本发明专利技术涉及大分子检测技术领域，具体涉及一种定量分析壳聚糖的无显色分光光度法。本发明专利技术利用壳聚糖溶液在190~195 nm波长下，在一定的浓度范围内，吸光度值随壳聚糖含量的增加而增大，并且呈现一定的线性关系，以此作为壳聚糖的定量基础，建立了分析壳聚糖的无显色分光光度法。本发明专利技术的方法不需添加显色剂，减少了显色环节的各种干扰因素，对仪器设备要求低，操作简单，确保了定量的稳定性和重现性。在无其他有机分子或无机配体干扰下，对可控体系（或纯体系）中壳聚糖的定量分析具有极好的适用性。用性。
【技术实现步骤摘要】
一种定量分析壳聚糖的无显色分光光度法
[0001]本专利技术涉及大分子检测
，具体涉及一种定量分析壳聚糖的无显色分光光度法。
技术介绍
[0002]壳聚糖是一类富含氨基和羟基官能团的聚电解质，具备多功能性的天然活性。近二十年来，在医药、食品、化工、环保等领域受到研究者的广泛关注。壳聚糖具有许多天然的优良性质，如吸湿透气性、生物相容性、生物可降解性、无抗原性、无致炎性、无有害降解产物、粘合性、抗菌性等，从而被广泛应用于纺织工业、生物医学和日用环保等方面。
[0003]在壳聚糖与固相的相互作用、壳聚糖的改性领域，壳聚糖的定量研究对深入探讨相关研究的机理十分必要，其准确定量的方法值得探究。
[0004]目前，壳聚糖的定量方法主要有比色检测法、体积排阻色谱法、高效液相色谱法、元素分析、紫外光谱法等(表1)。体积排阻色谱法、高效液相色谱法、元素分析、紫外光谱法对仪器条件或操作细节要求较高，相对来说，因分光光度计普及率较高，茚三酮比色法较为常用。但茚三酮比色法包括茚三酮混合加热显色环节，显色结果容易受到pH、温度和显色时间的影响，分别出现壳聚糖与茚三酮的缩合反应、受热不均和随时间光解的弊端。基于此，开发适用性强、操作简单、精确度高的壳聚糖无显色定量方法十分必要。
[0005]表1：现有壳聚糖定量方法的优缺点
[0006][0007]
技术实现思路
[0008]为解决上述技术问题，本专利技术提供一种定量分析壳聚糖的无显色分光光度法。本专利技术利用壳聚糖溶液在190～195nm波长下，在一定的浓度范围内，吸光度值随壳聚糖含量的增加而增大，并且呈现一定的线性关系。以此作为壳聚糖的定量基础，建立了分析壳聚糖的无显色分光光度法。
[0009]一种定量分析壳聚糖的无显色分光光度法，包括以下步骤：
[0010](1)绘制标准曲线：精密称取壳聚糖对照品，用浓度为1M以上的HClO4水溶液(优选为1M，M是mol/L，下同)浸润并溶解，再添加超纯水至HClO4的浓度为0.01M，摇匀，作为线性贮备液；用0.01M的HClO4水溶液将线性贮备液稀释至不同壳聚糖浓度(壳聚糖浓度在0.1～50mg/L范围)，作为线性溶液；在190～195nm波长下，以超纯水作为参比溶液，检测各线性溶液的吸光度，将参比溶液测得的吸光度值调至0；含壳聚糖的溶液的吸光度记为A，以壳聚糖浓度为横坐标，以A为纵坐标，绘制标准曲线。
[0011](2)样品检测：精密称取供试品，用浓度为1M以上的HClO4水溶液(优选为1M)浸润并溶解，再添加超纯水至HClO4的浓度为0.01M，摇匀；在190～195nm波长下，以超纯水作为参比溶液，将参比溶液测得的吸光度值调至0，检测供试品溶液的吸光度，记为A，若A超出线性范围，则使用0.01M HClO4水溶液稀释以得到合适浓度的供试品溶液；
[0012]将A代入步骤(1)中的标准曲线方程得到壳聚糖浓度，再乘以稀释倍数，将得到的浓度(质量体积浓度)乘以其体积得到壳聚糖的质量；再根据壳聚糖的质量/供试品称样量，计算出供试品中壳聚糖的含量。
[0013]所述壳聚糖对照品和所述供试品中所含壳聚糖为低分子量壳聚糖，其粘度为20
‑
300cP，其脱乙酰度>75％；
[0014]或者，所述壳聚糖对照品和所述供试品中所含壳聚糖为中分子量壳聚糖，其粘度为200
‑
800cP，其脱乙酰度>75％；
[0015]或者，所述壳聚糖对照品和所述供试品中所含壳聚糖为高分子量壳聚糖，其粘度为＞400cP，其脱乙酰度>75％；
[0016]本专利技术方法中，供试品中无其他有机物质或无机配体存在。
[0017]优选地，供试品为无机矿物吸附材料—壳聚糖溶液的吸附体系，其中无机矿物吸附材料包括蒙脱石、高岭石、伊利石、磁铁矿等至少一种。
