一种快速测定食品中低聚乳果糖含量的方法技术

一种快速测定食品中低聚乳果糖含量的方法，配制一定梯度浓度的低聚乳果糖标准液；在薄层板上采用条带点样，条带长１．５～３ｃｍ，点样量３～６μＬ，在层析缸中２０～４０℃展开；取出薄层板，吹干，喷显色剂，８０～１００℃烘箱中显色７～１５ｍｉｎ，自然冷却，在显色区域，取１．５ｃｍ×４ｃｍ的条带面积，收集于离心管中，加入２～４ｍＬ水摇匀超声１０～２０ｍｉｎ，３０００～５０００ｒ／ｍｉｎ离心５～１０ｍｉｎ；取１～２ｍＬ上清液于具塞试管中，加１～２ｍＬ的５％苯酚溶液，摇匀，迅速加３～５ｍＬ　Ｈ↓［２］ＳＯ↓［４］，摇匀，沸水浴３～５ｍｉｎ，取出，冷却至室温，４９０ｎｍ处测定吸光度；绘制出标准曲线；将食品样品前处理，然后按前步骤操作，通过标准曲线计算出样品中的低聚乳果糖的含量，本方法简便、快速、价格低廉，仪器要求低；检测准确，重复性好。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及，特别涉及髙含量寡糖半 成品或成品中低聚乳果糖的薄层色谱检测方法。
技术介绍
低聚乳果糖(La"os"erase， O-jff-D-Ga/flc'o/^mwos^Hl—^-O-cc-D-g/MCopjrflwosj/-(l42)-/ -"-/r""o/"mw<w/V/e)，是一种由三个单糖组成的功能性低聚糖。 一般以乳糖和 蔗糖为原料，经P-呋喃果糖苷酶作用下合成。由于低聚乳'果糖难以在人和动物肠道吸 收、热量低，能显著促进肠道双歧杆菌、乳酸杆菌等益生菌的增殖，具有良好的保健 作用，是一种极具开发价值的功能性食品添加剂，有着广阔的应用前景。目前，低聚乳果糖的检测方法主要有髙效液相色谱法(配折光示差检测器、蒸发 光检测器或质谱)和薄层色谱法(7%/"-/炒"d/wm^^m/;A乂 7XC)。虽然高效液相色 谱法检测准确，但是仪器昂贵，费用较高，不利于国内广大基层检测部门仪器落后、 操作人员素质普遍偏低的环境下推广，对于目前大多数国内食品企业生产检测不太现 实。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种操作简单的检测食品中低聚乳果糖的方法。 为实现上述目的，本专利技术釆用如下技术方案(1) 配制一定梯度浓度的低聚乳果糖标准液；(2) 将低聚乳果糖标准液在薄层板上采用条带点样，条带的长度为1.5~3cm， 点样量为3~6jiL，在层析缸中20~40匸恒温展开；(3) 展开剂展开后取出薄层板，吹干，喷上显色剂，置于80~100"烘箱中显色 7~15min，自然冷却后取出显色板，在低聚乳果糖的显色区域，取1. 5cm x 4cm的条带 面积，收集于离心管中，加入2 4mL水摇匀超声10 20min后取出，3000~ 5000r/min 离心5-10min,取上清液。所述层析缸中展开剂是正丁醇冰乙酸水=8: 3-4: l-2， 显色剂为苯胺-二苯胺-磷酸，所述薄层板为硅胶薄层板(Si F250)。(4) 取l 2mL的上述上清液于具塞试管中，加1~24的5%苯酚溶液，摇勾， 迅速加3~5mLH2S04,摇句，沸水浴3 5min，取出，冷却至室温，在490nm处测定吸 光度。(5) 根据低聚乳果糖标准液吸光度和浓度绘制出标准曲线。(6) 将食品样品前处理，去除蛋白质、脂肪、淀粉或其他多糖类的物质，然后按 (2) - (4)的步骤进行操作，通过标准曲线计算出样品中的低聚乳果糖的含量。.本专利技术所述的检测方法，适用于各类食品中低聚乳果糖的薄层色谱检测。食品的 前处理，可根据GB/T 5009. 7-2003所述的方法进行乳类、乳制品及含蛋白质的冷食类称取约2.5()8- 5.00g固体试样(吸取25.00mL~50. OOmL液体试样)，置于250 mL容量瓶中，加50mL水，慢慢加入4mL乙酸锌溶 液及5mL亚铁氰化钾溶液，加水至刻度，混匀，沉淀，静置30min,用干燥滤纸过滤， 滤液备用。汽水饮料吸取100.0mL试样，置于蒸发皿中，用氢氧化钠(40g/L)溶液中和至 中性，再水洛蒸发至原体积的四分之一后，移入250迈L容量瓶中，加水至刻度。含大量淀粉的食品，称取10. OOg ~ 20. OOg试样置于250mL容量瓶中，加水200mL， 在451C水浴中加热lh，并时时振摇。冷后加水至刻度，混匀，静置，沉淀。吸取200mL 上清液于另一 250mL容量瓶中，以下按乳类、乳制品及含蛋白质的冷食类中自"慢慢 加入5mL乙酸锌溶液……"起依法操作。汽水等含有二氧化碳的饮料吸取100.0mL试样置于蒸发皿中，在水洛上除去二 氧化碳后，移入250mL容量瓶中，并用水洗涤蒸发皿，洗液并入容量瓶中，再加水至 刻度，混匀后备用。含脂肪比较多的食品利用索氏提取法将其中的脂肪去除。本专利技术所述的检测方法，也适用于酶促反应生产过程中低聚乳果糖含量的检测。 