，从而造成植物减产甚至死亡。由于大多数植物尤其是农作物对盐胁迫敏感，因此土壤盐渍化已经成为限制全球农业生产力的重要因素。而实践证明，改良盐渍土是一项复杂、难度大、用时长的工作，故揭示植物应对盐胁迫的机制，并据此提高植物的耐盐能力，已经成为促进农业生产的重要基础。
[0003]近几年的研究表明，植物的耐盐性复杂并涉及细胞适应的多重机制以及多种代谢途径，植物要达到离子平衡，必须要进行三方面相互联系的调节，首先必须防止植物受到毒害，其次植物在逆境下要重建一个平衡的体内环境，最后生长必须可以恢复。植物耐盐的复杂性使得利用传统育种的方法来提高作物耐盐能力十分困难，因而使用生物技术方法从遗传上设计耐盐作物成为当前农业领域的研究热点。
[0004]迄今为止，已有许多与植物耐盐相关的基因被克隆研究，包括编码各种有机溶质合成酶的基因：如参与脯氨酸合成的P5cs基因、与甜菜碱合成有关的基因、与甘露醇合成有关的基因；LEA蛋白基因；具有抗氧化胁迫作用的过氧化酶基因等，但大多需要与其它多个耐盐基因共同作用才可能获得较为理想的耐盐效果。因此需要从不同种类的植物中有目的地克隆其它不影响植物正常生长的耐盐基因，以期获得具有良好耐盐性的作物。

