位点特异性基因修饰制造技术

提供了用于将感兴趣的转基因靶位点特异性插入受试者基因组的系统、组合物和方法。还提供了促进由反转录元件来源的逆转录酶(RT)位点特异性转基因插入介导的引发的逆转录(TPRT)的系统和方法。(TPRT)的系统和方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】位点特异性基因修饰
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求2021年1月14日提交的，名称为“使用RNA模板和配合的逆转录酶对真核生物基因组的位点特异性转基因添加(SITE
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SPECIFIC TRANSGENE ADDITION TO A EUKARYOTIC GENOME USING AN RNA TEMPLATE AND PARTNERED REVERSE TRANSCRIPTASE)”的第63/137,664号美国临时申请的优先权，该美国临时申请的内容通过引用以其整体并入本文。
[0003]参考序列表
[0004]本申请与电子格式的序列表一起提交。名称为SeqList.txt的序列表文件创建于2021年12月28日，大小为180293个字节。序列表的电子格式信息通过引用以其整体并入本文。
[0005]政府支持的声明
[0006]本专利技术是在国立卫生研究院(the National Institutes of Health)授予的授权号为GM130315和DP1HL156819的政府支持下完成的。本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种将转基因引入真核生物基因组的方法，其包括向受试者给予位点特异性转基因添加组合物，所述组合物包含RNA模板和配合的逆转录酶。2.权利要求1所述的方法，其中所述位点特异性转基因添加组合物包含修饰的R2反转录元件蛋白质，以支持使用直接引入的RNA模板将TPRT启动的转基因插入到人细胞rDNA中。3.权利要求1所述的方法，其中所述转基因是治疗活性基因或其治疗活性片段。4.权利要求1所述的方法，其中所述位点特异性转基因添加组合物包含含有TPRT
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感受态RT和/或链上产生切口的核酸内切酶活性的非LTR反转录元件蛋白质，当测定RT引物延伸和/或体外TPRT时，所述非LTR反转录元件蛋白质是有活性的。5.权利要求1所述的方法，其中所述位点特异性转基因添加组合物包含一个或多个用于RT
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介导的TPRT的3
’
模板模块，所述3
’
模板模块与配对的RT 3
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同源，或由天然同源物修饰，或来自相关反转录元件的系统发育调查和重建+/
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修饰，或通过在体外和在细胞中筛选3
’
和5
’
连接形成的选择性和/或效率和/或保真度来获得。6.权利要求1所述的方法，其中所述位点特异性转基因添加组合物包含一个或多个用于RT
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介导的TPRT的5
’
模板模块，所述5
’
模板模块与配对的RT 5
’
同源，或由天然同源物修饰，或来自相关反转录元件的系统发育调查和重建+/
‑
修饰，或由异源反转录元件5
’
区域修饰，或由天然的或设计的HDV RZ折叠修饰，或通过在体外和在细胞中筛选3
’
和5
’
连接形成的选择性和效率和保真度来获得。7.权利要求1所述的方法，其包括进行一种或多种模板末端添加，所述模板末端添加改善在体外和在细胞中3
’
和5
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连接形成的选择性和/或效率和/或保真度，包括但不限于在靶位点处或靶位点附近的(多个)rRNA匹配序列的5
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侧翼序列和3
’‑
侧翼序列，包括但不限于4至29个核苷酸的序列，其中所述添加不排除其他rRNA长度，其中功能性4
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20序列可包含在更长的长度内。8.权利要求1所述的方法，其包括进行一种或多种模板末端添加，所述模板末端添加改善细胞中位点特异性转基因插入的生物递送或稳定性或效率，包括但不限于3
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侧翼聚腺苷和/或5
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侧翼自切割核酶基序或保护引入的模板RNA免于降解的其他结构。9.权利要求1所述的方法，其包括进行一种或多种模板修饰，所述模板修饰改善递送或稳定性或靶向或由于相互作用的...

【专利技术属性】
技术研发人员：张筱竹，H，
申请(专利权)人：加利福尼亚大学董事会，
类型：发明
国别省市：