用于治疗间皮素阳性癌症的组合物和方法技术

本公开提供了包含对间皮素特异性的第一活化剂受体和对已在间皮素阳性癌细胞中丢失的配体特异性的第二抑制性受体的免疫细胞，以及制备和使用其治疗癌症的方法。及制备和使用其治疗癌症的方法。及制备和使用其治疗癌症的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于治疗间皮素阳性癌症的组合物和方法
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求于2020年9月30日提交的美国临时申请第63/085,971号和于2020年8月20日提交的美国临时申请第63/068,245号的优先权，其各自通过引用整体并入本文。


[0003]本公开涉及过继性细胞疗法和癌症治疗学的领域。
[0004]通过引用并入序列表
[0005]序列表段落申请含有已经通过EFS
‑
WEB以ASCII格式提交的序列表，并且通过引用将其全文并入本文。所述ASCII副本创建于2021年8月17日，被命名为A2BI_019_03WO_SeqList_ST25.txt，并且大小为1.08MB。

技术介绍

[0006]细胞疗法是治疗各种疾病，特别是癌症的有力工具。在常规过继性细胞疗法中，将免疫细胞工程化以表达特异性受体，例如嵌合抗原受体(CAR)或T细胞受体(TCR)，其通过受体与靶细胞表达的配体的相互作用将免疫细胞的活性导向细胞靶。鉴定合适的靶分子仍然具有挑战性，因为许多靶分子在正常组织中表达。当移植细胞靶向表达靶分子的正常组织时，这种表达可能会导致毒性。因此，本领域需要用于通过过继性细胞疗法治疗疾病，特别是癌症的组合物和方法。
[0007]在1992年提出间皮素(MSLN)作为癌症靶(Chang等人，《癌症研究(Cancer Res)》52:181
‑
86)，然而仍然没有利用MSLN的可行疗法。它不仅在大多数间皮瘤上表达，而且在卵巢癌、宫颈癌、子宫癌、胃癌、胰腺癌和肺腺癌的大亚型中也表达。(Hassan等人《临床肿瘤学杂志(J Clin Oncol)》34:4171
‑
79)在正常成人中，MSLN仅存在于间皮中，间皮本身可能是非必需的组织。已经测试了几种针对MSLN的研究疗法；例如，免疫毒素缀合物、抗体
‑
药物缀合物、双特异性抗体、CAR
‑
T和杂合TCR
‑
scFv。
[0008]所有有效的全身施用疗法都是有毒的。因此，本领域需要与MSLN(+)癌症治疗相关的组合物和方法。

