靶向降解KRAS的嵌合泛素连接酶及其制备方法和应用技术

本发明专利技术属于生物医药领域，公开了靶向降解KRAS的嵌合泛素连接酶及其制备方法和应用。该嵌合泛素连接酶包括KRAS结合结构域和E3泛素连接酶结合蛋白；KRAS结合结构域包括RAF1(52

【技术实现步骤摘要】
靶向降解KRAS的嵌合泛素连接酶及其制备方法和应用


[0001]本专利技术属于生物医药领域，具体涉及靶向降解KRAS的嵌合泛素连接酶及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]RAS是肿瘤中常见的突变基因。正常细胞中，RAS的激活处于细胞膜生长因子受体家族下游通路中。RAS蛋白是一种膜结合型的GTP/GDP结合蛋白(GTPase)，当其结合GTP时为活化状态，结合GDP时为失活状态。RAS异构体主要由三种基因编码：KRAS、NRAS和HRAS。KRAS是RAS家族中最主要的突变型，并且与22％的人类肿瘤相关，是人类三大致命性癌症，肺癌(17％)，结直肠癌(33％)和胰腺癌(61％)中高频突变基因。常见的KRAS突变主要发生在2号外显子中12、13、61和146等密码子上，其中发生在第12和13位点的突变占总突变数量的90％。
[0003]目前，对蛋白质活性的抑制主要是针对目标蛋白质的活性位点进行小分子抑制剂的开发，然而研究表明不包括KRAS蛋白在内，85％的蛋白质是“不可成药蛋白”，这类蛋白质因为结构松散易变、细胞内部其它小分子竞争结合能力强、活性位点容易发生突变等原因使得很难对其进行抑制剂的开发。即使目前有开发出部分针对KRAS的小分子抑制剂，但这些抑制剂与KRAS的结合面积太小，KRAS稍有突变，构象改变，就会影响小分子抑制剂的结合。
[0004]此外，在蛋白质水平降解蛋白质在细胞中的积累也是减弱蛋白质表达的重要策略，其中蛋白质降解是减少其在细胞中积累的重要方法。主流的蛋白质靶向降解技术是通过构建嵌合分子将目标蛋白和E3连接酶连接在一起，进而促进目标蛋白的降解，典型代表技术为PROTAC(蛋白降解靶向嵌合体)。据报道，目前已有多种蛋白质能够通过PROTAC技术被迅速降解。然而，该技术中一种PROTAC只能降解一种突变型KRAS，并不能降解多种突变型KRAS，不具有普遍适用性。

