热不稳定肠毒素或霍乱毒素在制备抑制致病型大肠杆菌活性制剂中的应用制造技术

本发明专利技术公开了热不稳定肠毒素或霍乱毒素在制备抑制致病型大肠杆菌活性制剂中的应用，表现为可以通过促进共生型大肠杆菌Y18J中细菌素的表达抑制致病型大肠杆菌活性，其中细菌素为大肠杆菌素B和/或大肠杆菌素M。由于热不稳定肠毒素(LT)是霍乱弧菌Inaba569B合成的霍乱毒素(CT)的近似物，本申请发现霍乱毒素同样也具有抑制致病性大肠杆菌的活性的作用，为仔猪断奶后腹泻的治疗提供了一个新的思路。猪断奶后腹泻的治疗提供了一个新的思路。猪断奶后腹泻的治疗提供了一个新的思路。

【技术实现步骤摘要】
热不稳定肠毒素或霍乱毒素在制备抑制致病型大肠杆菌活性制剂中的应用


[0001]本专利技术属于生物医药
，尤其涉及一种热不稳定肠毒素或霍乱毒素在制备抑制致病型大肠杆菌活性制剂中的应用。

技术介绍

[0002]断奶后腹泻是生猪养殖业面临的一个巨大挑战，在过往的实践生产中大量使用氧化锌进行预防和使用抗生素进行治疗。然而，由于氧化锌对环境的和细菌抗生素耐药性等的负面影响，许多国家已禁止使用氧化锌，因此，寻找替代药物变得尤为重要。
[0003]在哺乳动物肠道微生物群中，大肠杆菌是宿主出生后首批定殖在肠道中的细菌，其可能是肠道共生菌，也可能是各种疾病的诱因，其中仔猪腹泻就是由致病型大肠杆菌所引起的。肠道共生微生物群可以防止病原体的入侵与定殖，称为“定殖抵抗”。同时，病原体也已经进化出逃避共生菌抑制作用的策略。
[0004]共生型大肠杆菌Y18J是从仔猪肠道微生物中分离的一种非致病大肠杆菌，其分泌的细菌素，也叫大肠杆菌素B/M、拮抗因子B/M(Colicin B/M)对产肠毒素性大肠杆菌W25K具有抑制作用，热不稳定肠毒素(LT)是产肠毒素性大肠杆菌分泌的一种毒性蛋白，但是关于毒力因子热不稳定肠毒素在共生型大肠杆菌与致病性大肠杆菌的相互作用过程中发挥何种作用还未明确。

