NNMT在炎症性肠病诊断和治疗中的用途制造技术

本发明专利技术属于生物医药领域，具体公开NNMT在炎症性肠病诊断和治疗中的用途。NNMTi在制备防治炎症性肠病的药物中的应用，所述炎症性肠病包括克罗恩病和溃疡性结肠炎。检测NNMT表达水平的试剂在制备诊断或检测炎症性肠病的产品中的应用。本发明专利技术为炎症性肠病提供了新的治疗方案，并且进一步通过DSS小鼠模型研究了NNMTi对于克罗恩病、溃疡性结肠炎的可治性；同时还为炎症性肠病的检测提供了新的方案。时还为炎症性肠病的检测提供了新的方案。时还为炎症性肠病的检测提供了新的方案。

【技术实现步骤摘要】
NNMT在炎症性肠病诊断和治疗中的用途


[0001]本专利技术属于生物医药领域，尤其涉及NNMT在炎症性肠病诊断和治疗中的用途。

技术介绍

[0002]炎症性肠病(IBD)包括克罗恩病(CD)和溃疡性结肠炎(UC)，是一种由多种致病因素引起的复杂全身性炎症免疫反应，其表现为上皮屏障功能障碍和粘膜免疫反应失调。IBD的发病是肠道免疫反应改变的结果，除了遗传易感性外，还受到宿主微生物群的高度影响。长期自我延续性的复发性慢性肠道炎症有可能导致结直肠癌(CRC)的发生。目前，IBD在全球的发病率居高不下，对医疗资源造成极大的负担，且被认为是结直肠癌进展的主要致病风险因素。更好地了解IBD发病及及进展的病理生理学和分子生化过程，可以为我们攻克IBD疾病提供早期诊断和治疗的新视角。
[0003]烟酰胺N
‑
甲基转移酶(NNMT)是一种胞质代谢酶，以s
‑
腺苷
‑1‑
甲硫氨酸为甲基供体，催化烟酰胺(NAM)n
‑
甲基化的酶，产生n1
‑
甲基烟酰胺(MNA)，释放s
‑
腺苷
‑1‑
高半胱氨酸(SAH)。NNMT在烟酸和烟酰胺代谢途径中发挥关键作用，NNMT将NAM甲基化并促使其从体内排泄，从而减少烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)合成的前体物质。大多数NAD+的分解酶都受到其产物NAM浓度的抑制，但NNMT可去除多余的NAM，有助于NAD+依赖性促炎信号的持续性传导。抑制NNMT可增加NAD+的含量。已有充足证据表明NAD+对IBD具有调控作用。NNMT抑制剂NNMTi在IBD中的作用尚未见报道。

