一种昆虫表皮蛋白自组装体、制备方法及应用技术

本发明专利技术提供了一种昆虫表皮蛋白自组装体、制备方法及应用。该方法包括制备昆虫表皮蛋白组装前体溶液、制备组装盐溶液和昆虫表皮蛋白自组装三个步骤。该昆虫表皮蛋白自组装体的单体为亚洲玉米螟的昆虫表皮蛋白。该昆虫表皮蛋白自组装体能够促进血管成型、抑制细菌和促进动物伤口愈合。本发明专利技术首次提出了一种昆虫表皮蛋白自组装体的制备方法，该方法以亚洲玉米螟的昆虫表皮蛋白为单体，在组装盐溶液中实现了昆虫表皮蛋白的自组装，为昆虫表皮蛋白的应用提供了物质基础，该昆虫表皮蛋白自组装体在生物医学领域具有广阔的应用前景。物医学领域具有广阔的应用前景。物医学领域具有广阔的应用前景。

【技术实现步骤摘要】
一种昆虫表皮蛋白自组装体、制备方法及应用


[0001]本专利技术属于动物分子生物学
，涉及昆虫表皮蛋白，具体涉及一种昆虫表皮蛋白自组装体、制备方法及应用。

技术介绍

[0002]昆虫角质层的主要功能是组成外骨骼，对保持身体结构，抑制水分蒸发和抵御外界不良环境有重要的作用。昆虫角质层由几丁质和表皮蛋白组成，其中，昆虫表皮蛋白在昆虫表皮整合、体形造、活动能力、抗逆抗药性，以及先天免疫等生理现象和生理过程中有不可或缺的作用。
[0003]自组装是指基本结构单元(分子，纳米材料，微米或更大尺度的物质)自发形成有序结构的一种技术。在自组装的过程中，基本结构单元在非共价键的相互作用下自发地组织或聚集为一个稳定、具有一定规则几何外观的结构。自组装现象广泛存在于自然界的生命系统之中，如DNA的双螺旋结构、蛋白质的聚集与折叠、细胞或某些生命体等等，它们都被认为是分子自组装的结果。目前，体外自组装蛋白技术能够应用于生物医学领域，例如，将从人发、羊毛、禽羽毛等物质中提取出角蛋白在体外进行自组装，所形成的组装体在动物实验和临床研究中表现出良好的创面修复性能。
[0004]然而，由于现有技术中缺乏关于昆虫表皮蛋白在体外进行自组装的方法，因此限制了昆虫表皮蛋白在生物医学领域的应用。