技术实现思路

[0005]本专利技术所要解决的技术问题是如何提高植物抗盐碱能力。
[0006]本专利技术提供了一种蛋白质，名称为RUB1，是如下A1)、A2)或A3)的蛋白质：
[0007]A1)氨基酸序列是序列表中SEQ ID No.2的蛋白质；
[0008]A2)将A1)的蛋白质经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的与A1)所示的蛋白质具有90％以上的同一性、来源于高粱且具有相同活性的蛋白质；
[0009]A3)在A1)或A2)的N末端或/和C末端连接蛋白质标签得到的融合蛋白质。
[0010]上述蛋白质可人工合成，也可先合成其编码基因，再进行生物表达得到。
[0011]上述蛋白质中，所述蛋白质标签(protein
‑
tag)是指利用DNA体外重组技术，与目的蛋白质一起融合表达的一种多肽或者蛋白质，以便于目的蛋白质的表达、检测、示踪和/或纯化。所述蛋白质标签可为Flag标签、His标签、MBP标签、HA标签、myc标签、GST标签和/或SUMO标签等。
[0012]上述蛋白质中，同一性是指氨基酸序列的同一性。可使用国际互联网上的同源性检索站点测定氨基酸序列的同一性，如NCBI主页网站的BLAST网页。例如，可在高级
BLAST2.1中，通过使用blastp作为程序，将Expect值设置为10，将所有Filter设置为OFF，使用BLOSUM62作为Matrix，将Gap existence cost，Per residue gap cost和Lambda ratio分别设置为11，1和0.85(缺省值)并进行检索一对氨基酸序列的同一性进行计算，然后即可获得同一性的值(％)。
[0013]上述蛋白质中，所述90％以上的同一性可为至少91％、92％、95％、96％、98％、99％或100％的同一性。
[0014]调控RUB1蛋白质编码基因表达量的物质也属于本专利技术的保护范围。
[0015]本专利技术所提供的调控RUB1蛋白质编码基因表达量的物质，为下述任一种：
[0016]B1)编码RUB1的核酸分子；
[0017]B2)含有B1)所述核酸分子的表达盒；
[0018]B3)含有B1)所述核酸分子的重组载体、或含有B2)所述表达盒的重组载体；
[0019]B4)含有B1)所述核酸分子的重组微生物、或含有B2)所述表达盒的重组微生物、或含有B3)所述重组载体的重组微生物。
[0020]其中，所述核酸分子可以是DNA，如cDNA、基因组DNA或重组DNA；所述核酸分子也可以是RNA，如mRNA或hnRNA等。
[0021]上述物质中，B1)所述核酸分子为如下b1)
‑
b4)中任一所示的基因：
[0022]b1)编码链的编码序列是序列表中SEQ ID No.1的cDNA分子或DNA分子；
[0023]b2)编码链的核苷酸是序列表中SEQ ID No.1的cDNA分子或DNA分子；
[0024]b3)与b1)或b2)限定的核苷酸序列具有80％或80％以上同一性，且编码RUB1蛋白质的cDNA分子或DNA分子；
[0025]b4)在严格条件下与b1)
‑
b3)中任一所述限定的核苷酸序列杂交，且编码RUB1蛋白质的cDNA分子或DNA分子。
[0026]其中，序列表中的SEQ ID No.1由462个核苷酸组成，编码序列表中的SEQ IDNo.2所示的蛋白质。
[0027]所述严格条件可为在6
×
SSC(柠檬酸钠)、0.5％SDS(十二烷基硫酸钠)溶液中，在65℃下杂交，然后用2
×
SSC、0.1％SDS和1
×
SSC、0.1％SDS各洗膜1次。
[0028]上述物质中，B2)含有B1)所述核酸分子的表达盒(RUB1基因表达盒)，是指能够在宿主细胞中表达RUB1的核酸分子，该核酸分子可包括启动RUB1基因转录的启动子。可用于本专利技术的启动子包括但不限于：组成型启动子，组织、器官和发育特异的启动子，和诱导型启动子。启动子的例子包括但不限于：花椰菜花叶病毒(CAMV)的组成型启动子35S；泛素(Ubiquitin)基因启动子(pUbi)；来自西红柿的创伤诱导型启动子，亮氨酸氨基肽酶("LAP",Chao等人(1999)Plant Physiology120:979
‑
992)；来自烟草的化学诱导型启动子，发病机理相关1(PR1)(由水杨酸和BTH(苯并噻二唑
‑7‑
硫代羟酸S
‑
甲酯)诱导)；西红柿蛋白质酶抑制剂II启动子(PIN2)或LAP启动子(均可用茉莉酮酸曱酯诱导)；热休克启动子(美国专利5，187，267)；四环素诱导型启动子(美国专利5，057,422)；种子特异性启动子，如谷子种子特异性启动子pF128(CN101063139B(中国专利2007 1 0099169.7))，种子贮存蛋白质特异的启动子(例如，菜豆球蛋白质、napin,oleosin和大豆beta conglycin的启动子(Beachy等人(1985)EMBO J.4:3047
‑
3053))。它们可单独使用或与其它的植物启动子结合使用。此处引用的所有参考文献均全文引用。...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.蛋白质，其特征在于，所述蛋白质是如下A1)、A2)或A3)的蛋白质：A1)氨基酸序列是序列表中SEQ ID No.2的蛋白质；A2)将A1)的蛋白质经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的与A1)所示的蛋白质具有90％以上的同一性、来源于高粱且具有相同活性的蛋白质；A3)在A1)或A2)的N末端或/和C末端连接蛋白质标签得到的融合蛋白质。2.调控权利要求1所述的蛋白质编码基因表达量的物质，其特征在于，为下述任一种：B1)编码权利要求1所述的蛋白质的核酸分子；B2)含有B1)所述核酸分子的表达盒；B3)含有B1)所述核酸分子的重组载体、或含有B2)所述表达盒的重组载体；B4)含有B1)所述核酸分子的重组微生物、或含有B2)所述表达盒的重组微生物、或含有B3)所述重组载体的重组微生物。3.根据权利要求2所述的物质，其特征在于，B1)所述核酸分子为如下b1)
‑
b4)中任一所示的基因：b1)编码链的编码序列是序列表中SEQ ID No.1的cDNA分子或DNA分子；b2)编码链的核苷酸是序列表中SEQ ID No.1的cDNA分子或DNA分子；b3)与b1)或b2)限定的核苷酸序列具有80％或80％以上同一性，且编码权利要求1所述蛋白质的cDNA分子或DNA分子；b4)在严格条件下与b1)
‑
b3)中任一所述限定的核苷酸序列杂交，且编码权利要...

【专利技术属性】
技术研发人员：姚琴芳，姚松泉，张卫良，邱芬，慎思杰，倪佳希，
申请(专利权)人：湖州松泉农业科技有限公司，
类型：发明
国别省市：