技术实现思路

[0005]本专利技术旨在至少解决上述现有技术中存在的技术问题之一。为此，本专利技术提出一种靶向降解KRAS的嵌合泛素连接酶，能够降解不同的突变型KRAS。
[0006]本专利技术还提出一种核酸分子。
[0007]本专利技术还提出一种载体。
[0008]本专利技术还提出一种宿主细胞。
[0009]本专利技术还提出所述靶向降解KRAS的嵌合泛素连接酶的制备方法。
[0010]本专利技术还提出所述靶向降解KRAS的嵌合泛素连接酶在制备产品中的应用。
[0011]根据本专利技术的一个方面，提出了一种靶向降解KRAS的嵌合泛素连接酶，包括KRAS结合结构域和E3泛素连接酶结合蛋白；所述KRAS结合结构域包括RAF1(52
‑
188)、ARAF、PIP5K1A、RASSF2、APP、KRAS、RAF1中的至少一种；
[0012]所述RAF1(52
‑
188)的氨基酸序列为：
[0013]SEQ ID NO:1：ASSKTSNTIRVFLPNKQRTVVNVRNGMSLHDCLMKALKVRGLQ PECCAVFRLLHEHKGKKARLDWNTDAASLIGEELQVDFLDHVPLTTHNFARKTFLKL AFCDICQKFLLNGFRCQTCGYKFHEHCSTKVPTMCVDW；或
[0014]SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列经一个或多个氨基酸的取代、缺失或添加修饰后，且功能相同或相似的氨基酸序列；
[0015]所述ARAF的氨基酸序列为：
[0016]SEQ ID NO:2：ASEPPRGPPANGAEPSRAVGTVKVYLPNKQRTVVTVRDGMSVY DSLDKALKVRGLNQDCCVVYRLIKGRKTVTAWDTAIAPLDGEELIVEVLEDVPLTMHNFVRKTFFSLAFCDFCLKFLFHGFRCQTCGYKFHQHCSSKVPTVCVDMSTNRQQPSRFYHSVQDLSGGSRQHEAPSNRPLNELLTPQGPSPRTQHCDPEHFPFPAPANAPLQRIRSTSTPNVHMVSTTAPMDSNLIQLTGQSFSTDAAGSRGGSDGTPRGSPSPASVSSGRKSPHSKSPAEQRERKSLADDKKKVKNLGYRDSGYYWEVPPSEVQLLKRIGTGSFGTVFRGRWHGDVAVKVLKVSQPTAEQAQAFKNEMQVLRKTRHVNILLFMGFMTRPGFAIITQWCEGSSLYHHLHVADTRFDMVQLIDVARQTAQGMDYLHAKNIIHRDLKSNNIFLHEGLTVKIGDFGLATVKTRWSGAQPLEQPSGSVLWMAAEVIRMQDPNPYSFQSDVYAYGVVLYELMTGSLPYSHIGCRDQIIFMVGRGYLSPDLSKISSNCPKAMRRLLSDCLKFQREERPLFPQILATIELLQRSLPKIERSASEPSLHRTQADELPACLLSAARLVPG；或
[0017]SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列经一个或多个氨基酸的取代、缺失或添加修饰后，且功能相同或相似的氨基酸序列；
[0018]所述PIP5K1A的氨基酸序列为：
[0019]SEQ ID NO:3：ASASASSGPSSSVGFSSFDPAVPSCTLSSAASGIKRPMASEVLEAR QDSYISLVPYASGMPIKKIGHRSVDSSGETTYKKTTSSALKGAIQLGITHTVGSLSTKPERDVLMQDFYVVESIFFPSEGSNLTPAHHYNDFRFKTYAPVAFRYFRELFGIRPDDYLYSLCSEPLIELCSSGASGSLFYVSSDDEFIIKTVQHKEAEFLQKLLPGYYMNLNQNPRTLLPKFYGLYCVQAGGKNIRIVVMNNLLPRSVKMHIKYDLKGSTYKRRASQKEREKPLPTFKDLDFLQDIPDGLFLDADMYNALCKTLQRDCLVLQSFKIMDYSLLMSIHNIDHAQREPLSSETQYSVDTRRPAPQKALYSTAMESIQGEARRGGTMETDDHMGGIPARNSKGERLLLYIGIIDILQSYRFVKKLEHSWKALVHDGDTVSVHRPGFYAERFQRFMCNTVFKKIPLKPSPSKKFRSGSSFSRRAGSSGNSCITYQPSVSGEHKAQVTTKAEVEPGVHLGRPDVLPQTPPLEEISEGSPIPDPSFSPLVGETLQMLTTSTTLEKLEVAESEFTHG；或
[0020]SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列经一个或多个氨基酸的取代、缺失或添加修饰后，且功能相同或相似的氨基酸序列；
[0021]所述RASSF2的氨基酸序列为：
[0022]SEQ ID NO:4：ASDYSHQTSLVPCGQDKYISKNELLLHLKTYNLYYEGQNLQL本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种靶向降解KRAS的嵌合泛素连接酶，其特征在于，包括KRAS结合结构域和E3泛素连接酶结合蛋白；所述KRAS结合结构域包括RAF1(52
‑
188)、ARAF、PIP5K1A、RASSF2、APP、KRAS、RAF1中的至少一种；所述RAF1(52
‑
188)的氨基酸序列为：SEQ ID NO:1；或SEQ ID NO:1所示的氨基酸经一个或多个氨基酸的取代、缺失或添加修饰后，且功能相同或相似的氨基酸序列；所述ARAF的氨基酸序列为：SEQ ID NO:2；或SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列经一个或多个氨基酸的取代、缺失或添加修饰后，且功能相同或相似的氨基酸序列；所述PIP5K1A的氨基酸序列为：SEQ ID NO:3；或SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列经一个或多个氨基酸的取代、缺失或添加修饰后，且功能相同或相似的氨基酸序列；所述RASSF2的氨基酸序列为：SEQ ID NO:4；或SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列经一个或多个氨基酸的取代、缺失或添加修饰后，且功能相同或相似的氨基酸序列；所述APP的氨基酸序列为：SEQ ID NO:5；或SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列经一个或多个氨基酸的取代、缺失或添加修饰后，且功能相同或相似的氨基酸序列；所述KRAS的氨基酸序列为：SEQ ID NO:6；或SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列经一个或多个氨基酸的取代、缺失或添加修饰后，且功能相同或相似的氨基酸序列；所述RAF1的氨基酸序列为：SEQ ID NO:7；或SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列经一个或多个氨基酸的取代、缺失或添加修饰后，且功能相同或相似的氨基酸序列。2.根据权利要求1所述的嵌合泛素连接酶，其特征在于，所述E3泛素连接酶结合蛋白的氨基酸序列为：SEQ ID NO:8；或SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列经一个或多个氨基酸的取代、缺失或添加修饰后，且功能相同或相似的氨基酸序列。3.根据权利要求2所述的嵌合泛素连接酶，其特征在于，所述嵌合泛素连接酶的氨基酸序列为：a)SEQ ID NO:11：...

【专利技术属性】
技术研发人员：蒋兴宇，李轩宇，李家安，
申请(专利权)人：南方科技大学，
类型：发明
国别省市：