本发明专利技术提供了CYP4F2和CYP4F11作为ER+乳腺癌诊疗靶点的应用。本发明专利技术通过构建过表达、抑制表达的稳定乳腺癌细胞株与各自的平行对照细胞株接种裸鼠观察成瘤情况，记录肿瘤的体积、重量等参数。在荷瘤小鼠中使用小分子抑制剂HET0016评估靶向该靶点的抗肿瘤效果，结果显示CYP4F2和CYP4F11的抑制剂HET0016能够减缓E2刺激的ER+乳腺癌的生长。缓E2刺激的ER+乳腺癌的生长。缓E2刺激的ER+乳腺癌的生长。
【技术实现步骤摘要】
CYP4F2和CYP4F11作为ER+乳腺癌诊疗靶点的应用
[0001]本专利技术属于生物医药领域，尤其是涉及CYP4F2和CYP4F11作为乳腺癌诊疗靶点的应用。
技术介绍
[0002]雌激素受体阳性(ER+)乳腺癌的发生发展依赖于雌激素
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雌激素受体(E2
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ER)信号通路。其标准治疗方法是针对阻断E2
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ER信号通路的内分泌疗法。之后又发展出了与CDK4/6或mTOR抑制剂联合用药治疗，这种联合疗法仅能提高患者无进展生存期数个月。虽然这些治疗降低了ER+乳腺癌患者的复发率和死亡率，在这些疗法失效后ER+乳腺癌的发展仍然依赖E2
‑
ER信号通路，但是对其确切原因和控制途径还缺乏深入了解研究，这也限制了对ER+乳腺癌的治疗。
技术实现思路
[0003]有鉴于此，本专利技术旨在克服现有技术中的缺陷，提出一种新的针对ER+乳腺癌的诊疗靶点以及该靶点的应用。
[0004]为达到上述目的，本专利技术的技术方案是这样实现的：
[0005]第一方面，本专利技术提供了CYP4F2蛋白和CYP4F11蛋白作为药物靶点在筛选和/或制备诊断、预防或治疗ER+乳腺癌的药物中的应用。
[0006]第二方面，本专利技术还提供了CYP4F2蛋白和CYP4F11蛋白的抑制剂在制备治疗乳腺癌的药物中的应用。
[0007]优选地，所述CYP4F2蛋白和CYP4F11蛋白的抑制剂为HET0016。
[0008]第三方面，本专利技术还提供了抗肿瘤药物组合物，其包括活性成分和辅料，所述活性成分为CYP4F2蛋白和CYP4F11蛋白的抑制剂。
[0009]优选地，所述抗肿瘤药物组合物为治疗ER+乳腺癌的药物组合物。
[0010]相对于现有技术，本专利技术具有以下优势：
[0011]1)ER+乳腺癌中，E2
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ER直接调控的异常代谢相关靶点筛选
[0012]通过细胞样品代谢组学及公共数据库生物信息学分析，初步选择花生四烯酸代谢通路关键酶、受体、代谢底物和产物，确定显著激活的细胞色素P450(CYP450)同工酶F2和F11为异常代谢调控的主要研究靶点。
[0013]2)在临床样本中验证关键分子表达水平与疾病进展相关性，筛选、评估潜在标志物
[0014]比较临床样本癌组织与癌旁组织中，CYP450同工酶F2和F11表达水平差异；比较花生四烯酸代谢通路关键酶不同表达水平对患者预后的影响，评价花生四烯酸代谢通路关键酶及受体的预后评价价值。定量分析CYP450同工酶F2和F11调控的代谢产物在肿瘤病人中的表达水平，并分析其与疾病进展的相关性，结果显示CYP450同工酶F2和F11与ER+乳腺癌高度相关。
[0015]3)在动物模型中评估靶向该靶点的抗肿瘤效果
[0016]构建过表达、抑制表达的稳定乳腺癌细胞株与各自的平行对照细胞株接种裸鼠观察成瘤情况，记录肿瘤的体积、重量等参数。在荷瘤小鼠中使用小分子抑制剂HET0016评估靶向该靶点的抗肿瘤效果，结果显示CYP4F2和CYP4F11的抑制剂HET0016能够减缓E2刺激的ER+乳腺癌的生长。
附图说明
[0017]图1为E2促进ER+乳腺癌细胞增殖图；
[0018]图2为E2处理MCF
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7细胞脂代谢发生重编程；
[0019]图3为10nM E2处理MCF
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7细胞15min、6h、24h后检测AA代谢通路中COX、LOX、CYP450以及磷脂酶PLA2基因表达情况；
[0020]图4为TCGA数据库分析AA代谢关键酶在ER+和ER
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乳腺癌样本中的基因表达差异；
[0021]图5为E2诱导ER+乳腺癌细胞中CYP4F2和CYP4F11表达图；
[0022]图6为E2诱导ER+乳腺癌细胞中产物20
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HETE生成图；
[0023]图7为ER+乳腺癌患者肿瘤组织高表达CYP4F2和CYP4F11；
[0024]图8为ER+乳腺癌患者肿瘤组织血清中20
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HETE含量上调；
[0025]图9为产物20
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HETE促进ER+乳腺癌细胞增殖；
[0026]图10为CYP4F2和CYP4F11抑制剂HET0016能够减缓E2刺激的ER+乳腺癌的生长；
[0027]图11为过表达CYP4F2、CYP4F11增加乳腺癌细胞MCF
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7的成瘤能力；敲低CYP4F2、CYP4F11的细胞在小鼠肺部定植能力减弱。
具体实施方式
[0028]除有定义外，以下实施例中所用的技术术语具有与本专利技术创造所属领域技术人员普遍理解的相同含义。以下实施例中所用的试验材料，如下表所示：
[0029]表1细胞系
[0030]细胞系来源MCF
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7ATCCT47D天津市肿瘤医院BT474天津市肿瘤医院
[0031]表2实验试剂
[0032][0033][0034][0035]表3试验仪器
[0036][0037][0038]试验过程：
[0039]一、试剂配制
[0040](1)DMEM、RPMI1640细胞完全培养基1
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DMEM或者RPMI1640 90mL
[0041]FBS
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
10mL
[0042]双抗(PS)
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
1mL
[0043]混匀，4℃保存。
[0044](2)细胞冻存液(50mL)
[0045]完全培养基
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
30mL
[0046]血清
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
15mL
[0047]DMSO
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
5mL
[0048]涡旋混匀。
[0049](2)1
×
EDTA
‑
胰酶(TE)
[0050]EDTA
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
0.2g
[0051]胰蛋白酶粉末
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
1.25g
[0052]PBS
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
1L
[0053]涡旋振荡混匀，放至4℃冷库中搅拌过夜，待充分溶解后，在超净工作台中用0.22μm过滤器过滤分装，放至
‑
20℃冰箱存放。
[0054](4)无菌1
×
PBS
[0055][0056]将称取的粉末倒进锥形瓶中，加入1L ddH2O，搅拌至充分溶解之后，分装至玻璃瓶中，放至高压蒸汽灭菌锅中灭菌。
[0057](5)5mg/mL MTT溶液
[0058]MTT粉末，本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.CYP4F2蛋白和CYP4F11蛋白作为药物靶点在筛选和/或制备诊断、预防或治疗ER+乳腺癌的药物中的应用。2.CYP4F2蛋白和CYP4F11蛋白的抑制剂在制备治疗乳腺癌的药物中的应用。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：所述CYP4F2蛋白和CYP4F11...
【专利技术属性】
技术研发人员：杨娟，李承刚，王常珺，孙强，李茵，
申请(专利权)人：南开大学，
类型：发明
国别省市：
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