体外运输和储存细胞用培养基制造技术

本发明专利技术涉及一种细胞的体外储存和/或运输，包括：

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】体外运输和储存细胞用培养基


[0001]本专利技术涉及细胞的体外运输和储存，并且更具体而言涉及在运输或储存操作过程中用作培养和/或分离细胞的合适培养基的凝胶化组合物。

技术介绍

[0002]当运输体外培养的细胞或分离的细胞时，必须将细胞保藏在适当的培养基中，使得能够在诸如长途运送和/或中间储存的操作过程中保持细胞的完整性和活力。
[0003]为此，已经描述了在干冰或液氮的冷冻瓶中运输的方法，并且通常使用该方法，但这种冷藏运输除了由于干冰和液氮的危险性而引起的问题以外，还导致高成本。此外，这些方法需要细胞在细胞运输后进行长时间的适应(通常几天或几周)，然后才能使用细胞。
[0004]可选地，也可以在培养状态下运输细胞，通常是用液体培养基包围贴壁细胞或自由悬浮的细胞，但是，对于可能显著影响细胞完整性和/或细胞功能能力(如细胞粘附能力)的运输情况，必须极其小心。
[0005]维持细胞的完整性和功能能力对于用作模型的体外培养细胞(例如用于遗传、生物化学、代谢或生理过程建模)特别重要，并且更通常的是，对于在特定载体上培养的细胞以及特别是当置于不对称载体如Transwell型载体上的共培养细胞特别重要。在这种情况下，不仅要保持各细胞的完整性，而且要保持培养物的整个结构、特别是当培养物旨在用作模型时更是如此。
[0006]已经开发了避免上述问题的方法，其中培养的细胞在通常是凝胶的半固体培养基中运输。
[0007]在这方面，特别可以参考在专利US 8,900,842中描述的方法，该方法利用基于明胶的凝胶化组合物在不对称载体上储存和/或运输体外组织的细胞培养物。在US 8,900,842中，用包括明胶的培养基包覆的组织的细胞培养物，然后将明胶在15℃和25℃之间的温度凝胶化，这使得能够在相同的温度范围内运输/储存。这种方法是特别引人关注的，因为获得的胶凝化(凝胶化)是温敏可逆的。也就是说，在运输/储存后，仅通过在37℃孵育(这诱导了明胶的液化)包括细胞在内的固化组合物，就可容易地获得液化。液化使得能够对用于运输/储存的组合物进行洗涤，并用培养基替代明胶。
[0008]已经描述了利用凝胶以运输/储存细胞的其他方法，但它们通常不太引人关注，因为这些凝胶不是直接可逆以用于回收细胞的。
[0009]例如，专利US 10,655,120的方法利用了水凝胶，典型的是基于海藻酸盐的不可逆水凝胶，其需要化学分解或溶解，在复杂培养物如模型或共培养细胞的情况下，这可对细胞和细胞培养物结构有害。
[0010]还考虑使用基于琼脂糖的凝胶的方法。这些凝胶是温敏可逆的，但液化(凝胶
‑
溶胶过程)意味着高温(通常为至少50℃)与细胞的保藏不兼容。US 8,709,803中描述了这样的具体方法，其中将琼脂糖用于琼脂酶的混合物中，该琼脂酶在低温(25℃或更低，其中琼脂糖和琼脂酶的混合物一旦固化就能够进行细胞运输)失活并通过在37℃孵育升高温度而
再活化，这引起凝胶的琼脂糖酶促消化并诱导其液化。在这种方法中，也需要额外的化合物以用于回收细胞。
[0011]使用温敏可逆凝胶的现有方法、特别是US 8,900,842公开的使用明胶的方法或US 8,709,803使用的琼脂糖
‑
琼脂酶混合物的问题在于，这些方法在以下两方面都需要时间：(i)在运输/储存之前形成凝胶(“溶胶
‑
凝胶时间”)；以及(ii)在运输/储存之后使凝胶液化(“凝胶
‑
溶胶时间”)。溶胶
‑
凝胶步骤和凝胶
‑
溶胶步骤各自的持续时间通常为几个小时。

技术实现思路

[0012]专利技术目的
[0013]本专利技术的一个目的是提供一种用于体外运输和/或储存细胞的方法，该方法具有利用温敏可逆凝胶的现有方法的优势，但仅需要短的工作时间就能够形成凝胶、以及后续回收细胞，特别地，本专利技术所需要的工作时间比US 8,900,842和US 8,709,803的溶胶
‑
凝胶步骤和凝胶
‑
溶胶步骤的总持续时间更短。
[0014]在这方面，本专利技术特别旨在提供一种方法，该方法适合于运输或储存在特定载体例如Transwell型载体等不对称载体上培养或共培养的细胞，并且例如，更广泛地适合于具有特定结构的细胞培养物，例如旨在用作模型的细胞培养物。
技术实现思路