技术实现思路

[0009]本文提供了与MSLN(+)癌症治疗相关的组合物和方法。有利地，本文公开的组合物和方法可以利用杂合性丢失(LOH)来解决MSLN(+)癌症。在一些情况下，本文公开的组合物和方法可以通过将MSLN靶向的活化剂受体与阻断剂受体配对来避免对正常组织的全身毒性。在不受理论束缚的情况下，由编码阻断剂抗原的基因座处的LOH引起的阻断剂抗原在肿瘤和正常组织中表达的差异可赋予对肿瘤杀伤的高选择性。
[0010]本公开提供了免疫细胞，其包含：(a)第一受体，其包含对间皮素(MSLN)特异性的细胞外配体结合结构域；和(b)第二受体，其包含对MSLN+癌细胞中丢失的非靶抗原特异性的细胞外配体结合结构域，其中第一受体是响应于MSLN的活化剂受体；并且其中第二受体
ID NO:285的序列，或与其具有至少85％、至少90％、至少95％、至少97％或至少99％同一性的序列。在一些实施例中，第一受体包含SEQ ID NO:303的序列，或与其具有至少90％、至少95％、至少97％或至少99％同一性的序列。
[0015]在本公开的免疫细胞的一些实施例中，第二受体包含LILRB1细胞内结构域或其功能变体。在一些实施例中，LILRB1细胞内结构域包含与SEQ ID NO:70至少90％、至少95％、至少97％、至少99％或与其相同的序列。在一些实施例中，第二受体包含LILRB1跨膜结构域或其功能变体。在一些实施例中，LILRB1跨膜结构域或其功能变体包含与SEQ ID NO:74至少90％、至少95％、至少97％、至少99％或与其相同的序列。在一些实施例中，第二受体包含LILRB1铰链结构域或其功能变体。在一些实施例中，LILRB1铰链结构域包含与SEQ ID NO:73至少90％、至少95％、至少97％、至少99％或与其相同的序列。在一些实施例中，第二受体包含LILRB1细胞内结构域、LILRB1跨膜结构域、LILRB1铰链结构域、任何这些的功能变体或其组合。在一些实施例中，LILRB1铰链结构域、LILRB1细胞内结构域和LILRB1跨膜结构域包含SEQ ID NO:71或与SEQ ID NO:71至少90％、至少95％、至少97％、至少99％或与其相同的序列。在一些实施例中，第二受体包含SEQ ID NO:348的序列，或与其具有至少90％、至少95％、至少97％或至少99％同一性的序列。
[0016]在本公开的免疫细胞的一些实施例中，MSLN+癌细胞是间皮瘤癌细胞、卵巢癌细胞、宫颈癌细胞、结肠直肠癌细胞、食道癌细胞、头颈癌细胞、肾癌细胞、子宫癌细胞、胃癌细胞、胰腺癌细胞、肺癌细胞、结肠直肠癌细胞或胆管癌细胞，或表达MSLN的任何癌细胞。在一些实施例中，MSLN+癌细胞是间皮瘤癌细胞、卵巢癌细胞、宫颈细胞、子宫癌细胞、胃癌细胞、胰腺癌细胞或肺腺癌细胞。
[0017]在一些实施例中，MSLN+癌细胞是上皮癌细胞。上皮癌是起源于上皮细胞的癌症。在一些实施例中，MSLN+上皮癌是癌。
[0018]在本公开的免疫细胞的一些实施例中，MSLN+癌细胞是不表达HLA
‑
A*02的MSLN+/HLA
‑
A*02
‑
癌细胞。在一些实施例中，MSLN+/HLA
‑
A*02
‑
癌细胞通过在HLA
‑
A处的杂合性丢失导致HLA
‑
A*02丢失而衍生自MSLN+/HLA
‑
A*02+细胞。在一些实施例中，在具有杂合性丢失的MSLN+/HLA
‑
A*02
‑
癌细胞存在下，第一受体和第二受体一起特异性活化免疫细胞。在一些实施例中，在未通过杂合性丢失而丢失HLA
‑
A*02的MSLN+细胞存在下，第一受体和第二受体一起不特异性活化免疫细胞。
[0019]在本公开的免疫细胞的一些实施例中，免疫细胞是T细胞。在一些实施例中，T细胞是CD8+CD4
‑
T细胞。
[0020]在本公开的免疫细胞的一些实施例中，MHC I类基因的表达和/或功能已被降低或消除。在一些实施例中，MHC I类基因是β
‑2‑
微球蛋白(B2M)。在一些实施例中，免疫细胞进一步包含干扰RNA，该干扰RNA包含与B2M mRNA的序列互补的序列。在一些实施例中，干扰RNA包含选自表13所示序列组的序列，或相对于其具有至多1、2、3或4个取代、插入或缺失的序列。在一些实施例中，干扰RNA能够诱导RNAi介导的B2M mRNA的降解。在一些实施例中，干扰RNA是短发夹RNA(shRNA)。在一些实施例中，shRNA包含：(a)第一序列，其从5'端至3'端具有与B2M mRNA的序列互补本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种免疫细胞，其包含：a.第一受体，其包含对间皮素(MSLN)特异性的细胞外配体结合结构域；以及b.第二受体，其包含对在MSLN+癌细胞中丢失的非靶抗原特异性的细胞外配体结合结构域，其中所述第一受体是响应于MSLN的活化剂受体；并且其中所述第二受体是响应于所述非靶抗原的抑制性受体。2.根据权利要求1所述的免疫细胞，其中所述非靶抗原通过杂合性丢失而在所述MSLN+癌细胞中丢失。3.根据权利要求1或2所述的免疫细胞，其中所述第二受体的所述细胞外配体结合结构域特异性结合主要组织相容性复合物(MHC)蛋白的等位基因变体。4.根据权利要求1至3中任一项所述的免疫细胞，其中所述第二受体的细胞外配体结合结构域特异性结合HLA
