与绵羊繁殖力相关的分子标记、引物组及其应用制造技术

本发明专利技术提供了一种绵羊繁殖力相关的分子标记、引物组及其应用，本发明专利技术的分子标记位于位于皮山红羊的第5号染色体上的GDF9基因中的G1、G4位点，该位点为T/C多态性位点，分别是CC、CT和TT。旨在为提高绵羊高繁的遗传改良方面提供理论基础，加快培育出高繁殖力的优质肉羊新品种，缩短培育进程。缩短培育进程。缩短培育进程。

【技术实现步骤摘要】
与绵羊繁殖力相关的分子标记、引物组及其应用


[0001]本专利技术涉及绵羊繁殖鉴定、育种领域，具体而言，涉及一种与绵羊繁殖性状相关的分子标记、特异性引物及应用。

技术介绍

[0002]中国是养羊大国之一，羊肉营养丰富，容易消化，具有蛋白质含量高、胆固醇低等特点，深受消费者喜爱。皮山红羊是新疆地区新发现的绵羊品种，其性情温顺，耐粗饲，能很好地适应当地生态环境，高繁殖率是其养殖优势。生长分化因子9(growth differentiation factor 9，GDF9)即GDF9基因，又称FecG，定位于绵羊的第5常染色体，在卵泡发育中发挥重要作用，该基因由2个外显子组成，中间被一个长度为1126bp的内含子分隔开来，编码456个氨基酸，其活性成熟蛋白由135个氨基酸残基组成，作为高繁殖力候选基因，其会显著影响不同绵羊品种的排卵率或产羔数。
[0003]但是，目前还尚未有任何报道是涉及多态性的具体位点的与绵羊繁殖性状相关的分子标记。
[0004]鉴于以上原因，特提出本专利技术。