[0015][0016]本专利技术利用了一种特定的温敏可逆凝胶化组合物，在本文中被称为“组合物C”。目前专利技术人已经发现，除下文描述的其他优势以外，该组合物C以与基于例如在US 8,900,842中公开的明胶的组合物相同的方式，但以更短的溶胶/凝胶和凝胶/溶胶步骤的总持续时间，尤其使细胞适合体外运输和/或储存。
[0017]更确切而言，本专利技术的一个主题是一种用于体外储存和/或运输细胞(通常是培养的细胞或分离的细胞、并且优选培养的细胞)的方法，包括以下连续步骤：
[0018]■
步骤1：使细胞与水性温敏可逆凝胶化组合物C接触，所述组合物C为液体形式并且在水性培养基中包含：
[0019](A)选自卡拉胶、结冷胶和魔芋胶的温敏可逆凝胶化多糖；和
[0020](B)作为增稠剂的羧甲基纤维素；
[0021]■
步骤2：通过降低温度使步骤1获得的与细胞接触的组合物C温敏凝胶化，由此获得包埋细胞的水凝胶；
[0022]■
步骤3：储存和/或运输步骤2获得的包埋在水凝胶中的细胞。
[0023]在大多数情况下，本专利技术的方法在步骤3之后还包括以下附加步骤4：
[0024]■
步骤4：通过升高温度使水凝胶液化，由此释放水凝胶中的细胞。
[0025]根据另一方面，本专利技术的一个特定主题是用于上述方法的组合物C，该组合物C在水性培养基中包含：
[0026](A)选自卡拉胶、结冷胶和魔芋胶的温敏可逆凝胶化多糖；和
[0027](B)作为增稠剂的羧甲基纤维素。
具体实施方式
[0028]具体而言，根据本专利技术的组合物C基于水性培养基，该水性培养基通常是基于水的均相，该均相可以包含诸如盐或水溶性溶剂等的添加剂。基于组合物C的总重量，组合物C的水性培养基通常包含至少90重量％的水。最常见的是，基于组合物C的总重量，水性培养基包含至少95重量％、优选至少97重量％、尤其是至少98重量％的水。
[0029]通常，组合物C的水性培养基是适合于储存和/或运输细胞的培养基。本专利技术的方法的一个优势是，几乎任何种类的水性培养基都可以用作组合物C的水性培养基。根据培养基中存在的盐的性质和浓度，可以调整比率A/B，并且EDTA的存在应当是优选的，但是对于组合物C中的培养基没有技术限制。
[0030]通常，在对根据本专利技术的待运输和/或储存的细胞进行本专利技术的步骤1之前，将该细胞包埋在培养基中或由培养基包覆，在本文中将该培养基称为“初始培养基”。在大多数情况下，即使根据本专利技术不是严格需要，但本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种体外储存和/或运输细胞的方法，包括以下连续步骤：
■
步骤1：使所述细胞与水性温敏可逆凝胶化组合物C接触，所述组合物C为液体形式并且在水性培养基中包含：(B)选自卡拉胶、结冷胶和魔芋胶的温敏可逆凝胶化多糖；和(B)作为增稠剂的羧甲基纤维素
■
步骤2：通过降低温度使步骤1获得的与所述细胞接触的所述组合物C温敏凝胶化，由此获得包埋所述细胞的水凝胶；
■
步骤3：储存和/或运输步骤2获得的包埋在所述水凝胶中的所述细胞。2.根据权利要求1所述的方法，在步骤3之后还包括以下附加步骤4：
■
步骤4：通过升高温度使所述水凝胶液化，由此释放所述水凝胶中的所述细胞。3.根据权利要求1或2所述的方法，其中组合物C的所述水性培养基是适合于储存和/或运输细胞的培养基。4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中在30℃和60℃之间、优选在30℃和40℃之间的温度进行步骤1。5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中通过将温度降低至低于30℃、优选在1℃和15℃之间进行步骤2。6.根据权利要求2至5中任一项所述的方法，其中在30℃和40℃之间、优选在34℃和39℃之间的温度进行步骤...

【专利技术属性】
技术研发人员：伊莉萨，
申请(专利权)人：卢森堡理工学院，
类型：发明
国别省市：