‑
A、HLA
‑
B或HLA
‑
C蛋白的等位基因变体。5.根据权利要求1至4中任一项所述的免疫细胞，其中所述第二受体的所述细胞外配体结合结构域特异性结合HLA
‑
A*01、HLA
‑
A*02、HLA
‑
A*03、HLA
‑
A*11、HLA
‑
B*07或HLA
‑
C*07。6.根据权利要求5所述的免疫细胞，其中所述第二受体的所述细胞外配体结合结构域特异性结合HLA
‑
A*02。7.根据权利要求1至6中任一项所述的免疫细胞，其中所述第二受体的所述细胞外配体结合结构域包含如公开于表6中的互补决定区(CDR)CDR
‑
L1、CDR
‑
L2、CDR
‑
L3、CDR
‑
H1、CDR
‑
H2、CDR
‑
H3；或相对于表6或表7的所述CDR具有至多1、2或3个取代、缺失或插入的CDR序列。8.根据权利要求1至6中任一项所述的免疫细胞，其中所述第二受体的所述细胞外配体结合结构域包含SEQ ID NO:42
‑
47或SEQ ID NO:48
‑
53的互补决定区(CDR)CDR
‑
L1、CDR
‑
L2、CDR
‑
L3、CDR
‑
H1、CDR
‑
H2、CDR
‑
H3；或相对于SEQ ID NO:42
‑
47或SEQ ID NO:48
‑
53的所述CDR具有至多1、2或3个取代、缺失或插入的CDR序列。9.根据权利要求1至6中任一项所述的免疫细胞，其中所述第二受体的所述细胞外配体结合结构域包含选自表5中公开的多肽序列的多肽序列；或与其具有至少85％、至少90％、至少95％、至少97％或至少99％同一性的序列。10.根据权利要求1至6中任一项所述的免疫细胞，其中所述第二受体的所述细胞外配体结合结构域包含SEQ ID NO:30
‑
41中任一个，或与其具有至少85％、至少90％、至少95％、至少97％或至少99％同一性的序列。11.根据权利要求1至10中任一项所述的免疫细胞，其中所述第一受体是嵌合抗原受体(CAR)。12.根据权利要求1至11中任一项所述的免疫细胞，其中所述第一受体的所述细胞外配体结合结构域包含如公开于表2中的互补决定区(CDR)CDR
‑
L1、CDR
‑
L2、CDR
‑
L3、CDR
‑
H1、CDR
‑
H2、CDR
‑
H3；或相对于表2的所述CDR具有至多1、2或3个取代、缺失或插入的CDR序列。13.根据权利要求1至11中任一项所述的免疫细胞，其中所述第一受体的所述细胞外配体结合结构域包含以下：包含表3中所示序列的可变重链(VH)部分和包含表4中所示序列的可变轻链(VL)部分；或与其具有至少80％、至少90％、至少95％、至少97％或至少99％同一性的序列。14.根据权利要求1至13中任一项所述的免疫细胞，其中所述第一受体的所述细胞外配
体结合结构域包含以下：可变重链(VH)部分，其包含SEQ ID NO:233或与其具有至少85％、至少90％、至少95％、至少97％或至少99％同一性的序列；以及可变轻链(VL)部分，其包含SEQ ID NO:279或与其具有85％、至少90％、至少95％、至少97％或至少99％同一性的序列。15.根据权利要求1至13中任一项所述的免疫细胞，其中所述第一受体的所述细胞外配体结合结构域包含选自由SEQ ID NO:3
‑
6、80和154
‑
215组成的组的序列，或与其具有至少85％、至少90％、至少95％、至少97％或至少99％同一性的序列。16.根据权利要求1至13中任一项所述的免疫细胞，其中所述第一受体的所述细胞外配体结合结构域包含SEQ ID NO:171的scFv序列；或与其具有至少85％、至少90％、至少95％、至少97％或至少99％同一性的序列。17.根据权利要求1至16中任一项所述的免疫细胞，其中所述第一受体包含铰链结构域、跨膜结构域和细胞内结构域。18.根据权利要求17所述的免疫细胞，其中所述铰链结构域包含CD8α铰链结构域。19.根据权利要求18所述的免疫细胞，其中所述CD8α铰链结构域包含SEQ ID NO:7的序列，或与其具有至少85％、至少90％、至少95％、至少97％或至少99％同一性的序列。20.根据权利要求11至19中任一项所述的免疫细胞，其中所述跨膜结构域包含CD28跨膜结构域。21.根据权利要求20所述的免疫细胞，其中所述CD28跨膜结构域包含SEQ ID NO:11的序列，或与其具有至少85％、至少90％、至少95％、至少97％或至少99％同一性的序列。22.根据权利要求11至21中任一项所述的免疫细胞，其中所述细胞内结构域包含CD28共刺激结构域、4
‑
