一种基于干细胞外泌体制备化妆品及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种基于干细胞外泌体制备化妆品及其制备方法。该方法包括以下过程：(1)制备干细胞外泌体；(2)将如SEQ ID NO.1所示的活性多肽与透明质酸钠连接，获得活性多肽

【技术实现步骤摘要】
一种基于干细胞外泌体制备化妆品及其制备方法


[0001]本专利技术属于化妆品制备
，具体涉及一种基于干细胞外泌体制备化妆品及其制备方法。

技术介绍

[0002]随着社会的发展，以及人民对美好生活的向往和追求，爱美变成一个越来越重要的生活追求目标，使得人们对皮肤衰老认识越来越深刻。衰老的皮肤对美观的影响主要是皮肤干燥无光泽，粗糙、干裂、皱纹、松弛及下垂，以及脂褐质、老年斑明显增加。于是各种化妆品和药物被广泛使用，但是目前保持皮肤抗衰老以及美白的药物或化妆品也是千奇百种，其效果也是各不相同。
[0003]近年来，随着干细胞技术研究的发展，使得干细胞用于药物或者化妆品成为了可能。外泌体(exosome)是细胞经过“内吞一融合一外排”等一系列调控过程形成并可分泌的双层膜囊泡。其不含有DNA片段，但含有与其来源细胞相类似的细胞因子、生长因子等蛋白质，以及脂质、编码或非编码RNA等生物活性物质，在调控细胞生理功能方面具有重要作用。外泌体的质膜含有丰富的胆固醇、鞘磷脂、神经酰胺、脂筏及磷脂酰丝氨酸；外泌体不仅可以保护这些生物活性物质在细胞外环境中不被降解和稀释，也可以促进这些物质通过组织液或血液的远距离输送，同时外泌体膜上特异性的表面配体允许它与受体细胞高效率结合。但目前仍缺少具有优异美白效果的化妆品。

