一种肉羊精液冷冻稀释液及其制备方法与应用技术

本发明专利技术提供了一种肉羊精液冷冻稀释液及其制备方法与应用，属于精液冷冻保存技术领域。本发明专利技术提供的肉羊精液冷冻稀释液，包括1％

【技术实现步骤摘要】
一种肉羊精液冷冻稀释液及其制备方法与应用


[0001]本专利技术属于精液冷冻保存
，尤其涉及一种肉羊精液冷冻稀释液及其制备方法与应用。

技术介绍

[0002]提高精液冷冻保存效果是实现高质量发展人工授精技术的关键环节，也是建立现代畜牧业遗传资源库的重要策略之一。选取优质冻精资源进行人工授精不仅可以从源头上减少生殖疾病的传播，还可以提高优秀种质资源的改良速度，增加对遗传特性和生产性能的高效选择。目前，因肉羊精子易受低温环境的影响发生冷休克现象，我国肉羊精液的冷冻保存技术尚未取得实质性的进展；羊精液的冷冻保存过程中，温度和渗透压的改变会严重降低精子活力，产生精子膜功能受损、脂质过氧化和冷冻保护剂的毒害等现象，降低精子与卵母细胞的结合能力，因此，优化冷冻精液生产工艺对于肉羊精液的长期高效保存具有重要意义。
[0003]蛋黄作为冷冻保护剂广泛用于精液的冷冻保存，可以稳定精子顶体膜并在解冻时降低耗氧量。但是，配制冷冻稀释液时，蛋黄质量难以控制，存在病毒感染和被污染的风险，并且蛋黄中特殊成分能与精清中酶类物质相互作用，所产生的物质对精子具有毒害作用。通常在稀释前通过去除部分精清，降低蛋黄的毒害作用，从而提高解冻后的精子质量。此外，蛋黄内微生物所释放的内毒素会降低精子的受精潜力。因此，蛋黄作为冷冻保护剂具有潜在的风险，从生物安全方面考虑，选择不含动物源性的冷冻保护剂十分必要。截至目前，未见如何在不添加卵黄基础上还能够达到改善肉羊精液冷冻保存效果的有关报道。