其过程是将生产制造过程中含低聚乳果糖的半成品稀释2 ~ 50倍；然后按上述(2 ) ~ (4)的步骤处理。本专利技术用于食品或低聚乳果糖的薄层检测方法的优点是简便、快速、价格低廉， 对仪器设备要求不高；样品检测准确，重复性好；克服了不利于在国内广大企业或基 层检测部门仪器落后，操作人员素质普遍偏低的环境下推广等不足，具有良好的使用 前景。 附图说明附图1为本专利技术根据低聚乳果糖标准液吸光度和浓度绘制出标准曲线。附图2为本专利技术检测汽水饮料中低聚乳果糖含量的一个实施例的薄层色谱图。图 中标记l为葡萄糖、2为果糖、3为蔗糖、4为乳糖、5为低聚乳果糖。附图3为本专利技术检测饼干中低聚乳果糖含量的一个实施例的薄层色谱图。图中标 记1为葡萄糖、2为果糖、3为蔗糖、4为乳糖、5为低聚乳果糖。附图.4为本专利技术检测酶促反应生产的半成品中低聚乳果糖含量的一个实施例的薄 层色谱图。图中标记l为葡萄糖、2为果糖、3为蔗糖、4为乳糖、5为低聚乳果糖，6、 7、 8分别为标准对照品葡萄糖、果糖、低聚乳果糖. 具体实施例方式实施例1。(1 )吸取100. OmL汽水饮料置于蒸发皿中，在水洛上除去二氧化碳后，移入250mL 容量瓶中，并用水洗涤蒸发皿，洗液并入容量瓶中，再加水至刻度，混匈后备用；(2) 将上述液体吸取5pL在所述薄层板上点样，点样釆用条带点样，条带的长度为3cm， 在所述展开剂中展开，将点样板置于层析缸中，25"C恒温；(3)待展开后取出吹干， 喷上所述显色剂，置于85lC烘箱中显色10min，自然冷却后取出显色板，在低聚糖的显色区域，取1.5cmx4cm的斑点条带，收集于离心管中，加入3mL水摇句超声 20min后取出，4800r/min离心10min,取上清液；(4 )取2mL的上述上清液于具塞试 管中，加l迈L的5。/。苯酚溶液，摇勾，迅速加5迈LH2S04,摇句，沸水浴3min，取出， 冷却至室温，在490nm处测定吸光度，根据标准曲线来计算饼干中低聚乳果糖的含量, 汽水饮料中低聚乳果糖的含量为3. 3%。汽水饮料中低聚乳果糖薄层色谱图如附图2所示。实施例2。U)称取50g饼干粉末于索氏提取器中，用索氏提取将其中的脂肪去除，萃取剂 为石油醚,提取温度为80X:;(2)将去除脂肪的饼干残渣置于250mL容量瓶中，加200迈L 水，在45X:水浴中加热lh,并时时振摇。冷却后加水至刻度，混匀，静置。吸取200mL 上清液于另一 250mL容量瓶中，慢慢加入5mL乙酸锌溶液及5mL亚铁氟化钾溶液，加 水至刻度，混匀，沉淀，静置30min，用干燥滤纸过滤，弃去初滤液，滤液备用；(3) 将上述滤液吸取5jiL在所述薄层板上点样，点样釆用条带点样，条带的长度为3c迈， 在所述展开剂中展开，将点样板置于层析缸中，251C恒温；(4)待展开后取出吹干， 喷上所述显色剂，置于851C烘箱中显色10min，自然冷却后取出显色板，在低聚乳果 塘的显色区域，取1.5cmx4cm的斑点条带，收集于离心管中，'加入3mL水摇匀超声 20min后取出，4500r/min离心10min，取上清液；(5 )取2mL的上述上清液于具塞试 管中，加lmL的5。/。苯酴溶液，摇勾，迅速加5mL H2S04，摇勾，沸水浴3min,取出， 冷却至室温，在490nm处测定吸光度，根据标准曲线来计算饼干中低聚乳果糖的含量， 饼干本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种快速测定食品中低聚乳果糖含量的方法，其特征是：　（１）配制一定梯度浓度的低聚乳果糖标准液；　（２）将低聚乳果糖标准液在薄层板上采用条带点样，条带的长度为１．５～３ｃｍ，点样量为３～６μＬ，在层析缸中２０～４０℃恒温展开；　 　（３）展开剂展开后取出薄层板，吹干，喷上显色剂，置于８０～１００℃烘箱中显色７～１５ｍｉｎ，自然冷却后取出显色板，在低聚乳果糖的显色区域，取１．５ｃｍ×４ｃｍ的条带面积，收集于离心管中，加入２～４ｍＬ水摇匀超声１０～２０ｍｉｎ后取出，３ ０００～５０００ｒ／ｍｉｎ离心５～１０ｍｉｎ，取上清液；所述层析缸中展开剂是正丁醇∶冰乙酸∶水＝８∶３－４∶１－２，显色剂为苯胺－二苯胺－磷酸，所述薄层板为硅胶薄层板；　（４）取１～２ｍＬ的上述上清液于具塞试管中，加１～２ｍＬ的５％苯 酚溶液，摇匀，迅速加３～５ｍＬ　Ｈ↓［２］ＳＯ↓［４］，摇匀，沸水浴３～５ｍｉｎ，取出，冷却至室温，在４９０ｎｍ处测定吸光度；　（５）根据低聚乳果糖标准液吸光度和浓度绘制出标准曲线；　（６）将食品样品前处理，去除蛋白质、脂肪、淀 粉或其他多糖类的物质，然后按（２）－（４）的步骤进行操作，通过标准曲线计算出样品中的低聚乳果糖的含量。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：印遇龙，阮征，廖春龙，邓泽元，尤娅利，代志凯，
申请(专利权)人：南昌大学，
类型：发明
国别省市：36[中国|江西]