技术实现思路

[0005]为了克服现有技术中的技术问题，本专利技术提供一种热不稳定肠毒素或霍乱毒素在制备抑制致病型大肠杆菌活性制剂中的应用，为生猪养殖过程中抵抗断奶后仔猪的腹泻提供了新思路。
[0006]为解决上述技术问题，本专利技术提出的技术方案如下：
[0007]本专利技术第一方面提供热不稳定肠毒素或霍乱毒素在制备抑制致病型大肠杆菌活性制剂中的应用。
[0008]作为一种可选的实施方式，在本专利技术提供的应用中，所述热不稳定肠毒素或霍乱毒素通过促进共生型大肠杆菌Y18J中细菌素的表达抑制致病型大肠杆菌活性。
[0009]在相同的技术构思下，本专利技术还提供热不稳定肠毒素或霍乱毒素在制备促进共生型大肠杆菌Y18J中细菌素的表达的制剂中的应用。
[0010]作为一种可选的实施方式，在本专利技术提供的应用中，所述细菌素为大肠杆菌素B和/或大肠杆菌素M。
[0011]在相同的技术构思下，本专利技术还提供热不稳定肠毒素或霍乱毒素在制备治疗仔猪腹泻药物中的应用。
[0012]作为一种可选的实施方式，在本专利技术提供的应用中，所述热不稳定肠毒素或霍乱毒素的使用量为0.04～20μg。
[0013]本专利技术还提供一种抑制致病型大肠杆菌活性的制剂，所述制剂包括有效剂量的热不稳定肠毒素或霍乱毒素，以及药学上可接受的载体或辅料。
[0014]作为一种可选的实施方式，在本专利技术提供的抑制致病型大肠杆菌活性的制剂中，所述辅料包括赋形剂或稀释剂。
[0015]本专利技术还提供一种治疗仔猪腹泻的药物，所述药物包括有效剂量的热不稳定肠毒素或霍乱毒素，以及药学上可接受的载体或辅料。
[0016]作为一种可选的实施方式，在本专利技术提供的治疗仔猪腹泻的药物中，所述辅料包括赋形剂或稀释剂。
[0017]与现有技术相比，本专利技术的有益效果为：
[0018]本申请发现热不稳定肠毒素可以促进共生型大肠杆菌Y18J产生的细菌素的表达来抑制致病性大肠杆菌的活性。由于热不稳定肠毒素(LT)是霍乱弧菌Inaba 569B合成的霍乱毒素(CT)的近似物，本申请发现霍乱毒素同样也具有抑制致病性大肠杆菌的活性的作用，为仔猪断奶后腹泻的治疗提供了一个新的思路。
附图说明
[0019]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0020]图1为采用qRT
‑
PCR分析W25K对大肠杆菌素B/M(Colicin B/M)表达水平的影响，其中a为单独培养的Y18J的Colicin B/M基因表达水平；b为与W25K共培养的Y18J中Colicin B/M基因的表达水平；
[0021]图2为采用qRT
‑
PCR分析ST(热稳定毒素)与LT(热不稳定毒素)对Colicin B/M表达水平的影响，其中a为Y18J与W25K(ST
‑
LT
‑
)、b为Y18J与W25K(ST
+
LT
‑
)、c为Y18J与W25K(ST
‑
LT
‑
)ST
+
、d为Y18J与W25K(ST
‑
LT
+
)、e为Y18J与W25K(ST
‑
LT
‑
)LT
+
共培养时Colicin B/M基因表达水平；
[0022]图3为W25K(野生型和突变型菌株)的生长曲线；
[0023]图4为W25K对Y18J抑菌活性的影响，其中a为共培养体系中Y18J和W25K(野生型和突变型)菌落的比例；b为Y18J和W25K(野生型和突变型)在不同共培养时间的菌落；
[0024]图5为ST和LT对Y18J抑菌活性的影响，其中a为共培养体系中Y18J和W25K(ST
+
LT
‑
)或W25K(ST
‑
LT
‑
)ST
+
菌落的比例；b为共培养体系中Y18J和W25K(ST
‑
LT
+
)或W25K(ST
‑
LT
‑
)LT
+
菌落的比例；
[0025]图6为厌氧条件下共培养的Y18J和W25K突变体菌落的比例；
[0026]图7为琼脂孔扩散法表示Y18J对W25K(野生型和突变型)的抑制作用；
[0027]图8为Y18J与LTA(热不稳定毒素A亚基)和/或LTB(热不稳定毒素B亚基)回补型菌株共培养的结果，其中a为W25K(ST
‑
LT
‑
)、W25K(ST
‑
LT
‑
)LTA
+
和W25K(ST
‑
LT
‑
)LTB
+
的生长曲线；b为共培养体系中Y18J与W25K(LTA或LTB回补突变体)的比例；
[0028]图9为添加不同浓度的LT时Colicin B/M的相对基因表达水平；
[0029]图10为LT通过Colicin B/M基因影响Y18J的抑菌活性的结果，其中a
‑
d为共培养体
系中分别添加LT和水时，不同Y18J突变体和W25K(ST
‑
LT
‑
)菌落数之比，其中(a)为Y18J、(b)为Y1本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.热不稳定肠毒素或霍乱毒素在制备抑制致病型大肠杆菌活性制剂中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述热不稳定肠毒素或霍乱毒素通过促进共生型大肠杆菌Y18J中细菌素的表达抑制致病型大肠杆菌活性。3.热不稳定肠毒素或霍乱毒素在制备促进共生型大肠杆菌Y18J中细菌素的表达的制剂中的应用。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述细菌素为大肠杆菌素B和/或大肠杆菌素M。5.热不稳定肠毒素或霍乱毒素在制备治疗仔猪腹泻药物中的应用。6.根据权利...

【专利技术属性】
技术研发人员：尹佳，印遇龙，赵颖，刘丹，李梦瑶，
申请(专利权)人：湖南师范大学，
类型：发明
国别省市：