一种铁甲草一步法组织培养方法技术

本发明专利技术公开了一种铁甲草一步法组织培养方法。本发明专利技术方法包括以下步骤：S1.取发芽后生长了20天的铁甲草无菌苗1.0

【技术实现步骤摘要】
一种铁甲草一步法组织培养方法


[0001]本专利技术属于植物细胞工程
，具体涉及一种铁甲草一步法组织培养方法。

技术介绍

[0002]铁甲草分布于福建、台湾、湖北、湖南、广东、广西等地，也分布于日本、缅甸、越南及印度北部，在梅州等客家地区较为常用。铁甲草作为观叶植物露天栽培。幼叶含有丰富的维生素，用开水焯一下，幼叶可食用，是老百姓餐桌上的美味山野菜。炒食、做馅食用，铁甲草的幼叶，可以盐渍、速冻保鲜，是山野菜中的极品。又是观赏的绿化植物，具清雅、幽静之美，是庭院、公园、机关等绿化的优良品种。铁甲草集食用、药用、观赏价值于一身，是一种极具开发潜力的植物。
[0003]铁甲草为药食同源名贵中药材，其性凉、味甘、微苦，有护肝明目之功效。近几年，国内外对其进行了系统的研究，获得了包括齐墩果酸在内的多个活性成分。由于人们生活质量的不断提高，肥胖以及脂肪肝等疾病的发病率也不断的在上升。近几年来，随着对其功效及化学成分的深入了解，对其活性成分的研究也日益深入。铁甲草有很强的抗氧化活性，醋酸乙酯提取物中有很高的黄酮、酚类物质，具有很好的DPPH(1,1
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二苯基
‑2‑
三硝基苯肼)清除能力，而且对油脂过氧化值有很大的影响。用乙酸乙酯可以选择性地分离富集铁甲草醇提溶物中的抗氧化物质，因此它有一定的实用价值。除此之外，铁甲草提取物具有抗氧化作用，它与各种多糖成分混合，可作为以山茶油为基质油的护肤霜，在化妆品市场占有重要地位。除此之外，相关学者还将铁甲草的水煎液用于乙肝病毒性肝炎、酒精性肝炎和自身免疫性肝炎的研究
[0004]如今，大多数的草药都是人工种植，但是，由于土地等方面的限制，很少有可以种植草药的地方。另外，这种植物的种子坚硬，在自然条件下萌发缓慢，必须用热水泡一泡，或者是得用沙纸擦干，费时费力。自21世纪初起，组织栽培技术已经广泛应用在国内，同时其可以有效地解放土地资源，使植物生长受外界环境限制的因素减少，运用细胞全能性原则进行栽培，既能保持母株优良的性能，又能降低成本。