技术实现思路

[0005]本专利技术的第一目的在于提供一种与绵羊繁殖力相关的分子标记、引物组及应用，通过对GDF9基因进行测序分析，探讨其不同基因型与绵羊繁殖性状的关联性，旨在为提高绵羊高繁的遗传改良方面提供理论基础，加快培育出高繁殖力的优质肉羊新品种，缩短培育进程。
[0006]本专利技术的第二目的在于提供一种包括上述特异性引物组合的试剂盒，该试剂盒使用方便，可以通过相应的检测方法提炼出试剂。
[0007]为了实现本专利技术的上述目的，特采用以下技术方案：
[0008]本专利技术提供了一种与绵羊繁殖力相关的分子标记，所述分子标记位于皮山红羊的第5号染色体上的GDF9基因中的G1、G4位点，该位点为T/C多态性位点，分别是CC、TC和TT。
[0009]本专利技术的分子标记从绵羊GDF9基因扩增后获得，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。通过扩增绵羊GDF9基因的DNA序列并测序，筛选GDF9基因的多态性位点，分析不同的基因型与绵羊繁殖性状相关性，并建立含多态性位点的分子标记检测方法，并可将该分子标记应用于培育新品系肉羊工作中。绵羊GDF9基因有8个突变位点，分别为：G1、G4、FecGE、FecGA、FecGV、FecGH、FecGF、FecGT，其中仅有G1、G4、FecGA三个位点在皮山红羊中存在多态性，其余位点均为纯合型，G1、G4位点在皮山红羊中均存在三种基因型，分别是CC、CT和TT；FecGA位点在皮山红羊中点存在CC、CT两种基因型。在NCBI上公布的绵羊GDF9基因mRNA序列，给序列基因号为：NM_001142888.2，序列如SEQ ID NO.1所示。
[0010]其中，SEQ ID NO.1:
[0011][0012][0013]本专利技术还提供了用于检测上述分子标记的特异性引物组，由第一引物对以及第二引物对构成，每个引物对由上游引物、下游引物以及延伸引物组成，第一引物对中，所述上游引物具有SEQ ID No.2所示碱基序列，所述下游引物具有SEQ ID No.3所示碱基序列，所述延伸引物具有SEQ ID No.4所示碱基序列，第二引物对中，所述上游引物具有SEQ ID No.5所示碱基序列，所述下游引物具有SEQ ID No.6所示碱基序列，所述延伸引物具有SEQ ID No.7所示碱基序列。
[0014]其核苷酸序列为：
[0015]G1：
[0016]SEQ ID NO.2:ACGTTGGATGAGGTTCTGTATGATGGGCAC
[0017]SEQ ID NO.3:ACGTTGGATGAGCGTATGCCTTATAGAGCC
[0018]SEQ ID NO.4:TTTACAGATGACAGAGCTTTGC
[0019]G4：
[0020]SEQ ID NO.5:ACGTTGGATGATGTTAAACAGGCTGTCCCG
[0021]SEQ ID NO.6:ACGTTGGATGCCCACAAGAGGAATATTCAC
[0022]SEQ ID NO.7:CCGCTGCAGCTGGTCTT
[0023]通常说来，每增加一个核苷酸引物特异性会提高4倍，这样，大多数应用的最短引物长度为18个核苷酸。引物长度的上限并不很重要，主要与反应效率有关。
[0024]一般引物的序列中，G+C含量一般为40％
‑
60％，一对引物的GC含量和Tm值应该协调。本专利技术的引物组合中的引物G+C含量均控制在适宜的范围内，且碱基分布随机，因而具有适中的解链温度，便于扩增。
[0025]总之，本专利技术的引物组合特异性好，扩增效率高，可以很好的应用于检测与绵羊繁
殖性状相关的分子标记。通过过利用上述的引物组对绵羊的基因组DNA中进行扩增和检测，确定待测样品的GDF9基因的基因型，从而可以从中选育出产多羔的绵羊品种。
[0026]本专利技术还提供了一种筛选多产的绵羊的方法，具体包括如下步骤：
[0027]提取待检样本的DNA作为模板，用引物组合对绵羊GDF9基因进行PCR扩增，扩增反应结束后将PCR扩增产物进行分析，判断扩增产物中的G1、G4位点的具体基因型，选择基因型为TC、TT的个体作为种羊进行繁殖。TC、TT型产羔数均极显著高于CC型，说明G1、G4位点适用于皮山红羊群。
[0028]优选地，上述筛选多产的绵羊方法中，PCR扩增反应程序为：94℃预变性120s，94℃变性20s，56℃退火30s，72℃延伸60s，48个循环，72℃延伸180s。
[0029]随着反应的逐渐进行，酶会逐渐失活，dNTP等原料会逐渐消耗掉，此外有一些非特异产物的扩增也会相应增加。因此虽然随着反应循环数的增加，产物会增多，但循环次数依然不宜过多，因而本专利技术限定为48个循环。
[0030]本专利技术还包含有包括上述引物组合的的试剂盒，该试剂盒在绵羊群体多羔性状的筛选方面具有很好的应用。
[0031]总之，本专利技术通过对对皮山红羊的GDF9基因进行PCR扩增和测序，发现在扩增片段的G1和G4位点存在C/T多态性，并通过检测376只皮山红羊多态性和建立的一般线性模型，确定了与绵羊繁殖性状相关的分子标记，该分子标记可以用于培育多产的绵羊，为绵羊繁殖性状的遗传改良提供了有效的基因工程手段，具有重大的实际应用价值。
附图说明
[0032]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，以下将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。
[0033]图1为本专利技术中用于作为分子标记的绵羊GDF9基因片段的凝胶电泳图。
[0034]图2为本专利技术中绵羊GDF9基因G1突变位点SNP分型结果。
[0035]图3为本专利技术中绵羊GDF9基因G4突变位点SNP分型结果。
具体实施方式
[0036]下面将结合实施例对本专利技术的实施方案进行详细描本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种与绵羊繁殖力相关的分子标记，其特征在于，所述分子标记位于皮山红羊的第5号染色体上的GDF9基因中的G1、G4位点，该位点为T/C多态性位点，分别是CC、TC和TT。2.一种用于检测所述权利要求1的分子标记的特异性引物组，其特征在于，由第一引物对以及第二引物对构成，每个引物对由上游引物、下游引物以及延伸引物组成，第一引物对中，所述上游引物具有SEQ ID No.2所示碱基序列，所述下游引物具有SEQ ID No.3所示碱基序列，所述延伸引物具有SEQ ID No.4所示碱基序列，第二引物对中，所述上游引物具有SEQ ID No.5所示碱基序列，所述下游引物具有SEQ ID No.6所示碱基序列，所述延伸引物具有SEQ ID No.7所示碱基序列。3.一...

【专利技术属性】
技术研发人员：依明，
申请(专利权)人：新疆农业大学，
类型：发明
国别省市：