1BB共刺激结构域和CD3ζ活化结构域。23.根据权利要求22所述的免疫细胞，其中所述细胞内结构域包含SEQ ID NO:285的序列，或与其具有至少85％、至少90％、至少95％、至少97％或至少99％同一性的序列。24.根据权利要求1至23中任一项所述的免疫细胞，其中所述第一受体包含SEQ IDNO:303的序列，或与其具有至少90％、至少95％、至少97％或至少99％同一性的序列。25.根据权利要求1至24中任一项所述的免疫细胞，其中所述第二受体包含LILRB1细胞内结构域或其功能变体。26.根据权利要求25所述的免疫细胞，其中所述LILRB1细胞内结构域包含与SEQ ID NO:70至少90％、至少95％、至少97％、至少99％或与其相同的序列。27.根据权利要求1至26中任一项所述的免疫细胞，其中所述第二受体包含LILRB1跨膜结构域或其功能变体。28.根据权利要求27所述的免疫细胞，其中所述LILRB1跨膜结构域或其功能变体包含与SEQ ID NO:74至少90％、至少95％、至少97％、至少99％或与其相同的序列。29.根据权利要求1至28中任一项所述的免疫细胞，其中所述第二受体包含LILRB1铰链结构域或其功能变体。30.根据权利要求29所述的免疫细胞，其中所述LILRB1铰链结构域包含与SEQ IDNO:73至少90％、至少95％、至少97％、至少99％或与其相同的序列。31.根据权利要求1至30中任一项所述的免疫细胞，其中所述第二受体包含LILRB1细胞内结构域、LILRB1跨膜结构域、LILRB1铰链结构域、任何这些的功能变体或其组合。32.根据权利要求31所述的免疫细胞，其中所述LILRB1铰链结构域、LILRB1细胞内结构
域和LILRB1跨膜结构域包含SEQ ID NO:71或与SEQ ID NO:71至少90％、至少95％、至少97％、至少99％或与其相同的序列。33.根据权利要求1至32中任一项所述的免疫细胞，其中所述第二受体包含SEQ IDNO:348的序列，或与其具有至少90％、至少95％、至少97％或至少99％同一性的序列。34.根据权利要求1至33中任一项所述的免疫细胞，其中所述MSLN+癌细胞是间皮瘤癌细胞、卵巢癌细胞、宫颈癌细胞、结肠直肠癌细胞、食道癌细胞、头颈癌细胞、肾癌细胞、子宫癌细胞、胃癌细胞、胰腺癌细胞、肺癌细胞、结肠直肠癌细胞或胆管癌细胞。35.根据权利要求34所述的免疫细胞，其中所述MSLN+癌细胞是间皮瘤癌细胞、卵巢癌细胞、宫颈细胞、子宫癌细胞、胃癌细胞、胰腺癌细胞或肺腺癌细胞。36.根据权利要求1至35中任一项所述的免疫细胞，其中所述MSLN+癌细胞是不表达HLA
‑
A*02的MSLN+/HLA
‑
A*02
‑
癌细胞。37.根据权利要求36所述的免疫细胞，其中所述MSLN+/HLA
‑
A*02
‑
癌细胞通过在HLA
‑
A处的杂合性丢失导致HLA
‑
A*02丢失而衍生自MSLN+/HLA
‑
A*02+细胞。38.根据权利要求1至37中任一项所述的免疫细胞，其中在具有杂合性丢失的所述MSLN+/HLA
‑
A*02
‑
癌细胞存在下，所述第一受体和所述第二受体一起特异性活化所述免疫细胞。39.根据权利要求1至38中任一项所述的免疫细胞，其中在未通过杂合性丢失而丢失HLA
‑
A*02的MSLN+细胞存在下，所述第一受体和所述第二受体一起不特异性活化所述免疫细胞。40.根据权利要求1至39中任一项所述的免疫细胞，其中所述免疫细胞是T细胞。41.根据权利要求40所述的免疫细胞，其中所述T细胞是CD8+CD4
‑
T细胞。42.根据权利要求1至41中任一项所述的免疫细胞，其中MHC I类基因的表达和/或功能已被降低或消除。43.根据权利要求42所述的免疫细胞，其中所述MHC I类基因是β
‑2‑
微球蛋白(B2M)。44.根据权利要求43所述的免疫细胞，其进一步包含多核苷酸，所述多核苷酸包含干扰RNA，所述干扰RNA包含与B2M mRNA的序列互补的序列。45.根据权利要求44所述的免疫细胞，其中所述干扰RNA包含选自表13所示序列组的序列，或相对于其具有至多1、2、3或4个取代、插入或缺失的序列。46.根据权利要求44或45所述的免疫细胞，其中所述干扰RNA能够诱导RNAi介导的所述B2M mRNA的降解。47.根据权利要求46所述的免疫细胞，其中所述干扰RNA是短发夹RNA(shRNA)。48.根据权利要求47所述的免疫细胞，其中所述shRNA包含：a.第一序列，其从5'端至3'端具有与所述B2M mRNA的序列互补的序列；以及b.第二序列，其从5'端至3'端具有与所述第一序列互补的序列，其中所述第一序列和所述第二序列形成所述shRNA。49.根据权利要求47或48所述的免疫细胞，其中所述shRNA由包含序列GCACTCAAAGCTTGTTAAGATCGAAATCT...

【专利技术属性】
技术研发人员：C，
申请(专利权)人：A二生物治疗股份有限公司，
类型：发明
国别省市：