技术实现思路

[0005]针对现有技术存在的不足，本专利技术的目的在于，提供一种昆虫表皮蛋白自组装体、制备方法及应用，解决现有技术中由于缺乏关于昆虫表皮蛋白在体外进行自组装的方法，导致昆虫表皮蛋白的应用受限的技术问题。
[0006]为了解决上述技术问题，本专利技术采用如下技术方案予以实现：
[0007]一种昆虫表皮蛋白自组装体的制备方法，该方法具体包括如下步骤：
[0008]步骤一，制备昆虫表皮蛋白组装前体溶液：
[0009]称取昆虫表皮蛋白，将昆虫表皮蛋白溶于乙酸溶液中后静置，然后离心，离心结束后弃去沉淀，获得的上清即为昆虫表皮蛋白组装前体溶液。
[0010]步骤二，制备组装盐溶液：
[0011]配制磷酸二氢钠溶液，将称好的氯化钾粉末溶于磷酸二氢钠溶液中，制得组装盐溶液。
[0012]步骤三，昆虫表皮蛋白自组装：
[0013]将步骤一制得的昆虫表皮蛋白组装前体溶液与步骤二制得的组装盐溶液混匀后加入细胞培养板的培养孔中，静置，然后吸去上清液，并清洗培养孔，制得昆虫表皮蛋白自组装体。
[0014]本专利技术还具有如下技术特征：
[0015]具体的，步骤一中，所述的乙酸溶液中冰乙酸的体积分数为1％。
[0016]具体的，步骤一中，离心的条件为：以12000rpm的转速离心5min。
[0017]具体的，步骤一中，所述的昆虫表皮蛋白组装前体溶液中，昆虫表皮蛋白的质量含量为5mg/mL。
[0018]具体的，步骤二中，所述的组装盐溶液中，磷酸二氢钠的终浓度为10mmol/L，氯化钾的终浓度为160mmol/L。
[0019]具体的，步骤三中，昆虫表皮蛋白组装前体溶液与组装盐溶液的体积比为1:9。
[0020]本专利技术还保护一种采用如上所述的昆虫表皮蛋白自组装体的制备方法制得的昆虫表皮蛋白自组装体；该昆虫表皮蛋白自组装体的单体为亚洲玉米螟的昆虫表皮蛋白，该亚洲玉米螟的昆虫表皮蛋白的核苷酸序列如核苷酸或氨基酸序列表中的sequence ID Number 1所示。
[0021]本专利技术还保护如上所述的昆虫表皮蛋白自组装体用于促进血管成型的应用。
[0022]本专利技术还保护如上所述的昆虫表皮蛋白自组装体用于抑制细菌的应用。
[0023]本专利技术还保护如上所述的昆虫表皮蛋白自组装体用于促进动物伤口愈合的应用。
[0024]本专利技术与现有技术相比，具有如下技术效果：
[0025](I)本专利技术首次提出了一种昆虫表皮蛋白自组装体的制备方法，该方法以亚洲玉米螟的昆虫表皮蛋白为单体，在组装盐溶液中实现了昆虫表皮蛋白的自组装，为昆虫表皮蛋白的应用提供了物质基础。
[0026](Ⅱ)采用本专利技术的方法制得的昆虫表皮蛋白自组装体，能够用于内皮细胞中诱发血管形成，能够在体外抑制细菌的生长，还能够促进动物伤口愈合，即该昆虫表皮蛋白自组装体在生物医学领域具有广阔的应用前景。
附图说明
[0027]图1为昆虫表皮蛋白自组装体的宏观形貌图。
[0028]图2为昆虫表皮蛋白自组装体的扫描电镜图。
[0029]图3为实施例3中昆虫表皮蛋白自组装体促进血管成型实验的结果图。
[0030]图4为实施例4中昆虫表皮蛋白自组装体抑制细菌实验的结果图。
[0031]图5为实施例5中昆虫表皮蛋白自组装体促进伤口愈合实验的结果图。
[0032]以下结合实施例对本专利技术的具体内容作进一步详细解释说明。
具体实施方式
[0033]需要说明的是，本专利技术中所有用到的试剂和培养基，在没有特殊说明的情况下，均采用本领域已知的试剂和培养基。
[0034]以下给出本专利技术的具体实施例，需要说明的是本专利技术并不局限于以下具体实施例，凡在本申请技术方案基础上做的等同变换均落入本专利技术的保护范围。
[0035]实施例1：
[0036]本实施例给出一种昆虫表皮蛋白自组装体的制备方法，该方法具体包括如下步骤：
[0037]步骤一，制备昆虫表皮蛋白组装前体溶液：
[0038]称取亚洲玉米螟的昆虫表皮蛋白，将昆虫表皮蛋白溶于乙酸溶液中，该乙酸溶液中冰乙酸的体积分数为1％；室温静置10min后，以12000rpm的转速离心5min后，弃去沉淀，获得的上清即为昆虫表皮蛋白组装前体溶液。该昆虫表皮蛋白组装前体溶液中，昆虫表皮蛋白的质量含量为5mg/mL。
[0039]步骤二，制备组装盐溶液：
[0040]在干净的试管中配制磷酸二氢钠溶液，将称好的氯化钾粉末溶于磷酸二氢钠溶液中，制得组装盐溶液；该组装盐溶液中，磷酸二氢钠的终浓度为10mmol/L，氯化钾的终浓度为160mmol/L。
[0041]步骤三，昆虫表皮蛋白自组装：
[0042]将步骤一制得的昆虫表皮蛋白组装前体溶液与步骤二制得的组装盐溶液按照1:9的体积比混匀，加入细胞培养板的培养孔中，室温静置2小时后，吸去上清液，待自然风干后，采用双蒸水将细胞培养板的培养孔清洗2～3次，培养孔底面的沉积物即为昆虫表皮蛋白自组装体。
[0043]本实施例中，对昆虫表皮蛋白自组装体的宏观形貌和微观形貌进行了观察，结果如图1和图2所示。
[0044]实施例2：
[0045]本实施例给出一种昆虫表皮蛋白自组装体，该昆虫表皮蛋白自组装体采用实施例1的昆虫表皮蛋白自组装体的制备方法制得。该昆虫表皮蛋白自组装体的单体为亚洲玉米螟(Ostrinia furnacalis)的昆虫表皮蛋白。
[0046]该亚洲玉米螟的昆虫表皮蛋白编码基因的核苷酸序列如下所示：5
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种昆虫表皮蛋白自组装体的制备方法，其特征在于，该方法具体包括如下步骤：步骤一，制备昆虫表皮蛋白组装前体溶液：称取昆虫表皮蛋白，将昆虫表皮蛋白溶于乙酸溶液中后静置，然后离心，离心结束后弃去沉淀，获得的上清即为昆虫表皮蛋白组装前体溶液；步骤二，制备组装盐溶液：配制磷酸二氢钠溶液，将称好的氯化钾粉末溶于磷酸二氢钠溶液中，制得组装盐溶液；步骤三，昆虫表皮蛋白自组装：将步骤一制得的昆虫表皮蛋白组装前体溶液与步骤二制得的组装盐溶液混匀后加入细胞培养板的培养孔中，静置，然后吸去上清液，并清洗培养孔，制得昆虫表皮蛋白自组装体。2.如权利要求1所述的昆虫表皮蛋白自组装体的制备方法，其特征在于，步骤一中，所述的乙酸溶液中冰乙酸的体积分数为1％。3.如权利要求1所述的昆虫表皮蛋白自组装体的制备方法，其特征在于，步骤一中，离心的条件为：以12000rpm的转速离心5min。4.如权利要求1所述的昆虫表皮蛋白自组装体的制备方法，其特征在于，步骤一中，所述的昆虫...

【专利技术属性】
技术研发人员：龚秋雨，刘博豪，陶润仪，朱星卓，赵轶龙，张广健，
申请(专利权)人：西安交通大学医学院第一附属医院，
类型：发明
国别省市：