[0018]与现有技术相比，本专利技术具有的有益效果：
[0019]相较现有技术，本方法不需添加显色剂，减少了显色环节的各种干扰因素，对仪器设备要求低，操作简单，确保了定量的稳定性和重现性。在无其他有机分子或无机配体干扰下，对可控体系(或纯体系)中壳聚糖的定量分析具有极好的适用性。
附图说明
[0020]图1为不同浓度的低分子量壳聚糖在190～300nm范围的扫描图谱；
[0021]图2为不同浓度的中分子量壳聚糖在190～300nm范围的扫描图谱；
[0022]图3为不同浓度的高分子量壳聚糖在190～300nm范围的扫描图谱；
[0023]图4为低分子量壳聚糖的线性关系图；
[0024]图5为中分子量壳聚糖的线性关系图；
[0025]图6为高分子量壳聚糖的线性关系图。
具体实施方式
[0026]下面申请人结合实施例和说明书附图对本专利技术作进一步描述，但本专利技术的保护范围并不限于这些实施例。本领域技术人员应理解，对本专利技术的技术特征所作的等同替换，或
相应的改进，仍属于本专利技术的保护范围之内。
[0027]下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法；所用水均为超纯水(电阻率＞18.25MΩ
·
cm)；所使用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
[0028]下述实施例中使用低分子量(20
‑
300cP，脱乙酰度>75％)、中分子量(200
‑
800cP，脱乙酰度>75％)、高分子量(＞400cP，脱乙酰度>75％)的壳聚糖为测试对象，低、中、高分子量壳聚糖均购自Sigma
‑
Aldrich，产品码分别为102428982、102466447、102473231，生产标准均为：CAS No.9012
‑
76
‑
4。
[0029]下述实施例中使用的设备为双光束分光光度计(北京普析TU
‑
1901，波长范围190
‑
700nm)。
[0030]实施例1：分析方法建立
[0031]1)波长选择
[0032]含有O、N、S和卤素等杂原子的饱和烃衍生物，在150～250nm处会产生光吸收，这为壳聚糖的无显色定量提供了基本依据。先使用超纯水扫谱检测机器短波波段稳定性，确保超纯水短波无明显光吸收。以超纯水谱线为基线，在190～300nm范围扫谱不同浓度的低、中、高分子量壳聚糖溶液，见图1
‑
3。
[0033]壳聚糖溶液的配制过程：用10mL 1M的HClO4水溶液浸润并溶解0.1g壳聚糖，再添加超纯水至HClO4的浓度为0.01M，摇匀，此时壳聚糖浓度为100mg/L；然后用0.01M的HClO4水溶液将上述壳聚糖溶液稀释至不同浓度(低、中、高分子量壳聚糖均同此法配制)。
[0034]由图1
‑
3可看出190nm为范围内吸收峰，但考虑本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种定量分析壳聚糖的无显色分光光度法，其特征在于，包括以下步骤：（1）绘制标准曲线：精密称取壳聚糖对照品，用浓度为1 M以上的HClO4水溶液浸润并溶解，再添加超纯水至HClO4的浓度为0.01M，摇匀，作为线性贮备液；用0.01M的HClO4水溶液将线性贮备液稀释至不同壳聚糖浓度，作为线性溶液，其中壳聚糖的浓度在0.1~50mg/L范围；以超纯水作为参比溶液，在190~195 nm波长下，检测各线性溶液的吸光度，记为A；以浓度为横坐标，以A为纵坐标，绘制标准曲线；（2）样品检测：精密称取供试品，用浓度为1 M以上的HClO4水溶液浸润并溶解，再添加超纯水至HClO4的浓度为0.01M，摇匀；以超纯水作为参比溶液，在190~195 nm波长下，检测供试品溶液的吸光度，记为A；将A代入步骤（1）中的标准曲线方程得到壳聚糖浓度，然后计算供试品中壳聚糖的含量；所述壳聚糖对照品和所述供试品中所含壳聚糖为低分子量壳聚糖，其粘度为20
‑
300 ...
【专利技术属性】
技术研发人员：胡超，杨子磐，陈凯亮，伍学威，胡红青，邓友军，
申请(专利权)人：湖北工程学院，
类型：发明
国别省市：
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