一种胸腺癌类器官培养液、培养方法与应用技术

本发明专利技术公开了一种胸腺癌类器官培养液、培养方法与应用。所述胸腺癌类器官培养液由DMEM/F12培养基、HEPES缓冲液、青霉素

【技术实现步骤摘要】
一种胸腺癌类器官培养液、培养方法与应用


[0001]本专利技术涉及生物医药
，尤其是涉及一种用于胸腺癌类器官培养的培养液、培养方法及应用。

技术介绍

[0002]胸腺癌(thymic carcinomas)是来源于胸腺上皮的一类特殊类型的恶性肿瘤。与胸腺瘤(thymomas)不同，胸腺癌组织学行为上明显表现为恶性，即存在显著的细胞异型性，不具有胸腺器官样结构，其疾病进展隐匿，侵袭性强，就诊时往往存在局部侵袭或胸膜、心包甚至远处转移，手术切除率低，其治疗方案多推荐手术、放疗、化疗结合的综合治疗。由于药物辅助治疗存在方案多样化，药物无效率高，易产生耐药，试药程序复杂等问题。
[0003]类器官(Organoid)是一种利用成体干细胞，在体外培养出的3D细胞培养物，与对应的人体器官具有高度相似的组织学特征，能重现器官的部分生理功能。利用患者离体肿瘤组织构建类器官能模拟肿瘤组织的发生过程及生理病理状态，因此，可作为研究胸腺癌的病理生物学特性以及用于(个性化)药物筛选的先进工具，在基础研究以及临床诊疗方面具有广阔的应用前景。
[0004]然而，目前还未见关于胸腺癌类器官培养的相关报道。鉴于此，有必要开发一种用于胸腺癌类器官培养的培养液、培养方法，以解决现有技术的不足。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于提供一种用于胸腺癌类器官培养的培养液、培养方法及应用。
[0006]为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：一种胸腺癌类器官培养液，所述胸腺癌类器官培养液由DMEM/F12培养基、HEPES缓冲液、青霉素
‑
链霉素、B27、N2、Glutamax、A83
‑
01、EGF、Noggin、R
‑
spondin1、N
‑
cetylcysteine、SB203580、Y
‑
27632、FGF10、IGF
‑
1和新型HGF模拟物组成；所述新型HGF模拟物的制备方法如下：1)将单价核酸适体Ap
‑
Met
‑
1和Ap
‑
Met
‑
2的干粉分别溶于默克水配成100μM的母液；2)取12μL步骤1)得到的Ap
‑
Met
‑
1母液，用含3mMMgCl2的0.1MPH7.4的PBS缓冲液稀释至40μM，置于金属浴95℃加热5min，在冰上放置半小时，得到Ap
‑
Met
‑
1溶液；取12μL步骤1)得到的Ap
‑
Met
‑
2母液，用含3mMMgCl2的0.1MPH7.4的PBS缓冲液稀释至40μM，置于金属浴95℃加热5min，在冰上放置半小时，得到Ap
‑
Met
‑
2溶液；3)将步骤2)得到的Ap
‑
Met
‑
1溶液和Ap
‑
Met
‑
2溶液以体积比1：1混合，室温震荡15min，得到二价核酸适体Ap
‑
Met
‑
1+2的溶液；4)取50μl步骤3)得到的二价核酸适体Ap
‑
Met
‑
1+2溶液，与2μL 50u/μL T4 DNA连接酶、5.8μL 10
×
T4 DNA连接酶缓冲液混合均匀，于16℃反应12h，然后75℃反应10min，得到二价环化核酸适体Ap
‑
Met
‑
1+2的溶液；
5)向步骤4)的二价环化核酸适体Ap
‑
Met
‑
1+2溶液中加入20μL 5u/μL核酸外切酶Ⅰ、1μL200u/μL核酸外切酶Ⅲ混合均匀，于37℃反应1h，然后90℃反应10min，得到外切酶处理后的Ap
‑
Met
‑
1+2溶液；6)步骤5)所得外切酶处理后的Ap
‑
Met
‑
1+2溶液，利用EasyPure PCR Purification Kit进行纯化，再使用DNA浓缩仪进行浓缩，再用0.1M PH7.4的PBS缓冲液稀释至5μM，置于金属浴95℃加热5min，在冰上放置半小时，得到新型HGF模拟物，保存于4℃冰箱备用；其中，所述单价核酸适体Ap
‑
Met
‑
1和Ap
‑
Met
‑
2的核苷酸序列如下：Ap
‑
Met
‑
1：5
’‑
P
‑
ATCAGGCTGGATGGTAGCTCGGTCGGGGTGGGTGGGTTGGCAAGTCTGATCTGTAGAAC GTTATCATA
‑
OH
‑3’
，Ap
‑
Met
‑
2：5
’‑
P
‑
ATCAGGCTGGATGGTAGCTCGGTCGGGGTGGGTGGGTTGGCAAGTCTGATTATGATAAC GTTCTACAG
‑
OH
‑3’
。
[0007]进一步的，上述胸腺癌类器官培养液中各组分及用量如下：HEPES缓冲液，终浓度为10mM；青霉素
‑
链霉素，终浓度为1X；B27，终浓度为1X；N2，终浓度为1X；Glutamax，终浓度为2mM；A83
‑
01，终浓度为0.5μM；EGF，终浓度为40ng/mL；Noggin，终浓度为100ng/mL；R