技术实现思路

[0004]有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种不含有卵黄且能够用于肉羊精液冷冻保存的精液冷冻稀释液。
[0005]为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供了以下技术方案：
[0006]本专利技术提供了一种肉羊精液冷冻稀释液，所述冷冻稀释液包括1％
‑
2％浓度的大豆卵磷脂、5％
‑
7％浓度的甘油和基础稀释液；所述基础稀释液为每100mL包括如下组分：Tris 2.40
‑
2.80g，果糖0.8
‑
1.2g，柠檬酸1.2
‑
1.5g，青霉素10000UL，链霉素10000μg，其余为双蒸水。
[0007]优选的，所述甘油为灭菌后的甘油。
[0008]优选的，所述基础稀释液的pH值为6.8。
[0009]本专利技术还提供了一种上述冷冻稀释液的制备方法，包括如下步骤：在基础稀释液中加入大豆卵磷脂和甘油，待溶解后进行离心，过滤即得。
[0010]优选的，所述基础稀释液的制备方法，包括如下步骤：将Tris、果糖和柠檬酸添加至双蒸水中搅匀，定容至100mL，灭菌冷却后加入青霉素和链霉素。
[0011]本专利技术还提供了一种上述冷冻稀释液在肉羊精液冷冻保存、肉羊人工授精或肉羊
种质资源改良中的应用。
[0012]本专利技术的有益效果：
[0013]与现有肉羊精液冷冻保存稀释液相比较，本专利技术冷冻稀释液能够有效提高精子活率、顶体完整率和妊娠率，提升了肉羊精液的冷冻效果，从而为商业化、标准化生产肉羊冷冻精液奠定基础，促进肉羊冻精供种进程。
具体实施方式
[0014]本专利技术提供了一种肉羊精液冷冻稀释液，所述冷冻稀释液包括1％
‑
2％浓度的大豆卵磷脂、5％
‑
7％浓度的甘油和基础稀释液；所述基础稀释液为每100mL包括如下组分：Tris 2.40
‑
2.80g，果糖0.8
‑
1.2g，柠檬酸1.2
‑
1.5g，青霉素10000U，链霉素10000μg，其余为双蒸水。
[0015]本专利技术对于上述各原料的具体来源没有特殊限定，采用本领域常规市售产品均可。在本专利技术中，所述大豆卵磷脂的浓度指的是大豆卵磷脂与基础稀释液的质量体积比(g/mL)，所述甘油的浓度指的是甘油与基础稀释液的体积比(mL/mL)。在本专利技术中，所述大豆卵磷脂的浓度优选的为1.5％，所述甘油的浓度优选的为6％
‑
7％。本专利技术采用1％
‑
2％浓度的非动物源性的冷冻保护剂大豆卵磷脂替代卵黄，可提高肉羊冷冻精液安全生产效率和冷冻精液受精率。大豆卵磷脂是高分子量脂蛋白和磷脂的替代品，即可降低动物源性冷冻保护剂的卫生风险，又能防止稀释、冷却和超低温保存过程中对精子质膜的损伤。本专利技术肉羊精液冷冻稀释液对精子活率、顶体完整率和妊娠率与以卵黄作为保护剂所得的冷冻保存效果有显著差异，表明大豆卵磷脂在肉羊精液冷冻过程中对精子起到了保护作用，而且在本专利技术中，大豆卵磷脂对精子的运动速度有明显的促进作用，能够防止温度和渗透压的改变对精子活力的降低，防止精子膜功能受损、脂质过氧化和冷冻保护剂的毒害等现象，提高精子与卵母细胞的结合能力。本专利技术用大豆卵磷脂替代卵黄，其中磷脂是蛋黄和大豆卵磷脂磷酸盐的主要成分，外源磷脂可以取代精子质膜的磷脂，维持精子质膜结构和功能的正常运行。在本专利技术中，所述甘油优选为灭菌后的甘油，本专利技术对于甘油的灭菌方式没有特殊限定；所述基础稀释液的pH值优选为6.8。在本专利技术中，所述基础稀释液优选的为每100mL包括如下组分：Tris 2.50
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2.75g，果糖0.9
‑
1.1g，柠檬酸1.3
‑
1.45g，青霉素10000U，链霉素10000μg，更优选的为每100mL包括如下组分：Tris 2.71g，果糖1.00g，柠檬酸1.42g，青霉素10000U，链霉素10000μg。
[0016]本专利技术还提供了一种上述冷冻稀释液的制备方法，包括如下步骤：在基础稀释液中加入大豆卵磷脂和甘油，待溶解后进行离心，过滤即得。
[0017]在本专利技术中，优选采用超声波仪加速溶解，本专利技术对于离心的具体条件没有特殊限定，采用本领域常规离心方式均可。在本专利技术中，优选的使用细菌过滤器进行过滤。在本专利技术中，所述基础稀释液的制备方法，优选的包括如下步骤：将Tris、果糖和柠檬酸添加至双蒸水中搅匀，定容至100mL，灭菌冷却后加入青霉素和链霉素。在本专利技术中，所述灭菌优选为高压灭菌，本专利技术对于高压灭菌的具体条件没有特殊限定，采用本领域常规高压灭菌方式即可。在本专利技术中，加入青霉素和链霉素后，优选的需调节pH值至6.8。
[0018]本专利技术还提供了一种上述冷冻稀释液在肉羊精液冷冻保存、肉羊人工授精或肉羊种质资源改良中的应用。
[0019]下面结合实施例对本专利技术提供的技术方案进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本专利技术保护范围的限定。
[0020]下述实施例中，如无特殊说明，均为常规方法。
[0021]下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
[0022]实施例1
[0023]Tris(三羟甲基氨基甲烷)、果糖、柠檬酸、甘油和大豆卵磷脂购自Sigma
‑
Aldrich(USA)公司；青霉素、链霉素购自国内。
[0024]基础稀本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种肉羊精液冷冻稀释液，其特征在于，所述冷冻稀释液包括1％
‑
2％浓度的大豆卵磷脂、5％
‑
7％浓度的甘油和基础稀释液；所述基础稀释液为每100mL包括如下组分：Tris2.40
‑
2.80g，果糖0.8
‑
1.2g，柠檬酸1.2
‑
1.5g，青霉素10000U，链霉素10000μg，其余为双蒸水。2.根据权利要求1所述的冷冻稀释液，其特征在于，所述甘油为灭菌后的甘油。3.根据权利要求1所述的冷冻稀释液，其特征在于，所述基础稀释液的pH值为6.8。4.权利要求1
‑...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵霞，木其尔，爱伦高娃，布仁巴雅尔，樊俊楠，贾军，吴铁成，乌仁图雅，郝治华，郭东昕，武玉平，乔俊仙，陈乐祥，钱家明，
申请(专利权)人：内蒙古自治区农牧业科学院，
类型：发明
国别省市：