一种检测阴离子的方法技术

本发明专利技术提供了一种检测样品中的阴离子的方法。本发明专利技术的方法通过对样品进行多级梯度洗脱，同时在淋洗液中加入甲醇可以显著改善出峰情况，从而能够同时检测样品中的多种阴离子。本发明专利技术的方法适合于在动物、植物、微生物等样品中同时检测阴离子组，不仅前处理操作简便，检测方法的灵敏度高，而且可以同时检测出样品中的多个阴离子，极大地提高了生物样品中多个有机和无机阴离子的检测效率。有机和无机阴离子的检测效率。

【技术实现步骤摘要】
一种检测阴离子的方法


[0001]本专利技术涉及检测
；具体地说，本专利技术涉及检测生物体内阴离子的方法，特别是同时检测生物体内有机酸和阴离子的方法。

技术介绍

[0002]三羧酸循环(Krebs Cycle)是需氧生物体内普遍存在的代谢途径，产生柠檬酸、异柠檬酸、α
‑
酮戊二酸、琥珀酸等众多有机阴离子，不仅参与能量代谢、酸碱平衡调节，而且参与氨基酸、葡萄糖、脂肪酸和血红素等的合成和转化，是糖、脂、蛋白质等有机物在生物体内末端氧化的共同途径。三羧酸循环的分布非常广泛，植物、动物、微生物、高等生物等体内都存在三羧酸循环。
[0003]随着基因组学、蛋白组学、代谢组学等技术的发展和研究深入，人们越来越认识到三羧酸循环与癌细胞代谢、代谢疾病、心脏病、神经变性和衰老等重大复杂疾病有密切的关系。三羧酸循环既是分解代谢途径，但又为一些物质的生物合成提供了前体分子，对细胞代谢、体内平衡和应激反应至关重要。三羧酸循环是线粒体产能的关键通路，线粒体能量供应不足会导致心脏、肌肉和大脑等高能量需求的器官和组织的功能紊乱。在炎症状态下TCA循环通路被破坏如：α
‑
酮戊二酸脱氢酶的缺失，会能量氧化磷酸化减少。机体三羧酸循环及氧化磷酸化障碍，使甲基丙二酸、丙酸、β
‑
羟丁酸等异常代谢产物蓄积，造成以中枢神经系统损害为主的多系统损伤。
[0004]微生物体内三羧酸循环的有机酸具有抗氧化作用或是氧化强化剂，可提高啤酒发酵成品的微生物稳定性，提高微生物发酵的效率，这些有机酸对于啤酒的口感也非常重要，琥珀酸、苹果酸或延胡索酸显著影响啤酒口感。在致病真菌中，真菌分泌草酸作为致病因子用于侵入植物体。在高等植物中，根系有机酸分泌是高等植物提供土壤环境耐受性的主要机制，如：铝诱导的苹果酸和柠檬分泌可能在雪柑的耐铝性中起着重要作用；拟南芥是一种积累高水平有机酸用于作为碳、能量和还原力的来源的一种植物。另外，生物体内还存在大量的有机酸如：乙酸、乳酸、丙酮酸、葡萄糖酸、磷酸根(Pi)等等，这些有机阴离子在新陈代谢途径中发挥着重要作用。
[0005]目前，有关生物体内有机阴离子的研究一般通过关键酶蛋白功能变化等形式来进行展开，但这在很大程度上受到蛋白酶表达及其操作的难度所限制。高效地检测生物体内有机阴离子含量的变化规律不仅能够精准地明确调控三羧酸循环速率和流量的关键种因素，而且有助于阐明重大疾病的发生过程、微生物产品的发酵过程、植物体的抗逆和适应过程等。但是，由于生物样品具有基体复杂多样、干扰大、待测物的成分痕量等特点，建立和利用高效灵敏的技术手段对生物样本进行分析尤为重要。
[0006]在众多的文献报道中，有关样品中阴离子的检测方法很多，如：滴定法、原子吸收光谱法、气相色谱法、液相色谱法、离子色谱法等，甚至利用核磁共振谱仪进行有机酸检测。其中，滴定法虽然成本低，但是灵敏度差，误差较大，只能用于检测出样品中总有机酸含量，无法进行有机酸组分分析；原子吸收光谱法由于其机理限制，钙离子无法与草酸等部分有
机酸络合，因此使用受限；而气相色谱法和液相色谱法的前处理操作要求极为繁琐。
[0007]因此，本领域急需能够高效检测生物体内阴离子，同时操作简便的方法。

