用于抗淋病奈瑟球菌的疫苗接种的组合物和方法技术

本披露提供了用于治疗淋球菌和/或脑膜炎球菌感染的疫苗的组合物及其使用方法，这些疫苗包含来源于细菌的含有淋球菌蛋白的天然外膜囊泡(NOMV)，该淋球菌蛋白是脂蛋白或被修饰为脂蛋白。还提供了含有编码淋球菌蛋白的基因的脑膜炎球菌菌株，该淋球菌蛋白是脂蛋白或被修饰为脂蛋白。修饰为脂蛋白。修饰为脂蛋白。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于抗淋病奈瑟球菌的疫苗接种的组合物和方法
相关申请的交叉引用
[0001]本申请要求2020年10月23日提交的美国临时专利申请号63/104,819的权益，该临时专利申请的披露内容通过引用以其全文并入本文。关于联邦政府资助研究的声明
[0002]本专利技术以由美国国立卫生研究院、美国国家过敏与传染病研究所授予的授予号R01AI046464，在政府支持下完成。政府在本专利技术中享有一定的权利。序列表的并入
[0003]含有在名为“OMV0002
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401
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PC_ST25”的文件(如在Microsoft Windows操作系统中测量的为248千字节)中的序列表于2021年10月22日创建，在此以电子方式提交，并通过引用并入本文。


