【技术实现步骤摘要】
用于体内合成3
’
SL的新型唾液酸转移酶
[0001]本专利技术涉及唾液酸化人乳寡糖(HMO)的生产,特别是3
’‑
唾液酸基乳糖(3
’
SL)的生物合成生产,以及适用于所述生产的基因工程细胞。
技术介绍
[0002]设计和建造细菌细胞工厂以生产唾液酸化人乳寡糖(HMO),特别是更复杂的唾液酸化人乳寡糖(HMO),对于为未来更复杂的产物提供创新和可扩展的解决方案至关重要。
[0003]为此,合理的菌株工程原理通常应用于单个细菌细胞。这些原理通常指a)向宿主引入所需的生物合成通路,b)所需反应中作为供体所需的相关活性糖的细胞池的增加,c)通过天然乳糖渗透酶LacY增强乳糖输入和d)引入合适的糖基转移酶,以促进唾液酸化寡糖的生物合成生产(参见Bych等人2019,Current Opinion in Biotechnology 56:130
–
137)。
[0004]WO2007/101862公开了使用例如来自脑膜炎奈瑟菌(Neisseria meningitidis)的α
‑
2,3
‑
唾液酸转移酶Nst结合neuBCA基因的表达以生产CMP
‑
neu5AC来生产唾液酸化HMO。
[0005]在WO2019/020707中提出了生产唾液酸化HMO的进一步尝试,其描述了能够在细胞中生产复杂唾液酸化HMO的许多唾液酸转移酶,其中假设3
’
SL可以作为次要的副产物 ...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种基因修饰细胞,其包含编码具有α
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2,3
‑
唾液酸转移酶活性的酶的重组核酸序列,其中所述酶选自以下的唾液酸转移酶:a.Poral,其包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列或与SEQ ID NO:3具有至少80%,例如至少85%、例如至少90%、例如至少95%同一性的氨基酸序列或由其组成,b.Clari1,其包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列或与SEQ ID NO:1具有至少80%,例如至少85%、例如至少90%、例如至少95%同一性的氨基酸序列或由其组成,c.PmN,其包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列或与SEQ ID NO:4具有至少80%,例如至少85%、例如至少90%、例如至少95%同一性的氨基酸序列或由其组成,和d.Neigon,其包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列或与SEQ ID NO:2具有至少80%,例如至少85%、例如至少90%、例如至少95%同一性的氨基酸序列或由其组成,其中所述细胞产生唾液酸化HMO。2.根据权利要求1所述的基因修饰细胞,其中所述唾液酸化HMO选自3
’
SL、FSL、DSLNT和LST
‑
a。3.根据权利要求1或2所述的基因修饰细胞,其中所述唾液酸化HMO为3
’
SL。4.根据前述权利要求中任一项所述的基因修饰细胞,其中3
’
SL是由所述基因修饰细胞产生的唯一HMO。5.根据前述权利要求中任一项所述的基因修饰细胞,其中所述编码具有α
‑
2,3
‑
唾液酸转移酶活性的酶的核酸序列受选自PglpF、PglpA_70UTR、PglpT_70UTR、Plac_70UTR、PmglB_70UTR及其变体的启动子的控制,所述启动子具有根据SEQ ID NO 12
‑
22或41
‑
54的核酸序列,优选选自SEQ ID NO 13、18、19、20、21、22、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50和51。6.根据前述权利要求中任一项所述的基因修饰细胞,其中所述细胞还包含一种或多种核酸序列,其编码一种或多种糖基转移酶,所述糖基转移酶选自β
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1,3
‑
半乳糖基转移酶、β
‑
1,4
‑
半乳糖基转移酶和β
‑
1,3
‑
N
‑
乙酰基
‑
葡糖胺基
‑
转移酶。7.根据前述权利要求中任一项所述的基因修饰细胞,其中所述细胞还包含编码MFS转运蛋白的核酸序列,所述MFS转运蛋白能够将唾液酸化HMO输出到细胞外基质中。8.根据权利要求6所述的基因修饰细胞,其中所述MFS转运蛋白是Fred、YberC或Nec蛋白。9.根据前述权利要求中任一项所述的基因修饰细胞,其中所述细胞包含用于制备唾液酸糖核苷酸的生物合成通路。10.根据权利要求9所述的基因修饰细胞,其中所述唾液酸糖核苷酸是CMP
‑
Neu5Ac,并且所述唾液酸糖核苷酸通路由编码来自空肠弯曲杆菌Campylobacter jejuni的NeuBCA的核酸序列(SEQ ID NO:35)编码。11.根据权利要求9或10所述的基因修饰细胞,其中所述唾液酸糖核苷酸通路由携带neuBCA操纵子的高拷贝质粒编码。12.根据前述权利要求中任一项所述的基因修饰细胞,其中所述修饰细胞是微生物。13.根据前述权利要求中任一项所述的基因修饰细胞,其中所述修饰细胞是细菌或真菌。14.根据权利要求13所述的基因修饰细胞,其中所述真菌选自驹形氏酵母属Komagataella、克鲁维酵母属Kluyveromyces、耶鲁维亚酵母属Yarrowia、毕赤酵母属
Pichia、酵母菌属Saccharomyces、裂殖酵母属Schizosaccharomyces或汉逊酵母属Hansenula的酵母细胞,或选自曲霉属Aspargillus、镰刀菌属Fusarium或木霉菌属Thri...
【专利技术属性】
技术研发人员:M,
申请(专利权)人:帝斯曼知识产权资产管理有限公司,
类型:发明
国别省市:
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