技术实现思路

[0008]本专利技术的目的在于提供一种检测生物体内阴离子的方法，所述方法不仅能够高效检测生物体内阴离子，还应具备操作简便，能够适用于各种生物体等等优点。
[0009]在第一方面，本专利技术提供一种样品中的阴离子的检测方法，所述方法包括以下步骤：
[0010]1)将待测样品上样于离子色谱柱；
[0011]2)对上样后的离子色谱柱进行多级梯度洗脱；
[0012]3)接收并分析洗脱液中的阴离子；
[0013]其中步骤2)中的多级梯度洗脱是分别利用水、淋洗液、含甲醇的淋洗液、淋洗液和水对离子色谱柱进行洗脱；
[0014]所述淋洗液是碱的水溶液。
[0015]在优选的实施方式中，所述碱是氢氧化钠或氢氧化钾。
[0016]在具体的实施方式中，所述样品是生物样品。
[0017]在具体的实施方式中，所述生物样品是动物、植物和微生物样品。
[0018]在优选的实施方式中，所述动物包括但不限于：哺乳动物或昆虫；所述哺乳动物包括但不限于：鼠、兔等等；优选东方粘虫；
[0019]所述植物包括但不限于：马铃薯、番茄、黄瓜等，优选马铃薯；
[0020]所述微生物包括但不限于：真菌、细菌等；所述真菌包括但不限于：灰霉病菌、赤霉病菌、菌核病菌等；所述细菌包括但不限于：假单胞菌、黄单胞菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌等；优选番茄灰霉菌。
[0021]在优选的实施方式中，所述阴离子包括有机阴离子和无机阴离子；优选地，所述有机阴离子是有机酸阴离子；
[0022]所述有机酸阴离子包括乙酸根离子、草酰乙酸根离子、琥珀酸根离子、苹果酸根离子、α
‑
酮戊二酸根离子、富马酸根离子、草酸根离子、柠檬酸根离子、异柠檬酸根离子中的一种或多种；
[0023]所述无机阴离子包括：氯离子(Cl
‑
)、硫酸根离子(SO
42
)、硝酸根离子(NO3‑
)、磷酸根离子(PO
43
‑
)中的一种或多种。
[0024]在具体的实施方式中，阴离子是乙酸根离子、草酰乙酸根离子、琥珀酸根离子、苹果酸根离子、α
‑
酮戊二酸根离子、富马酸根离子、草酸根离子、柠檬酸根离子、异柠檬酸根离子、氯离子(Cl
‑
)、硫酸根离子(SO
42
)、硝酸根离子(NO3‑
)、磷酸根离子(PO
43
‑
)中的一种或多种；优选其中的2种；更优选其中的3种、4种、5种、6种、7种、8种、9种、10种、11种、12种；最优选全部13种。
[0025]在具体的实施方式中，在步骤1)之前还包括对样品进行前处理的步骤。
[0026]在具体的实施方式中，所述前处理包括以下步骤：
[0027]1‑
1)对样品进行冷冻；
[0028]1‑
2)对冷冻后的样品进行研磨；
[0029]1‑
3)在研磨后的样品中加入蛋白沉淀剂；
[0030]1‑
4)将经蛋白沉淀剂处理样品进行离心，从而得到上清液；
[0031]1‑
5)对得到的上清液进行稀释和过滤。
[0032]在优选的实施方式中，所述蛋白沉淀剂包括：三氟乙酸、高氯酸、氯仿、乙二胺四乙酸、甲醇、乙腈等等。
[0033]在优选的实施方式中，对于植物样品，可以在步骤1
‑
4)和1
‑
5)之间进行除去植物色素的步骤。
[0034]在优选的实施方式中，所述除去植物色素的步骤包括将上清液过石墨化碳黑小柱。
[0035]在具体的实施方式中，所述水是超纯水。<本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种样品中的阴离子的检测方法，所述方法包括以下步骤：1)将待测样品上样于离子色谱柱；2)对上样后的离子色谱柱进行多级梯度洗脱；3)接收并分析洗脱液中的阴离子；其中步骤2)中的多级梯度洗脱是分别利用水、淋洗液、含甲醇的淋洗液、淋洗液和水对离子色谱柱进行洗脱；所述淋洗液是碱的水溶液。2.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述样品是生物样品。3.如权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述生物样品是动物、植物和微生物样品。4.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，阴离子是乙酸根离子、草酰乙酸根离子、琥珀酸根离子、苹果酸根离子、α
‑
酮戊二酸根离子、富马酸根离子、草酸根离子、柠檬酸根离子、异柠檬酸根离子、氯离子(Cl
‑
)、硫酸根离子(SO
42
)、硝酸根离子(NO3‑
)、磷酸根离子(PO
43
‑
)中的一种或多种；优选其中的2种；更优选其中的3种、4种、5种、6种、7种、8种、9种、10种、11种、12种；...

【专利技术属性】
技术研发人员：栾绍嵘，王晓威，黄青春，孟玲玲，倪立军，蔡丹妮，于世强，
申请(专利权)人：华东理工大学，
类型：发明
国别省市：