来源于草菇的抗皮肤氧化和抑制氧化应激的多肽及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种来源于草菇的抗皮肤氧化和抑制氧化应激的多肽及其应用。所述的多肽的氨基酸序列为DWPTFKAF。本发明专利技术从草菇子实体蛋白中提取并纯化多肽，通过LC

【技术实现步骤摘要】
来源于草菇的抗皮肤氧化和抑制氧化应激的多肽及其应用


[0001]本专利技术属于生物提取物
，涉及一种来源于草菇的抗皮肤氧化和抑制氧化应激的多肽及其应用。

技术介绍

[0002]在人体中过量的自由基攻击生物分子引起氧化损伤，在一定程度上对身体造成潜在的损害，会导致各种疾病的产生，如癌症、衰老、动脉粥样硬化和阿尔茨海默氏症等。多项研究表明抗氧化剂在相对较低的浓度下，能够抑制或延缓细胞的氧化损伤，对人体健康具有重要的作用。高效安全的天然抗氧化剂的研究一直是国内外研究人员关注的焦点。据报道，从天然产物中提取的抗氧化肽具有清除自由基的活性，与化学合成的药物相比，对人体的毒性和副作用较小。唯一不足的是多肽药物的口服生物利用度较低。欧阳俊芳等人指出口服生物大分子药物在胃肠道的稳定性及吸收程度非常受限，综述了脂质纳米载体对蛋白多肽药物的包载方式及其克服生理屏障的相应机制，介绍了其提高蛋白多肽药物口服生物利用度的重要特性和最新研究进展(欧阳俊芳,张永杰,陈西敬.脂质纳米载体用于口服递送蛋白多肽药物的研究进展[J].中国医药工业杂志,2022,53(09):1240
‑
1250.)。
[0003]大量研究证实，食用菌富含多种抗氧化剂，包括多糖、酚类、蛋白质、肽、类胡萝卜素、麦角甾醇、维生素C和E等。此外，与植物相比，食用菌生长速度更快，这使得它们成为相对丰富的商业天然生物活性化合物来源。裴云成等研究了杏鲍菇菇柄抗氧化肽的制备及其稳定性初步分析，其中杏鲍菇抗氧化肽的DPPH自由基清除率为55.52％
>±
0.89％，其清除率较低，抗氧化能力不强(裴云成,朱丹,崔采莲,等.杏鲍菇柄抗氧化肽的制备及其稳定性初步分析[J].食品工业科技,2020,41(4):8.)。草菇含有多种活性成分，尤其是丰富的蛋白质，但迄今为止没有关于以草菇子实体为原料制备抗氧化肽的相关报道。
[0004]人皮肤成纤维细胞(HSF)是真皮层的主要组成细胞，该细胞与细胞外基质共同作用而分泌合成的弹性蛋白、胶原蛋白、细胞因子等对于延缓皮肤衰老非常重要。但是，当皮肤老化时HSF细胞表现为数目减少、增殖能力衰退、代谢功能下降，同时分泌的胶原蛋白以及弹性蛋白含量减少、弹性纤维以及胶原纤维排列杂乱等。因此，HSF细胞增殖率，HSF细胞中胶原蛋白、弹性蛋白的含量是评价抗衰老性能非常重要的指标。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于提供一种来源于草菇的抗皮肤氧化和抑制氧化应激的多肽及其应用。
[0006]实现本专利技术目的的技术解决方案是：
[0007]来源于草菇的抗皮肤氧化和抑制氧化应激的多肽，其氨基酸序列为DWPTFKAF，即Asp
‑
Trp
‑
Pro
‑
Thr
‑
Phe
‑
Lys
‑
Ala
‑
Phe，如SEQ ID NO.1所示。
[0008]本专利技术所述的多肽在制备清除自由基的药物中的应用。
[0009]本专利技术所述的自由基为DPPH。
[0010]本专利技术所述的多肽在制备抗皮肤氧化损伤护肤品或保健品中的应用。
[0011]与现有技术相比，本专利技术具有以下优点：
[0012]本专利技术首次从草菇子实体蛋白中提取并纯化多肽，发现了多条具有良好抗氧化能力的抗氧化肽，并通过LC
‑
