用于递送多种多核苷酸的载体系统及其用途技术方案

本公开文本涉及一种包含至少两种多核苷酸的载体系统，每种多核苷酸可包含编码大分子复合物的多肽组分的多核苷酸序列。所述大分子复合物在用所述多核苷酸转导的细胞中的组装可促进细胞的生长和/或存活。可促进细胞的生长和/或存活。可促进细胞的生长和/或存活。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于递送多种多核苷酸的载体系统及其用途
相关申请的交叉引用
[0001]本申请要求2020年11月20日提交的美国临时申请号63/116,611的优先权和权益。将以上提及的专利申请的内容通过引用以其整体并入本文。


[0002]本公开文本总体上涉及编码大分子复合物的组分的病毒载体系统、包含所述病毒载体系统的组合物及其使用方法。序列表
[0003]本申请含有序列表，所述序列表已经以ASCII格式经由EFS
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Web提交并且通过引用以其整体特此并入。在2021年11月17日创建的所述ASCII副本被命名为“UMOJ
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008
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01WO_SeqList_ST25.txt”，大小为47KB。

技术介绍

[0004]许多用于将多核苷酸递送到细胞中的载体系统对要递送的多核苷酸的尺寸具有上限。例如，AAV载体的包装限制约为约5kb。慢病毒载体的包装限制为约10kB。为了递送更大的基因，已经开发了各种技术。已知的方法通常依赖于细胞中多核苷酸的相互作用，例如，同源重组或反式剪接。例如，Tornabene,P.等人(2020)Human Gene Therapy31(47
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56)披露了使用多种AAV载体递送大基因。Zufferey,R.等人(1998)Journal of Virology 72；12(9873
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9880)披露了使用具有更大克隆能力的用于稳定转基因表达的自失活HIV
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1载体。Cockrell,A.S.和Kafri,T.(2007)Molecular Biotechnology 36(184
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204)披露了使用慢病毒载体用于非分裂细胞的转导和转基因动物的产生。
[0005]仍然存在对多核苷酸递送技术的未被满足的需求。