[0004]本披露涉及来源于细菌外膜囊泡的重组细菌和疫苗。

技术介绍

[0005]淋病奈瑟球菌(Neisseria gonorrhoeae，Ng)是一种专性人细菌病原体，最常定植于生殖道(包括女性的子宫颈、子宫和输卵管以及男性和女性两者的尿道)的粘膜表面。然而，包括直肠、鼻咽和眼睛的其他组织也可能藏有淋球菌。该细菌最常通过粘膜分泌物中个体之间的直接身体接触传播，并且可能在嗜中性粒细胞中。尽管进行了超过25年的研究，但仍没有针对Ng的许可疫苗，其每年在全球范围内导致约8000万例感染，并且在美国导致超过50万例病例。2013年至2018年，美国Ng疾病的病例数量增加了67％。在女性中，Ng感染最常发生为宫颈炎或盆腔炎性疾病，其可能导致不孕。仅约一半的受感染女性有临床表现使她们意识到感染，这导致疾病的进一步传播。受感染母亲所生的婴儿可能会患上新生儿眼炎，如果不治疗，可能导致失明。在男性中，大多数Ng感染表现为尿道炎。Ng还导致咽部和肛门直肠感染，尤其是在与男性发生性关系的男性中。在一些情况下，Ng感染可能发展为伴有菌血症的播散性感染，从而导致关节炎、心内膜炎或脑膜炎。多重抗生素耐药性使得Ng疾病的抗生素疗法的选择更少，并带来普遍耐药病原体的威胁。所有这些方面都强调了一个重大的全球公共卫生问题和对有效Ng疫苗的需求。
[0006]Ng感染不会引发保护性免疫，这可能导致多次再感染。因此，开发针对Ng的成功疫苗接种策略需要引发比自然感染更强的保护性免疫。这将取决于增加在自然感染中免疫原性差的一种或多种保护性抗原的免疫原性和/或删除提供免疫屏蔽的Ng抗原。例如，产生针对Ng还原可修饰蛋白(Rmp)的抗体的商业性的性工作者比缺乏这些抗体的性工作者接触Ng感染的可能性高3.4倍。针对Rmp和脂寡糖(LOS)变体的抗体已被证明阻断了由抗PorB介导的功能活性。然而，Nm Rmp似乎没有引发类似的封闭性抗体。因此，在Nm中表达Ng抗原以消除封闭性Rmp抗体并敲除导致不引发封闭性抗体的LOS变体的基因是有利的。
[0007]由于Ng利用了不同的免疫抑制机制，因此基于灭活细菌、外膜囊泡(OMV)或菌毛的
疫苗方法尚未成功。虽然在几种Ng重组蛋白抗原方面取得了进展，包括粘附素复合蛋白(ACP)、甲硫氨酸结合蛋白MetQ和通过蛋白质组策略发现的其他抗原，以及截短的LOS，但这些方法都没有广泛的保护性，并且可能需要新的疫苗方法来限制这种重要病原体的疾病负担。
[0008]疫苗引发的抗体可以防止细菌粘附和粘膜组织的定植，这对预防由Nm和Ng两者引起的疾病是至关重要的。Nm和Ng是专性人病原体，它们利用附着(CEACAM1、CD46)、侵袭和免疫屏蔽的机制，与人系统特异性地相互作用。由疫苗引发的抗体(例如，IgA和IgG)存在于包裹上皮细胞的分泌物中，这些上皮细胞在感染的最早阶段与Nm和Ng直接接触，并且可以防止定植和侵袭。
[0009]引发针对粘附和免疫屏蔽机制的抗体的疫苗可以通过限制个体之间的传播，在感染的初始阶段保护个体免受疾病的更晚期阶段和未接种疫苗的影响。最具成本效益和最广泛使用的疫苗为个体和社区两者提供保护。
[0010]OMVax已开发了一种基于脑膜炎奈瑟球菌(Nm)天然外膜囊泡(NOMV)的多功能疫苗平台，用于以天然构象向免疫系统呈递蛋白质抗原。天然外膜囊泡(NOMV)由脑膜炎奈瑟球菌(Neisseria meningitidis)(Nm)细菌天然形成。先前已经将疫苗菌株进行遗传修饰以：(a)过表达通常以低丰度存在的因子H结合蛋白(FHbp)，(b)表达与宿主因子H低结合的突变体FHbp来提高抗体应答，从而阻断导致FH结合的相互作用，以及(c)减弱内毒素，使得能够在没有通常用于降低反应原性的清洁剂处理的情况下使用NOMV，而且还能导致潜在保护性抗原的去除或改变。敲除LpxL1(LpxL1 KO)导致含有五酰化脂寡糖(LOS)的NOMV
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FHbp降低人外周血单核细胞(PBMC)中的细胞因子应答，这与已安全施用于数万人受试者的清洁剂提取的OMV疫苗所引发的细胞因子应答相似或更低。为了进一步增强NOMV
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FHbp疫苗的安全性，用于制备疫苗的菌株包含消除其他不期望的抗原(包括B组荚膜多糖、和LOS的衍生物)表达的另外的基因缺失，这些抗原已知与具有相似结构的人聚糖进行交叉反应。
[0011]与相当量单独的重组蛋白相比，在NOMV中存在的抗原的免疫原性大大提高。然而，产生最有效的抗体应答需要阈值水平的表达，这已经通过使用工程化的启动子产生高转录率、在细菌基因组中插入多个拷贝，并且用多拷贝质粒转化来实现。
[0012]特异性结合宿主蛋白、脂质或聚糖的抗原可能无法刺激抗体对发生结合的抗原表面的应答，因为最重要的表位可能被宿主蛋白结合所掩盖，并且因此无法被免疫识别。与宿主分子结合的抗原是疫苗特别感兴趣的，因为它们典型地在发病机制中起关键作用。
[0013]含有六酰基化脂寡糖的脑膜炎球菌OMV产生炎性应答。清洁剂提取可以降低反应原性。然而，清洁剂处理可以导致脂蛋白抗原的损失和蛋白质结构的改变。用于产生NOMV的Nm菌株具有被破坏的lpxL1基因座，导致五酰基化和六酰基化LOS的产生，从而导致内毒素活性减弱。
[0014]NOMV平台还具有增强抗体应答的佐剂特性。总的来说，基于NOMV的疫苗比相应的重组蛋白引发更高的抗体滴度和更广泛的反应性，并且可能更耐受，因为提供有效的保护性抗体应答可能需要更少的蛋白质。
[0015]在Ng中也高度保守的几种Nm蛋白已经被提议作为Ng疫苗的抗原。例如，GNA1220(99％相同；也称为NMB1220和NGO0788)与红细胞膜整合蛋白(stomatin)样蛋白家族有关。根据亚家族内的序列相似性，该家族的单个成员有几个名称。这些名称包括paraslipin或
slipin
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2、红细胞膜整合蛋白、抗增殖蛋白(prohibitin)、筏蛋白(flotillin)和HflK/C。红细胞膜整合蛋白样蛋白是古老来源的单程、寡聚膜蛋白，在生命的所有三个领域都已被鉴定。尽管在每种情况下它们的功能作用还不完全清楚，但它们大多定本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种药物疫苗组合物，其包含多个细菌天然外膜囊泡(NOMV)，这些细菌天然外膜囊泡包含至少一种来自淋病奈瑟球菌的重组蛋白，其中该淋球菌重组蛋白是脂蛋白或被修饰为脂蛋白。2.如权利要求1所述的药物疫苗组合物，其中通过消除该蛋白质中未暴露于表面的部分并向剩余的C
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末端部分添加脂蛋白信号序列来修饰该淋球菌重组蛋白，其中该淋球菌重组蛋白展示在该细菌表面上，并且NOMV作为脂蛋白由该细菌产生。3.如权利要求1或2所述的药物疫苗组合物，其中该至少一种淋球菌重组蛋白是GNA1220、MetQ、MetQSM或NHBA，或其衍生物或片段，或其组合。4.如权利要求1所述的药物疫苗组合物，其中这些NOMV来源于脑膜炎奈瑟球菌。5.如权利要求4所述的药物疫苗组合物，其中该脑膜炎球菌菌株是H44/76。6.一种脑膜炎奈瑟球菌菌株，其包含编码至少一种来自淋病奈瑟球菌的重组蛋白的至少一种基因，其中该至少一种淋球菌重组蛋白是脂蛋白或被修饰为脂蛋白。7.如权利要求6所述的脑膜炎球菌菌株，其中该至少一种淋球菌重组蛋白是GNA1220、MetQ、MetQSM或NHBA，或其衍生物或片段，或其组合。8.如权利要求7所述的脑膜炎球菌菌株，其中该至少一种淋球菌重组蛋白由质粒中的转基因表达。9.如权利要求7所述的脑膜炎球菌菌株，其中该至少一种淋球菌重组蛋白由插入该细菌基因组的转基因表达。10.如权利要求6
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9中任一项所述的脑膜炎球菌菌株，其中该脑膜炎球菌菌株是H44/76。11.如权利要求10所述的脑膜炎球菌菌株，其中该脑膜炎球菌菌株H44/76不表达孔蛋白...

【专利技术属性】
技术研发人员：G，
申请(专利权)人：OMVAX公司，
类型：发明
国别省市：