高表达gstA基因质粒、其构建方法、含高表达gstA基因质粒的曲霉工程菌株及其构建方法与应用技术

本申请公开了一种高表达gstA基因质粒、其构建方法、含高表达gstA基因质粒的曲霉工程菌株及其构建方法与应用，属于生物工程领域。本申请高表达gstA基因质粒的构建方法包括：从曲霉菌株的基因组扩增gstA基因片段，并利用引物heigpd

【技术实现步骤摘要】
Vector，得到质粒pEASY
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Cre
‑
LoxP
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Hph；
[0014]利用引物Zero
‑
heigpd
‑
F/Zero
‑
Heigpd
‑
R从原始曲霉菌株基因组中PCR扩增获得3
‑
磷酸甘油脱氢酶基因启动子PgpdA，其中，所述PgpdA的核苷酸序列为SEQ ID NO.4所示；所述Zero
‑
heigpd
‑
F的核苷酸序列为SEQ ID NO.5所示；所述Zero
‑
Heigpd
‑
R的核苷酸序列为SEQ ID NO.6所示；
[0015]利用引物Zero
‑
up/L
‑
Zero
‑
R从所述质粒pEASY
‑
Cre
‑
LoxP
‑
Hph模板中PCR扩增获得载体zero
‑
cre
‑
loxP
‑...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种高表达gstA基因质粒的构建方法，其特征在于，所述方法包括：利用引物Zero
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GstA
‑
F/Gpd
‑
GstA
‑
R从原始曲霉菌株的基因组中PCR扩增获得gstA基因片段，其中，所述gstA基因的基因ID为ASPNIDRAFT2
_
1141004；所述Zero
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GstA
‑
F的核苷酸序列为SEQ ID NO.2所示；所述Gpd
‑
GstA
‑
R的核苷酸序列为SEQ ID NO.3所示；利用引物heigpd
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F/L
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Zero
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R对合成载体pEASY
‑
Cre
‑
LoxP
‑
gpd进行PCR扩增获得线性化质粒载体，其中，所述合成载体pEASY
‑
Cre
‑
LoxP
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gpd含有hph基因片段和启动子PgpdA；所述heigpd
‑
F的核苷酸序列为SEQ ID NO.9所示；利用克隆试剂盒将所述gstA基因片段与所述线性化质粒载体进行连接，并将所得产物转化至DH5α感受态细胞之后，接种于含有氨苄青霉素的LB培养基中培养，挑取单克隆并利用引物Zero
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GstA
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F/Heigpd
‑
seq
‑
F进行菌落PCR验证以及引物Hgpd
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seq
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F对菌落PCR验证正确的质粒进行测序，得到高表达gstA基因质粒，其中，所述Heigpd
‑
seq
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F的核苷酸序列为SEQ ID NO.10所示；所述Hgpd
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seq
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F的核苷酸序列为SEQ ID NO.11所示。2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述合成载体pEASY
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Cre
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LoxP
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gpd的构建方法包括：将元件loxP
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hph
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loxP的基因序列连接到载体pEASY
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BluntZeroCloning Vector，得到质粒pEASY
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Cre
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LoxP
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Hph；利用引物Zero
‑
heigpd
‑
F/Zero
‑
Heigpd
‑
R从原始曲霉菌株基因组中PCR扩增获得3
‑
磷酸甘油脱氢酶基因启动子PgpdA，其中，所述PgpdA的核苷酸序列为SEQ ID NO.4所示；所述Zero
‑
heigpd
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【专利技术属性】
技术研发人员：黄和，张婷婷，张驰，徐晴，薛锋，
申请(专利权)人：南京师范大学，
类型：发明
国别省市：