技术实现思路

[0004]针对现有技术中的上述不足，本专利技术提供一种基于干细胞外泌体制备化妆品及其制备方法。
[0005]为实现上述目的，本专利技术解决其技术问题所采用的技术方案是：
>[0006]一种基于干细胞外泌体制备化妆品的方法，包括以下过程：
[0007](1)制备干细胞外泌体；
[0008](2)将如SEQ ID NO.1所示的活性多肽与透明质酸钠连接，获得活性多肽
‑
透明质酸钠复合物；
[0009](3)将活性多肽
‑
透明质酸钠复合物、干细胞外泌体和佐剂一同混合，制备得到该化妆品。
[0010]进一步地，干细胞外泌体为人脐带干细胞外泌体。
[0011]进一步地，人脐带干细胞外泌体的制备方法如下：
[0012]培养P3代脐带干细胞(货号：XMX0301，四川新泌学生物科技有限公司)于10cm培养皿中，待细胞增殖融合至80％，按照1:4进行传代；P4细胞融合至对数生长期时，弃培养基，PBS漂洗两次，加入无血清培养基，24h后收集上清于离心管中，将所得上清3000rpm离心30min去除细胞碎片，收集上层清液，通过0.22μm无菌过滤膜过滤后取得滤液，再经10000rpm离心45min弃上清，即可获得外泌体。
[0013]进一步地，活性多肽
‑
透明质酸钠复合物的制备方法如下：
[0014]将透明质酸钠酶解后，加入如SEQ ID NO.1所示的活性多肽，混合均匀后加入交联剂交联固化即可。
[0015]进一步地，透明质酸钠与活性多肽的质量比为1:3～6。
[0016]进一步地，活性多肽的浓度为0.125～2nM。
[0017]进一步地，活性多肽的浓度为1nM。
[0018]进一步地，交联剂为氯化钙。
[0019]进一步地，佐剂包括胶原蛋白、辛基十二醇、抗氧化剂、表面活性剂、水、防腐剂和稳定剂中的至少一种。
[0020]上述方法制备得到的化妆品。
[0021]一种活性多肽，该活性多肽具有如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列；具体序列为：HLPIAYQRRVAPFSSRG；
[0022]或如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸后，与其具有相同功能的氨基酸序列；
[0023]或与SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列具有85％以上同源性的氨基酸序列。
[0024]上述活性多肽的制备方法，采用化学合成或基因功能的方式获得。
[0025]进一步地，采用固相合成法合成如SEQ ID NO.1所示的活性多肽。
[0026]一种化妆品，包括上述活性多肽。
[0027]进一步地，化妆品可以是乳剂、水剂等剂型。
[0028]本专利技术的有益效果：
[0029]本申请从人脐带干细胞中提取了外泌体，再与活性多肽
‑
透明质酸钠复合物复配，活性多肽为短片段，其具有优异的渗透性，同时，还具有显著的美白抑制黑色素、抗氧化等功效，当将其与透明质酸一同复配形成复合物时，再与外泌体相结合，能够有效的渗透至肌肤中被细胞吸收，获得优异的美白功效。
具体实施方式
[0030]下面对本专利技术的具体实施方式进行描述，以便于本
的技术人员理解本专利技术，但应该清楚，本专利技术不限于具体实施方式的范围，对本
的普通技术人员来讲，只要各种变化在所附的权利要求限定和确定的本专利技术的精神和范围内，这些变化是显而易见的，一切利用本专利技术构思的专利技术创造均在保护之列。
[0031]实施例1活性多肽的合成
[0032]1、Wang树脂的预处理
[0033]称取Wang树脂(0.35mmol/g，1g，0.35mmol，1eq)于25mL的玻璃固相管中。随后，向玻璃固相管中加入15mL的DCM，静置15分钟，使树脂充分溶胀，最后通过减压抽滤除去DCM；
[0034]2、Fmoc保护基团的脱去
[0035]向固相管中加入15mL的20％(v/v)哌啶/DMF，将固相管封好后放置在摇床上振摇15min，重复2次脱保护过程。最后，依次用MeOH，DCM，DMF洗涤树脂三次，每次10mL；
[0036]3、制备活性肽
[0037]通过标准的固相合成方法将序列1中的氨基酸依次偶联至Wang树脂上，其中，偶联
条件为：氨基酸(1.05mmol，3eq)，偶联试剂HBTU(1.05mmol，3eq)、HOBT(1.05mmol，3eq)和DIEA(2.10mmol，6eq)；脱Fmoc保护基团的条件为：20％哌啶/DMF(v/v)。每步氨基酸偶联反应及脱Fmoc保护后，均使用MeOH，DCM，DMF各洗涤树脂3次，得到活性多肽。
[0038]实施例2活性多肽性能检测
[0039]1、抗衰老检测
[0040](1)将Hacat细胞接种到含10％FBS 1640培养基的细胞培养皿中，当细胞密度达到85％时，换成无血清培养基培养。
[0041](2)Hacat细胞在无血清培养基培养24h后，胰酶消化计数使用含0.25％FBS 1640培养基稀释成2
×
106/ml。在96孔板中，每孔接种100μL。
[0042](3)设置多肽浓度梯度分别为0nM、0.125nM、0.25nM、0.5nM、1nM和2nM与细胞进行孵育，总体积为100μL。
[0043](4)采用CCK
‑
8试剂盒检测每孔OD
450
的吸光度值；
[0044](5)以0nM处的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于干细胞外泌体制备化妆品的方法，其特征在于，包括以下过程：(1)制备干细胞外泌体；(2)将如SEQ ID NO.1所示的活性多肽与透明质酸钠连接，获得活性多肽
‑
透明质酸钠复合物；(3)将活性多肽
‑
透明质酸钠复合物、干细胞外泌体和佐剂一同混合，制备得到该化妆品。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述干细胞外泌体为人脐带干细胞外泌体。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述人脐带干细胞外泌体的制备方法如下：将脐带干细胞正常培养至细胞融合度达到70～80％，更换培养基并连续培养10～20h后离心收集外泌体。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述活性多肽
‑
透明质酸钠复合物的制备方法如下：将透明质酸钠酶解后，加入如SEQ ID NO.1所...

【专利技术属性】
技术研发人员：张杰，付从燕，胡黎，万娜，伏心卓，赵国宝，
申请(专利权)人：四川新泌学生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：