技术实现思路

[0005]本专利技术目的是针对现有诱导铁甲草外植体形成不定芽的过程中存在的不定芽诱导率低和不定芽再生时间长等问题，而提供一种高效诱导铁甲草外植体产生不定芽的一步法组织培养方法。
[0006]本专利技术为了提高诱导铁甲草外植体不定芽形成的质量和效率，采用高浓度激素溶液(NAA、6
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BA、TDZ溶液)对铁甲草茎段外植体进行短期浸泡处理，然后将处理后的茎段外植体接种至MS培养基上进行无菌培养，可以显著提高不定芽的诱导效率和缩短培养周期，并且可以直接获得生根的再生植株。
[0007]本专利技术的一种铁甲草一步法组织培养方法，包括以下步骤：
[0008]S1.取发芽后生长了20天的铁甲草无菌苗1.0
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1.5cm长度的茎段为外植体，将外植
体浸泡在激素溶液中20
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60min，然后取出外植体，用无菌吸水纸除去外植体表面残留的激素溶液；
[0009]S2.将外植体茎段轴向水平接种至MS培养基上培养35
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45d，获得生根的铁甲草再生苗，然后驯化移栽。
[0010]优选，所述的步骤S1中的将外植体浸泡在激素溶液中20
‑
60min，是将外植体在浓度为30mg/L的NAA溶液中浸泡30min。
[0011]优选，所述的步骤S1中的将外植体浸泡在激素溶液中20
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60min，是将外植体在浓度为20mg/L的6
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BA溶液中浸泡20min。
[0012]优选，所述的步骤S1中的将外植体浸泡在激素溶液中20
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60min，是将外植体在浓度为0.25mg/L的TDZ溶液中浸泡40min。
[0013]优选，所述的步骤S2为：将外植体茎段轴向水平接种至MS培养基上培养40d，获得生根的铁甲草再生苗，然后驯化移栽。
[0014]所述的铁甲草无菌苗是按照如下方法制备获得的：取铁甲草种子，用80℃的水将种子进行恒温浸泡10min，然后用体积分数75％的乙醇水溶液浸泡30
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45s，然后使用质量分数2.5％的次氯酸钠(NaClO)水溶液浸泡10
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15min，期间不断震荡，用灭菌蒸馏水冲洗3
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4次，每次冲洗1min，最后，接种于MS培养基培养。
[0015]优选，所述的MS培养基：含有16.5g/L硝酸铵、19g/L硝酸钾、1.7g/L磷酸二氢钾、3.7g/L七水硫酸镁、4.4g/L二水氯化钙、16.9mg/L一水硫酸锰、8.6mg/L七水硫酸锌、6.2mg/L硼酸、0.83mg/L碘化钾、0.25mg/L二水硫酸钼二钠、0.025mg/L五水硫酸铜、0.025mg/L六水氯化钴、37.3mg/L二水乙二胺四乙酸钠、27.8mg/L七水硫酸亚铁、2mg/L甘氨酸、0.1mg/L盐酸硫胺素、0.5mg/L盐酸吡哆醇、0.5mg/L烟酸、100mg/L肌醇、30g/L蔗糖和7g/L琼脂，余量为水。
[0016]本专利技术的有益效果：
[0017]本专利技术主要是改变了传统诱导铁甲草外植体形成不定芽的方法，即利用高浓度激素溶液对铁甲草茎段外植体进行短期浸泡处理，由此促使铁甲草茎段外植体以更高的效率脱分化形成更多的不定芽，是一种可以快速的获得铁甲草的不定芽的方法。
[0018]利用本专利技术方法，铁甲草茎段外植体在MS培养基上培养40天，就能获得生根的完整植株，仅需一步培养就完成了组织培养过程；不需要常规方法中的专门的伸长培养(通常需要20天)和生根培养(通常需要30天)的培养基和培养步骤。本专利技术方法不仅节约了培养基成本，简化了操作和减少了人工成本，时间上，本专利技术方法比常规方法可以节约50
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60天。
[0019]本专利技术为铁甲草育种建立了一套高效的诱导铁甲草外植体形成不定芽的一步法组织培养方法，该方法为铁甲草生物技术育种奠定了良好的基础，具有良好的应用前景。
附图说明
[0020]图1是利用高浓度激素浸泡处理铁架草外植体所获得的不定芽诱导效果；图A和图B：将铁甲草外植体于30mg/L NAA溶液中浸泡30min后接种至MS培养基上培养40天后的效果；图C和图D：将铁甲草外植体于20mg/L 6
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BA溶液中浸泡20min后接种至MS培养基上培养40天后的效果；图E和图F：将铁甲草外植体于0.25mg/L TDZ溶液中浸泡40min后接种至MS培养基上培养40天后的效果(bars＝1.5cm)。
具体实施方式
[0021]以下实施例是对本专利技术的进一步说明，而不是对本专利技术的限制。
[0022]实施例1
[0023](1)制备用于处理铁甲草外植体的激素溶液
[0024]准确称取一定量的6
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苄氨基嘌呤(6
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BA，简称BA)、萘乙酸(NA本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种铁甲草一步法组织培养方法，其特征在于，包括以下步骤：S1.取发芽后生长了20天的铁甲草无菌苗1.0
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1.5cm长度的茎段为外植体，将外植体浸泡在激素溶液中20
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60min，然后取出外植体，用无菌吸水纸除去外植体表面残留的激素溶液；S2.将外植体茎段轴向水平接种至MS培养基上培养35
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45d，获得生根的铁甲草再生苗，然后驯化移栽。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤S1中的将外植体浸泡在激素溶液中20
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60min，是将外植体在浓度为30mg/L的NAA溶液中浸泡30min。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤S1中的将外植体浸泡在激素溶液中20
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60min，是将外植体在浓度为20mg/L的6
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BA溶液中浸泡20min。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤S1中的将外植体浸泡在激素溶液中20
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60min，是将外植体在浓度为0.25mg/L的TDZ溶液中浸泡40min。5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤S2为：将外植体茎...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘颖，郭伟超，周远航，黄慧平，何俊贤，赵敏，杨亚利，薛迎斌，杨少瑕，曾翔，潘玉虎，
申请(专利权)人：广东海洋大学，
类型：发明
国别省市：