MS/MS确定了其中一条抗氧化肽的氨基酸序列为DWPTFKAF，经抗氧化活性检测，其DPPH自由基清除率为72.53％
±
0.12％，Fe
2+
螯合率为82.74％
±
1.06％，还原力为0.39
±
0.00，通过降低ROS水平，保护细胞膜完整性、增强内源性抗氧化酶(SOD、CAT)、增加谷胱甘肽过氧化物酶(GSH
‑
PX)活性和降低丙二醛(MDA)含量，发挥其对HSF细胞的氧化损伤保护作用，可作为天然抗氧化肽或抗氧化应激试剂，在制备清除自由基的药物、抗氧化损伤保健品和护肤品等领域具有潜在的应用前景。
附图说明
[0013]图1为通过阴离子柱的分离产物Q1、Q2。
[0014]图2为分离产物Q1、Q2的DPPH自由基清除率。
[0015]图3为通过凝胶柱分离产物G1、G2、G3、G4、G5。
[0016]图4为分离产物G1、G2、G3、G4、G5的DPPH自由基清除率。
[0017]图5为G3的TIC图谱。
[0018]图6为活性多肽的二级质谱图。
[0019]图7为活性多肽结构的预测。
[0020]图8为不同浓度的DWPTFKAF对细胞活力的影响。
[0021]图9为H2O2诱导的HSF氧化应激损伤模型。
[0022]图10为不同浓度DWPTFKAF对H2O2损伤的HSF细胞的保护作用。
[0023]图11为不同浓度DWPTFKAF对H2O2损伤的HSF细胞内SOD酶活性的影响。
[0024]图12为不同浓度DWPTFKAF对H2O2损伤的HSF细胞MDA含量的影响。
[0025]图13为不同浓度DWPTFKAF对H2O2损伤的HSF细胞内GSH
‑
Px活性的影响。
[0026]图14为不同浓度DWPTFKAF对H2O2损伤的HSF细胞CAT含量的影响。
具体实施方式
[0027]下面结合具体实施例和附图对本专利技术作进一步详述。
[0028]1.抗氧化活性的测定：
[0029]DPPH自由基清除活性(DRSA)：参照试剂盒(购买自苏州格锐思生物科技有限公司)进行测定。
[0030]2.Fe
2+
螯合率：参考(马梦娇.中华鳖肉抗氧化肽的制备及其抗衰老功能研究[D].无锡:江南大学,2020:1
‑
68)的方法测定。
[0031]3.还原力的测定：参考(Dong Y R,Qi G H,Yang Z P,et al.Preparation,separation and antioxidant properties of hydrolysates derived from Grifola frondosa protein[J].Analytical and Bioanalytical Chemistry,2015,33(6):500
‑
506)的方法测定样品的还原能力。
[0032]实施例1
[0033](1)取草菇子实体进行反复冲洗除去栽培料等杂质，沥干水分后冻干处理，再将其
打成粉末，按照双蒸水和溶质的质量比为10：1，加入双蒸水溶解草菇粉末，静置4h，4℃下8000r/min离心20min，取上清液，根据硫酸铵饱和度表使用80％饱和度，在上清液中加入硫酸铵，充分溶解后，静置12h，离心取沉淀，再将沉淀溶于双蒸水并加入透析袋中，放置于超纯水中本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.来源于草菇的抗皮肤氧化和抑制氧化应激的多肽，其特征在于，氨基酸序列为DWPTFKAF，如SEQ ID NO.1所示。2.根据权利要求1所述的多肽在制备清除自由基的...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵妍，王耀冉，陈明杰，张保生，董沁，肖婷婷，王乐，
申请(专利权)人：上海市农业科学院，
类型：发明
国别省市：