技术实现思路

[0004]针对上述问题，本专利技术提供NNMT在炎症性肠病诊断和治疗中的用途，主要是弥补了NNMT炎症性肠病中的致病性不明确，也弥补NNMTi在治疗炎症性肠病中的研究空白，并且还进一步研究如何对炎症性肠病进行诊断或检测等问题。
[0005]为了解决上述问题，本专利技术采用如下技术方案：
[0006]本专利技术第一方面涉及NNMTi在制备防治炎症性肠病的药物中的应用。其中，防治表示预防和治疗。
[0007]在一些方式中，所述炎症性肠病包括克罗恩病和溃疡性结肠炎。
[0008]在一些方式中，所述NNMTi的作用表现为改善肠道的通透性、修复肠道的屏障功能障碍、改善肠道组织的氧化应激和炎症损伤。
[0009]在一些方式中，所述NNMTi为本部分重点介绍一种常见的NNMTi，但其他成熟的NNMTi也应当同样视为可行，原因在于本专利技术验证了调节NNMT表达水平对缓解炎症性肠病的作用，通过抑制NNMT表达可以较为有效的缓解炎症性肠病。
[0010]本专利技术第二方面涉及检测NNMT表达水平的试剂在制备诊断或检测炎症性肠病的产品中的应用。其中，由于NNMT表达水平与炎症性肠病的发生呈正相关的关系，由此可通过检测NNMT表达水平的试剂更有针对性的辅助诊断炎症性肠病，为疾病的确诊提供参考。当然，NNMT表达水平还可作为炎症性肠病诊断中的一个指标。所述检测NNMT表达水平的试剂还应当包括一些高通量检测产品。
[0011]在一些方式中，所述炎症性肠病包括克罗恩病、溃疡性结肠炎。
[0012]所述检测NNMT表达水平的试剂包括引物、抗体等检测产品。比如检测NNMT表达水平的引物为
[0013]上游引物：5
′‑
CCATCTGTTCTAAAAGAAGGGC
‑3′
，
[0014]下游引物：5
′‑
GGAGGTGAAGCCTGATTCCA
‑3′
。
[0015]本专利技术的有益效果是：
[0016]为炎症性肠病提供了新的治疗方案，并且进一步通过DSS小鼠模型研究了NNMTi对于克罗恩病、溃疡性结肠炎的可治性；同时，还为炎症性肠病的检测提供了新的方案。
附图说明
[0017]图1为NNMT在IBD患者肠道和血清的表达情况；
[0018]图2为NNMTi缓解小鼠肠道炎症情况图表；
[0019]图3为NNMTi增加小鼠肠道屏障紧密连接蛋白表达的图表；
[0020]图4为NNMTi减轻小鼠肠道氧化应激和炎症损伤的图表。
具体实施方式
[0021]下面对本专利技术做进一步说明：
[0022]一、材料
[0023]1、小鼠：C57BL/6J品种小鼠(购于北京维通利华公司)，SPF环境下饲养到20
‑
22g，8周龄左右。
[0024]2、NNMT抑制剂NNMTi(购于美国Med Chem Express公司)，分子式为C
10
H
11
IN2，分子量为286.11Da；纯度为99.64％。
[0025]化合物1：
[0026]二、方法
[0027]1、构建葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的结肠炎小鼠模型，使用NNMTi干预。
[0028]①
实验小鼠的分组：雄性C57BL/6小鼠24只，随机分为对照组、DSS组、DSS+1mg/kg NNMTi组和DSS+10mg/kg NNMTi组，6只/组，小鼠适应性饲养7天，观察其饮食、活动、大小便情况并称量体重。
[0029]②
小鼠的干预：
[0030]配制溶剂：10％DMSO+40％PEG300+5％Tween
‑
80+45％生理盐水；
[0031]对照组：自由饮用正常水7天，于第0、1、2、3、4、5、6、7天皮下注射200ul的上述配制溶剂；
[0032]DSS组：小鼠自由饮用2.5％DSS溶液7天，于第0、1、2、3、4、5、6、7天皮下注射200ul上述配制溶剂；
[0033]DSS+1mg/kg NNMTi组和DSS+10mg/kg NNMTi组：小鼠自由饮用2.5％DSS溶液7天，分别使用上述配制溶剂溶解1mg/kg和10mg/kg的NNMTi。于第0、1、2、3、4、5、6、7天皮下注射200ul含1mg/kg和10mg/kg NNMTi的溶液。
[0034]③
小鼠一般情况的记录：造模开始后，每天记录小鼠的体重、大便的性状(正常、糊状便还是稀水样便)及带血情况(无、隐血还是明显肉眼血便)和活动情况(活跃还是倦怠)等。
[0035]④
小鼠处死及标本的收集：于第7天处死小鼠，戊巴比妥钠腹腔麻醉小鼠后进行眼球取血，沿腹中线打开腹腔，自直肠以上到回盲部留取完整直结肠，测定并记录结肠长度；同时留取脾脏并称重。清洗结肠粪便，取远端结肠组织于
‑
80℃保存，用于RT
‑
qPCR、western
‑
blot和氧化应激检测。
[0036]⑤
小鼠肠黏膜通透性检测：每只小鼠予200μl FITC
‑
dextran 4kd(25m本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.NNMTi在制备防治炎症性肠病的药物中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述炎症性肠病包括克罗恩病和溃疡性结肠炎。3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述NNMTi的作用表现为改善肠道的通透性、修复肠道的屏障功能障碍、改善肠道组织的氧化应激和炎症损伤。4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述NNMTi为5.检测NNMT表达水平的试剂在制备诊断或检测炎症性肠病的产品中的应用。6.根据权利要求5所述的应用，其特征...

【专利技术属性】
技术研发人员：付妤，陈超越，
申请(专利权)人：华中科技大学同济医学院附属协和医院，
类型：发明
国别省市：