检测烟碱型乙酰胆碱受体的荧光探针及制备方法技术

本发明专利技术公开了检测烟碱型乙酰胆碱受体的荧光探针及制备方法，具体为：以3,3

【技术实现步骤摘要】
检测烟碱型乙酰胆碱受体的荧光探针及制备方法


[0001]本专利技术属于分析检测
，具体涉及检测烟碱型乙酰胆碱受体的荧光探针，还涉及该荧光探针的制备方法。

技术介绍

[0002]烟碱型乙酰胆碱受体是一类较大的蛋白家族，包含很多种不同的成员，即不同亚型的蛋白。因吸烟引起的尼古丁摄入会影响烟碱型乙酰胆碱受体在体内的一系列生理变化，在许多生理和病理过程中扮演着不可忽视的角色，包括在胆碱能系统功能障碍与一些神经系统疾病有关，如癌症、炎症、肺部疾病和阿尔兹海默症等。还会造成药物成瘾和精神分裂症。
[0003]近年来许多科学研究者通过基因组学、蛋白质组学和计算模拟等方法对烟碱型乙酰胆碱受体生理功能展开研究。而通过荧光探针方法开展的研究极少。因此，运用荧光探针法检测生物体内烟碱型乙酰胆碱受体，对于理解各种疾病的产生和发展将产生积极的、有意义的影响。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于提供检测烟碱型乙酰胆碱受体的荧光探针，该荧光探针对烟碱型乙酰胆碱受体的检测具有良好的选择性和抗干扰能力。
[0005]本专利技术另一的目的在于提供上述荧光探针的制备方法。
[0006]本专利技术所采用的技术方案是，检测烟碱型乙酰胆碱受体的荧光探针，该荧光探针具有如下式(Ⅰ)所示的结构式：
[0007][0008]本专利技术所采用的另一技术方案是，检测烟碱型乙酰胆碱受体的荧光探针的制备方法，具体按照以下步骤实施：
[0009]步骤1，以3,3
‑
二甲基戊二酸酐和4<br/>‑
(二乙氨基)水杨醛为原料，通过缩合反应合成荧光团XDS；
[0010]步骤2，将荧光团XDS和R
‑3‑
氨基奎宁环二盐酸盐进行反应，生成荧光团XDS
‑
EVP，即为检测烟碱型乙酰胆碱受体的荧光探针。
[0011]本专利技术的特点还在于，
[0012]步骤1中，具体为：将纯水、3,3
‑
二甲基戊二酸酐和4
‑
(二乙氨基)水杨醛混合，在
80
‑
90℃的条件下，持续加热6
‑
10h；之后冷却至室温，减压抽滤除去溶剂，干燥后的固体用甲醇重结晶，得到荧光团XDS。
[0013]纯水、3,3
‑
二甲基戊二酸酐和4
‑
(二乙氨基)水杨醛的质量比为12：1.2：1。
[0014]步骤2中，具体为：将二氯甲烷、荧光团XDS、R
‑3‑
氨基奎宁环二盐酸盐混合均匀，加入EDCI和DMAP，在室温条件下搅拌反应1
‑
4h，再通过柱层析分离，得到黄绿色产物，即为荧光探针XDS
‑
EVP。
[0015]XDS、R
‑3‑
氨基奎宁环二盐酸盐、EDCI和DMAP的质量比为16：16：24：1。
[0016]本专利技术的有益效果是：本专利技术的荧光探针，以香豆素为荧光团母体设计合成了探针XDS
‑
EVP，探针XDS
‑
EVP能够标记烟碱型乙酰胆碱受体，它的发射波长是493nm，斯托克斯位移为55nm。在水环境中在生理条件下(pH＝7.4)时荧光强度稳定，且选择性较好，不受其他无机金属离子、氨基酸成分的干扰。在普通细胞和A549肺癌细胞中能够准确识别A549肺癌细胞。
附图说明
[0017]图1本专利技术方法制备的荧光探针检测烟碱型乙酰胆碱的原理图；
[0018]图2是水环境中探针XDS
‑
EVP(5μmol/L)在不同pH条件下的紫外吸收吸光度图；
[0019]图3是水环境中探针XDS
‑
EVP(5μmol/L)在不同pH条件下的荧光发射强度图；
[0020]图4是探针XDS
‑