技术实现思路

[0006]本公开文本的一方面提供了一种载体系统，所述载体系统包含至少两种多核苷酸，每种多核苷酸包含编码大分子复合物的多肽组分的多核苷酸序列，其中所述大分子复合物在用所述至少两种多核苷酸转导的细胞中的组装促进细胞的生长和/或存活。
[0007]在一些实施方案中，所述载体系统包含作为多部分(multipartite)细胞表面受体的大分子复合物。
[0008]在一些实施方案中，所述载体系统包含含有两种所述多核苷酸的单一载体。
[0009]在一些实施方案中，所述载体系统包含作为单一慢病毒载体的单一载体。
[0010]在一些实施方案中，所述载体系统包含两种载体，每种载体包含一种所述多核苷酸。
[0011]在一些实施方案中，所述载体系统包含作为两种慢病毒载体的载体。
[0012]在一些实施方案中，所述大分子复合物的组装是由配体控制的。
[0013]在一些实施方案中，所述载体系统包含第一多核苷酸和第二多核苷酸，所述第一
多核苷酸包含编码所述大分子复合物的包含FKBP
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雷帕霉素复合物结合结构域(FRB结构域)或其功能变体的第一多肽组分的多核苷酸序列，所述第二多核苷酸包含编码所述大分子复合物的包含FK506结合蛋白结构域(FKBP)或其功能变体的第二多肽组分的多核苷酸序列；和/或其中所述配体是雷帕霉素。
[0014]在一些实施方案中，所述载体系统包含与SEQ ID NO:1具有至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少99％或100％同一性的FRB结构域多肽。
[0015]在一些实施方案中，所述载体系统包含与SEQ ID NO:2具有至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少99％或100％同一性的FRB结构域多肽。
[0016]在一些实施方案中，所述载体系统包含与SEQ ID NO:6具有至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少99％或100％同一性的FKBP多肽。
[0017]在一些实施方案中，所述大分子复合物的表达是在诱导型遗传系统或生物化学系统的控制下。
[0018]在一些实施方案中，所述载体系统中的每种多核苷酸与启动子可操作地连接。
[0019]在一些实施方案中，所述启动子是诱导型启动子。
[0020]在一些实施方案中，至少一种所述多核苷酸包含赋予对免疫抑制剂的耐药性的多核苷酸序列。
[0021]在一些实施方案中，赋予对免疫抑制剂的耐药性的多核苷酸序列编码结合雷帕霉素的多肽，其中任选地，所述多肽是FRB。
[0022]在一些实施方案中，至少一个多核苷酸序列能够转导T细胞、NK细胞或NKT细胞。
[0023]在一些实施方案中，至少一个多核苷酸序列能够在体内转导T细胞、NK细胞或NKT细胞。
[0024]在一些实施方案中，至少一个多核苷酸序列能够在体外转导T细胞、NK细胞或NKT细胞。
[0025]在一些实施方案中，选择性地选择已经用两种载体基因组转导的细胞。在一些实施方案中，用两种载体基因组转导促进转导的细胞的生长和/或存活。
[0026]在一些实施方案中，所述载体系统包含至少一种逆转录病毒颗粒，其中所述逆转录病毒颗粒包含一种或多种转导增强剂，其中所述转导增强剂选自T细胞激活受体、NK细胞激活受体和共刺激分子。
[0027]在一些实施方案中，所述一种或多种转导增强剂包含抗CD3scFv、CD86和CD137L中的一种或多种。
[0028]在一些实施方案中，所述第一载体包含编码以下的多核苷酸序列：(a)启动子；(b)FK506结合蛋白(FKBP)结构域或其部分(c)IL
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2受体跨膜结构域(d)白介素2受体亚基γ(IL2Rγ)结构域；和(e)第一嵌合抗原受体(CAR)。
[0029]在一些实施方案中，所述第二载体包含编码以下的多核苷酸序列：(a)启动子；(b)FKBP雷帕霉素结合(FRB)结构域或其部分
(c)IL
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2受体跨膜结构域(d)白介素2受体亚基β(IL2Rβ)结构域；和(e)第二CAR。
[0030]在一些实施方案中，所述FKBP结构域或其部分与FRB结构域或其部分在存在雷帕霉素的情况下异二聚化以促进细胞的生长和/或存活。
[0031]在载体系统的一些实施方案中，所述启动子是MND。
[0032]在一些实施方案中，所述MND启动子与SEQ ID NO:3具有至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少99％或100％同一性。
[0033]在一些实施方案中，所述IL2Rγ结构域多肽与SEQ ID NO:4具有至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少99％或100％同一性。
[0034]在一些实施方案中，所述IL2Rβ结构域多肽与SEQ ID NO:5具有至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少99％或100％同一性。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种载体系统，所述载体系统包含至少两种多核苷酸，每种多核苷酸包含编码大分子复合物的多肽组分的多核苷酸序列，其中所述大分子复合物在用所述至少两种多核苷酸转导的细胞中的组装促进细胞的生长和/或存活。2.根据权利要求2所述的载体系统，其中所述大分子复合物是多部分细胞表面受体。3.根据权利要求1或权利要求2所述的载体系统，其中所述载体系统包含含有两种所述多核苷酸的单一载体。4.根据权利要求3所述的载体系统，其中所述单一载体是单一慢病毒载体。5.根据权利要求1或权利要求2所述的载体系统，其中所述载体系统包含两种载体，每种载体包含一种所述多核苷酸。6.根据权利要求5所述的载体系统，其中所述载体是两种慢病毒载体。7.根据权利要求1
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6中任一项所述的载体系统，其中所述大分子复合物的组装是由配体控制的。8.根据权利要求7所述的载体系统，其中所述载体系统包含第一多核苷酸和第二多核苷酸，所述第一多核苷酸包含编码所述大分子复合物的包含FKBP
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雷帕霉素复合物结合结构域(FRB结构域)或其功能变体的第一多肽组分的多核苷酸序列，所述第二多核苷酸包含编码所述大分子复合物的包含FK506结合蛋白结构域(FKBP)或其功能变体的第二多肽组分的多核苷酸序列；和/或其中所述配体是雷帕霉素。9.根据权利要求8所述的载体系统，其中所述FRB结构域多肽与SEQ ID NO:1具有至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少99％或100％同一性。10.根据权利要求8所述的载体系统，其中所述FKBP多肽与SEQ ID NO:2具有至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少99％或100％同一性。11.根据权利要求1
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10中任一项所述的载体系统，其中所述大分子复合物的表达是在诱导型遗传系统或生物化学系统的控制下。12.根据权利要求1
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10中任一项所述的载体系统，其中每种多核苷酸与启动子可操作地连接。13.根据权利要求12所述的载体系统，其中所述启动子是诱导型启动子。14.根据权利要求1
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13中任一项所述的载体系统，其中至少一种所述多核苷酸包含赋予对免疫抑制剂的耐药性的多核苷酸序列。15.根据权利要求14所述的载体系统，其中赋予对免疫抑制剂的耐药性的所述多核苷酸序列编码结合雷帕霉素的多肽，其中任选地，所述多肽是FRB。16.根据权利要求1
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15中任一项所述的载体系统，其中所述至少一个多核苷酸序列能够转导T细胞、NK细胞或NKT细胞。17.根据权利要求1
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16中任一项所述的载体系统，其中所述至少一个多核苷酸序列能够在体内转导T细胞、NK细胞或NKT细胞。18...

【专利技术属性】
技术研发人员：A，
申请(专利权)人：优莫佳生物制药股份有限公司，
类型：发明
国别省市：