‑
spondin1，终浓度为100ng/mL；N
‑
cetylcysteine，终浓度为1mM；SB203580，终浓度为1μM；Y
‑
27632，终浓度为10μM；FGF10，终浓度为20ng/mL；IGF
‑
1，终浓度为20ng/mL；新型HGF模拟物，终浓度为500nM；其余为DMEM/F12培养基。
[0008]进一步的，上述HEPES缓冲液PH为7.2～7.4。
[0009]上述一种胸腺癌类器官培养液的制备方法，其步骤为：配制HEPES缓冲液、青霉素
‑
链霉素、B27、N2、Glutamax、A83
‑
01、EGF、Noggin、R
‑
spondin1、N
‑
cetylcysteine、SB203580、Y
‑
27632、FGF10、IGF
‑
1、新型HGF模拟物的母液，依次加入DMEM/F12培养基中，震荡混匀。
[0010]一种胸腺癌类器官的培养方法，其是采用上述的胸腺癌类器官培养液进行培养。
[0011]进一步的，上述一种胸腺癌类器官的培养方法包括以下步骤：1)获取待培养的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种胸腺癌类器官培养液，其特征在于：所述胸腺癌类器官培养液由DMEM/F12培养基、HEPES缓冲液、青霉素
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链霉素、B27、N2、Glutamax、A83
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01、EGF、Noggin、R
‑
spondin1、N
‑
cetylcysteine、SB203580、Y
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27632、FGF10、IGF
‑
1和新型HGF模拟物组成；所述新型HGF模拟物的制备方法如下：1）将单价核酸适体Ap
‑
Met
‑
1和Ap
‑
Met
‑
2的干粉分别溶于默克水配成100μM的母液；2）取12μL步骤1）得到的Ap
‑
Met
‑
1母液，用含3mM MgCl2的0.1M PH7.4的PBS缓冲液 稀释至40μM，置于金属浴95℃加热5min，在冰上放置半小时，得到Ap
‑
Met
‑
1溶液；取12μL步骤1）得到的Ap
‑
Met
‑
2母液，用含3mM MgCl2的0.1M PH7.4的PBS缓冲液稀释至40μM，置于金属浴95℃加热5min，在冰上放置半小时，得到Ap
‑
Met
‑
2溶液；3）将步骤2）得到的Ap
‑
Met
‑
1溶液和Ap
‑
Met
‑
2溶液以体积比1：1混合，室温震荡15min，得到二价核酸适体Ap
‑
Met
‑
1+2的溶液；4）取50μl步骤3）得到的二价核酸适体Ap
‑
Met
‑
1+2溶液，与2μL 50u/μL T4 DNA连接酶、5.8μL 10
×
T4 DNA连接酶缓冲液混合均匀，于16℃反应12h，然后75℃反应10min，得到二价环化核酸适体Ap
‑
Met
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1+2的溶液；5）向步骤4）的二价环化核酸适体Ap
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Met
‑
1+2溶液中加入20μL 5u/μL核酸外切酶Ⅰ、1μL 200u/μL核酸外切酶Ⅲ混合均匀，于37℃反应1h，然后90℃反应10min，得到外切酶处理后的Ap
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Met
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1+2溶液；6）步骤5）所得外切酶处理后的Ap
‑
Met
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1+2溶液，利用EasyPure PCR Purification Kit进行纯化，再使用DNA浓缩仪进行浓缩，再用0.1M PH7.4的PBS缓冲液稀释至5μM，置于金属浴95℃加热5min，在冰上放置半小时，得到新型HGF模拟物，保存于4℃冰箱备用；其中，所述单价核酸适体Ap
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Met
‑
1和Ap
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Met<...

【专利技术属性】
技术研发人员：卢钟磊，梁虹，林冬如，
申请(专利权)人：福建瑞庚生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：