EVP在493nm处的荧光发射最大强度的折线图；
[0021]图5是水环境中探针XDS
‑
EVP(5μmol/L)在不同干扰物条件下的荧光发射强度图；
[0022]图6是探针XDS
‑
EVP(5μmol/L)的293T细胞染色图；
[0023]图7是探针XDS
‑
EVP(5μmol/L)的A549细胞染色图；
[0024]图8是探针XDS
‑
EVP(5μmol/L)的尼古丁培养的A549细胞染色图。
具体实施方式
[0025]下面结合具体实施方式和附图对本专利技术进行详细说明。
[0026]本专利技术检测烟碱型乙酰胆碱受体的荧光探针，该荧光探针具有如下式(Ⅰ)所示的结构式：
[0027][0028]本专利技术检测烟碱型乙酰胆碱受体的荧光探针的制备方法，具体按照以下步骤实施：
[0029]步骤1，以3,3
‑
二甲基戊二酸酐和4
‑
(二乙氨基)水杨醛为原料，通过缩合反应合成如下式(Ⅱ)所示的荧光团XDS；
[0030][0031]具体为：将纯水、3,3
‑
二甲基戊二酸酐和4
‑
(二乙氨基)水杨醛混合，在80
‑
90℃的条件下，持续加热6
‑
10h；之后冷却至室温，减压抽滤除去溶剂，干燥后的固体用甲醇重结晶，得到荧光团XDS；
[0032]纯水、3,3
‑
二甲基戊二酸酐和4
‑
(二乙氨基)水杨醛的质量比为12：1.2：1；
[0033]步骤2，将荧光团XDS和R
‑3‑
氨基奎宁环二盐酸盐进行反应，生成荧光团XDS
‑
EVP，如式(Ⅲ)所示；
[0034][0035]具体为：将二氯甲烷、荧光团XDS、R
‑3‑
氨基奎宁环二盐酸盐混合均匀，加入EDCI和DMAP，在室温条件下搅拌反应1
‑
4h，再通过柱层析分离，得到黄绿色产物，即为荧光探针XDS
‑
EVP；
[0036]XDS、R
‑3‑
氨基奎宁环二盐酸盐、EDCI和DMAP的质量比为16：16：24：1；
[0037]本专利技术方法制备的荧光探针标记烟碱型乙酰胆碱受体的原理如图1所示，EVP
‑
6124作为烟碱型乙酰胆碱受体的小分子激动剂，其中奎宁环质子化后锁定在受体结合位点的苯环笼子内，碱性桥接氨基氮形成阳离子
‑
π相互作用，与结合位点Y210氨基酸残基上的羰基氧形成氢键，羰基氧与C212的酰胺态氮形成氢键，而尾部的苯并噻吩基团从芳香笼中伸出，插入S56、S58、Q79、Q183、D186和E211形成的亲水口袋中。在细胞呈像中，可以明显观察到293T细胞中仅有微弱的蓝色荧光而A549细胞中呈现明亮的蓝色。
[0038]实施例1
[0039]本专利技术检测烟碱型乙酰胆碱受体的荧光探针的制备方法，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.检测烟碱型乙酰胆碱受体的荧光探针，其特征在于，该荧光探针具有如下式(Ⅰ)所示的结构式：2.如权利要求1所述的检测烟碱型乙酰胆碱受体的荧光探针的制备方法，其特征在于，具体按照以下步骤实施：步骤1，以3,3
‑
二甲基戊二酸酐和4
‑
(二乙氨基)水杨醛为原料，通过缩合反应合成荧光团XDS；步骤2，将荧光团XDS和R
‑3‑
氨基奎宁环二盐酸盐进行反应，生成荧光团XDS
‑
EVP，即为检测烟碱型乙酰胆碱受体的荧光探针。3.如权利要求2所述的检测烟碱型乙酰胆碱受体的荧光探针的制备方法，其特征在于，所述步骤1中，具体为：将纯水、3,3
‑
二甲基戊二酸酐和4
‑
(二乙氨基)水杨醛混合，在80
‑
90℃的条件下，持续加热6
‑
10h；之后冷却至室...

【专利技术属性】
技术研发人员：李剑利，李金鑫，厍梦尧，敖伟，陈娇，王泽思，
申请(专利权)人：西北大学，
类型：发明
国别省市：